GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T18979-2003

食品中黄曲霉毒素的测定

免疫亲和层析净化高效液相色谱法

和荧光光度法

Determinationaflatoxinscontentinfood-

Cleanupbyimmunoaffinitychromatogaphyanddeterminationby

high-performanceliquidchromatigraphyandfluorometer

2003-02-21发布2003-08-01实施

宙嘉kWiA*11M发布

GB/T18979-2003

月明青

本标准由北京市质量技术监督局提出。

本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位:北京市产品质量监督检验所、青岛出人境检验检疫局、国家标准物质研究中心。

本标准主要起草人:王晶、张鹏、张艺兵、邵明武。

本标准为首次发布。

GB/T18979-2003

食品中黄曲霉毒素的测定

免疫亲和层析净化高效液相色谱法

和荧光光度法

范围

本标准规定了免疫亲和层析净化一高效液相色谱法和免疫亲和层析净化一荧光光度法测定食品中

黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。

本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食

品中黄曲霉毒素的测定。

样品中黄曲霉毒素的检出限:免疫亲和层析净化一高效液相色谱法测定黄曲霉毒素B;以及黄曲霉

毒素B,,玖,G,,G。总量检出限为1kg/kg。免疫亲和层析净化一荧光光度法测定黄曲霉毒素B氏、

G,,G总量检出限为1mg/kg,酱油样品中检出限为2.5pg/kg.

2免疫亲和层析净化高效液相色谱法

2.1方法提要

试样经过甲醇一水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析

净化，此抗体对黄曲霉毒素BBz,GG:具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水

或吐温-20/PBS将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器

的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。

2.2试剂和溶液

除非另有规定，仅使用分析纯试剂、重蒸馏水。

2.2.1甲醇(CH,OH):色谱纯。

2.2.2甲醇一水((7+3):取70mL甲醇加30mL水。

2.2.3甲醇一水((8+2):取80mL甲醇加20mL水。

2.2.4甲醇一水(45+55):取45mL甲醇加55mL水。

2.2.5苯:色谱纯。

2.2.6乙睛:色谱纯。

2.2.7苯一乙睛(98+2):取2mL乙睛加98mL苯。

2.2.8抓化钠(NaCI),

2.2.9磷酸氢二钠(NaiHPO,),

2.2.10磷酸二氢钾(KHzP04).

2.2.11氯化钾(KCl)e

2.2.12PBS缓冲溶液:称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g抓化钾，用

990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000ML.

2.2.13吐温-20/PBS溶液(0.100):取1ml一吐温-20，加人PBS缓冲溶液并定容至1000mL,

2.2.14pH7.0磷酸盐缓冲溶液:取25.0mL0.2mol/L的磷酸二氢钾溶液与29.1mL0.1mol/L的

氢氧化钠溶液混匀后，稀释到100mL.

GB/T18979-2003

2.2.15黄曲霉毒素标准品(黄曲霉毒素BB2,GG):纯度)9900

2-2.16黄曲霉毒素标准储备溶液:用苯一乙睛(98+2)溶液分别配制。.100mg/mL的黄曲霉毒素B,,

B2,G,,G:标准储备液，保存于4℃备用。

2.2.17黄曲霉毒素混合标准工作液:准确移取适量的黄曲霉毒素BB2,GG:标准储备液，用苯一乙

睛(98+2)溶液稀释成混合标准工作液。

2.2.18柱后衍生溶液(0.05%碘溶液):称取。.1g碘，溶解于20mL甲醇后，加纯水定容至200mL,

以0.45jam的尼龙滤膜过滤,4℃避光保存。

2.3仪器和设备

实验室常规仪器、设备及下列各项。

2.3.1高速均质器:18000r/min-22000r/mine

2.3.2黄曲霉毒素免疫亲和柱。

2.3.3玻璃纤维滤纸:直径11cm，孔径1.5pme

2.3.4玻璃注射器:10mL,20mLa

2.3.5玻璃试管:直径12mm，长7