GB/T 20762-2006 畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T20762—2006

畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、

替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、

吉它霉素、交沙霉素残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Methodforthedeterminationoflincomycin,oleandomycin,

erythromycin,tilmicosin,tylosin,clindamycin,spiramycin,kitasamycin

andjosamycinresiduesinlivestockandpoultrymuscles—

LC-MS-MSmethod

2006-12-31发布2007-03-01实施

GB/T20762—2006

■1/■■1

刖a

本标准的附录A和附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学。

本标准主要起草人：庞国芳、王飞、曹彦忠、贾光群、连玉晶、张进杰、李学民、范春林、刘永明、

石玉秋。

本标准系首次发布的国家标准。

T

GB/T20762—2006

畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、

替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、

吉它霉素、交沙霉素残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

1范围

本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉

素、螺旋霉素、吉它霉素利交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉

素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限:林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它

霉素和交沙霉素均为1.0Mg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义

（GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,1DT）

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分:确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT）

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992,neISO3696：1987）

3原理

畜禽肉中九种大环内酯类抗生素（林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺

旋霉素、吉它霉素和交沙霉素）的残留用乙月青提取，提取液用正己烷去除脂肪后浓缩，再用磷酸盐溶液溶

解后，经OasisHLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定容后，供液相色谱-串联质谱法测定，内标

法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2乙睛：色谱纯。

4.3正己烷：色谱纯。

4.4甲酸鞍。

4.5磷酸氢二钠。

4.6氢氧化钠。

4.7氯化钠。

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GB/T20762—2006

4.82%氯化钠溶液：称取10.0g氯化钠(4.7),溶解于500mL水中。

4.9磷酸盐缓冲溶液：0.1mol/Lo6.0g磷酸氢二钠(4.5)溶解于450mL水中，用氢氧化钠(4.6)饱

和溶液调节pH=8,用水定容至500mL0使用前配制。

4.10甲醇+水溶液(2+3)；400mL甲醇(4.1)与600mL水混合。使用前配制。

4.11甲酸镀溶液：0.1mmol/L00.63g甲酸鞍(4.4)加水溶解至1000mL。

4.12林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素和罗

红霉素(roxithromycin)标准物质：纯度$95%。

4.13标准储备溶液：1.0mg/mLo准确称取每种标准物质(4.12)10.0mg分别放入10mL容量瓶

中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4C保存。

4.14混合标准储备溶液：10.0卩g/mL。分別吸取0.1mL各标准储备溶液(4.13)于10mL容量瓶

中，用甲醇定容至刻度。4"C保存，可使用一周。

4.15混合标准工作溶液：1.0^g/mLo吸取1.0mL混合标准储备溶液(4.14)于10mL容量瓶中，用

甲醇定容至刻度。用前配制。

4.16内标储备溶液：1.0mg/mL0准确称取10.0mg罗红霉素(4.12)于10mL容量瓶中，用甲醇溶

解定容至刻度，混匀。4°C保存。

4.17中间浓度内标溶液：10.0Mg/mLo吸取0.1mL内标储备溶液(4.16)于10mL容量瓶中，用甲

醇定容至刻度。4°C保存。

4.18内标工作溶液：1.0Mg/mL0吸取1.0mL中间浓度内标标准溶液(4.17)于10mL容量瓶中，用

甲醇定容至刻度。用前配制。

4.19基质标准T作溶液：分别吸取1.0卩1＞、2.0；zL、5.0卩L、10.0卩L、50.0ML混合标准T.作溶液

(4.15),加入10.0ij.L内标丁-作溶液(4.18),用样品空白提取液定容至1.0mL,配成1.0ng/mL、

2.0ng/mL、5.0ng/mL,10.0ng/mL、50.0ng/mL浓度系列基质标准工作溶液。用前配制”

4.20OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg,6mL,或相当者。使用前，分别用10mL甲醇、10mL

水、5mL氯化钠溶液和5mL磷酸盐缓冲溶液(4.9)活化，保持柱体湿润。

4.21滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2天平：感量0.01g,0.0001go

5.3固相萃取装置。

5.4氮气浓缩仪。

5.5具塞聚丙烯离心管:50mL0

5.6离心机。

6试样制备与保存

6.1试样的制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密

封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的

变化。

6.2试样的保存

将试样于一18C保存。

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GB/T20762—2006

7测定步骤

7.1提取

称取5g试样，精确至0.01g,置于50niL离心管（5.5）中，加入10.0卩L内标工作溶液（4.18）和

15.0mL乙月青（4.2）,于振荡器上剧烈振荡10mino以4200r/min的转速离心5min,取上清液于另一

离心管中，加入2.0g氯化钠（4.7）和10.0mL正己烷（4.3）,于振荡器上剧烈振荡10min。以

4200r/min的转速离心10min,小心吸取中间乙月青层12.0mL于另一离心管中，用氮气浓缩仪于55°C

水浴中吹至近干。

7.2净化

用7mL磷酸盐缓冲溶液（4.9）分两次溶解残液（7.1）,使样液以小于1.0mL/min的流速通过

OasisHLB固相萃取柱（4.20）。样液全部流出后，再用10mL水和5mL甲醇+水溶液（4.10）洗柱，弃

去全部流出液，固相萃取柱用真空泵抽干1h。再用10mL甲醇（4.1）洗脱于15mL锥形试管中，用氮

气浓缩仪于55C水浴中吹至近干，准确加入1.0mL甲酸镀溶液（4.11）溶解残渣。用阴性样品，按上述

步骤制备空白样品提取液。过0.2滤膜（4.21）后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3测定

7.3.1液相色谱条件

a）色谱柱:IntersilG&,3卩m,150mmX2.1mm或相当者；

b）进样量：20#L；

c）流速：0.5mL/min；

d）柱温：2（TC；

e）流动相:A；0.1mmol/L甲酸钱溶液，B：乙月青。梯度洗脱条件见表1。

表1梯度洗脱条件

时间/min流速/(mL/min)流动相A/（%）流动相B/（%）

0.00.50955

1.00.50955

6.00.504060

6.10.50595

10.00.50595

10.10.50955

20.00.50955

7.3.2质谱条件

a）离子源：电喷雾离子源；

b）扫描方式:正离子扫描；

O检测方式：多反应监测；

d）电喷雾电压：5500V；

e）雾化气压力；0.069MPa；

f）气帘气压力：0.69MPa；

g）辅助气流速：0.414MPa；

h）离子源温度：35（TC；

i）碰撞室出口电压：2.0V；

j）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2。

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GB/T20762—2006

表2九种大环内酯类抗生素定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压

被测物名称定性离子对（〃?/z）定量离子对Cm/z）碰撞气能量/V去簇电压/V

407.2/126.13750

林可霉素