GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

中华人民共和国国家标准

—

GB5009.222016

食品安全国家标准

食品中黄曲霉毒素族和族的测定

BG

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

—

GB5009.222016

前言

本标准代替/—《食品中黄曲霉毒素的测定》、/—《食品中

GBT5009.222003BGBT5009.232006

1

黄曲霉毒素、、、的测定》、—《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素和

BBGGGB5009.242010MB

121211

的测定》、/—《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素、、、、、的测定液相色谱荧光

GBT232122008BBGGMM-

121212

检测法》、/—《食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光

GBT189792003

度法》、—《出口茶叶中黄曲霉毒素检验方法》、/—《牛奶和奶粉中黄曲霉

SN03391995BSNT16642005

1

毒素、、、、含量的测定》、/—《进出口油籽及粮谷中黄曲霉毒素的检验方

MBBGGSNT11012002

11212

》、—《、》、/—

法出口油籽坚果及坚果制品中黄曲霉毒素的检验方法液相色谱法

SN06371997SNT1736

《进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法高效液相色谱法》、/—《花生黄曲霉毒素

2006NYT12862007

的测定高效液相色谱法》。

B

1

/—,:

本标准与GBT5009.222003相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素族和族的测定

BG

————,;

根据GB27612011的要求增加了方法的适用范围

———增加了同位素稀释液相色谱串联质谱法为第一法;

-

———增加了高效液相色谱柱前衍生法为第二法;

-

———增加了高效液相色谱柱后衍生法为第三法;

-

———,;

修改了酶联免疫法并将方法名称更改为酶联免疫吸附筛查法

———增加了免疫亲和柱以及酶联免疫试剂盒质量判定要求与方法;

———修改了测定组分为黄曲霉毒素族和族化合物。

BG

Ⅰ

—

GB5009.222016

食品安全国家标准

食品中黄曲霉毒素族和族的测定

BG

1范围

本标准规定了食品中黄曲霉毒素B、黄曲霉毒素B、黄曲霉毒素G、黄曲霉毒素G(以下简称

1212

、、和)的测定方法。

AFTBAFTBAFTGAFTG

1212

,、、

本标准第一法为同位素稀释液相色谱串联质谱法适用于谷物及其制品豆类及其制品坚果及籽

-

、、、、、

类油脂及其制品调味品婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中和

AFTBAFTBAFTGAFTG

1212

的测定。

,、、、

本标准第二法为高效液相色谱柱前衍生法适用于谷物及其制品豆类及其制品坚果及籽类油

-

、、、、

脂及其制品调味品婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中和的

AFTBAFTBAFTGAFTG

1212

测定。

,、、、

本标准第三法为高效液相色谱柱后衍生法适用于谷物及其制品豆类及其制品坚果及籽类油

-

、、、、

脂及其制品调味品婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中和的

AFTBAFTBAFTGAFTG

1212

测定。

,、、、

本标准第四法为酶联免疫吸附筛查法适用于谷物及其制品豆类及其制品坚果及籽类油脂及其

、、。

制品调味品婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB的测定

1

,、、、、

本标准第五法为薄层色谱法适用于谷物及其制品豆类及其制品坚果及籽类油脂及其制品调

味品中AFTB的测定。

1

第一法同位素稀释液相色谱串联质谱法

-

2原理

、、、,

试样中的黄曲霉毒素黄曲霉毒素黄曲霉毒素黄曲霉毒素用乙腈水溶液或甲醇水

BBGG--

1212

,()(

溶液提取提取液用含1%TritonX-100或吐温-20的磷酸盐缓冲溶液稀释后必要时经黄曲霉毒素固

),,、,

相净化柱初步净化通过免疫亲和柱净化和富集净化液浓缩定容和过滤后经液相色谱分离串联质

,。

谱检测同位素内标法定量

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():。

3.1.1乙腈CHCN色谱纯

3

():。

3.1.2甲醇CHOH色谱纯

3

():。

3.1.3乙酸铵CHCOONH色谱纯

34

氯化钠()。

3.1.4NaCl

1

—

GB5009.222016

磷酸氢二钠()。

3.1.5NaHPO

24

磷酸二氢钾()。

3.1.6KHPO

24

氯化钾()。

3.1.7KCl

盐酸()。

3.1.8HCl

[()](,)。

3.1.9TritonX-100CHOCHO或吐温-20CHO

142224n5811426

3.2试剂配制

(/):,,。

3.2.1乙酸铵溶液5mmolL称取0.39g乙酸铵用水溶解后稀释至1000mL混匀

():,。

乙腈水溶液取乙腈加入水混匀

3.2.2-84+16840mL160mL

():,。

甲醇水溶液取甲醇加入水混匀

3.2.3-70+30700mL300mL

():,。

乙腈水溶液取乙腈加入水混匀

3.2.4-50+5050mL50mL

():,。

乙腈甲醇溶液取乙腈加入甲醇混匀

3.2.5-50+5050mL50mL

:,,。

3.2.610%盐酸溶液取1mL盐酸用纯水稀释至10mL混匀

():、(

3.2.7磷酸盐缓冲溶液以下简称PBS称取8.00g氯化钠1.20g磷酸氢二钠或2.92g十二水磷酸

)、、,,,

氢二钠磷酸二氢钾氯化钾用水溶解用盐酸调节至加水稀释

0.20g0.20g900mLpH7.4±0.1

至1000mL。

():(),。

或吐温的取或吐温用稀释至

3.2.81%TritonX-100-20PBS10mLTritonX-100-20PBS1000mL

3.3标准品

(,:):,

3.3.1AFTB标准品CHOCAS1162-65-8纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的

117126

标准物质。

(,:):,

3.3.2AFTB标准品CHOCAS7220-81-7纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的

217146

标准物质。

(,:):,

3.3.3AFTG标准品CHOCAS1165-39-5纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的

117127

标准物质。

(,:):,

3.3.4AFTG标准品CHOCAS7241-98-7纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的

217147

标准物质。

13(,:):,/。

3.3.5同位素内标C-AFTBCHOCAS157449-45-0纯度≥98%浓度为0.5mL

17117126μg

13(,:):,/。

3.3.6同位素内标C-AFTBCHOCAS157470-98-8纯度≥98%浓度为0.5mL

17217146μg

13(,:):,/。

3.3.7同位素内标C-AFTGCHOCAS157444-07-9纯度≥98%浓度为0.5mL

17117127μg

13(,:):,/。

3.3.8同位素内标C-AFTGCHOCAS157462-49-7纯度≥98%浓度为0.5mL

17217147μg

:。

注标准物质可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液

3.4标准溶液配制

(/):、、(),

标准储备溶液分别称取和精确至

3.4.110mLAFTBAFTBAFTGAFTG1m0.01m

μg1212gg

。/。,

用乙腈溶解并定容至100mL此溶液浓度约为10mL溶液转移至试剂瓶中后在-20℃下避光保

μg

,。()。

存备用临用前进行浓度校准校准方法参见附录A

(/):(/)

混合标准工作液准确移取混合标准储备溶液至容

3.4.2100nmL1.0mL1.00mL100mL

gμg

,。,。

量瓶中乙腈定容此溶液密封后避光-20℃下保存三个月有效

131313

(/):/、、

3.4.3混合同位素内标工作液100nmL准确移取0.5mLC-AFTBC-AFTBC-

gμg17117217

13

,。,。

和各用乙腈定容至在下避光保存备用

AFTGC-AFTG2.00mL10mL-20℃

1172

:(/)、、、、

3.4.4标准系列工作溶液准确移取混合标准工作液100nmL10L50L100L200L

gμμμμ

、、,/,

至容量瓶中加入的同位素内标工作液用初始流

500L800L1000L10mL200L100nmL

μμμμg

,/、/、/、/、/、/、

动相定容至刻度配制浓度点为0.1nmL0.5nmL1.0nmL2.0nmL5.0nmL8.0nmL

gggggg

2

—

GB5009.222016

/的系列标准溶液。

10.0nmL

g

4仪器和设备

4.1匀浆机。

4.2高速粉碎机。

4.3组织捣碎机。

/。

4.4超声波涡旋振荡器或摇床

:。

4.5天平感量0.01g和0.00001g

4.6涡旋混合器。

://。

4.7高速均质器转速6500rmin~24000rmin

:/。

4.8离心机转速≥6000rmin

:、、。

4.9玻璃纤维滤纸快速高载量液体中颗粒保留1.6m

μ

()。

4.10固相萃取装置带真空泵

4.11氮吹仪。

:。

液相色谱串联质谱仪带电喷雾离子源

4.12-

4.13液相色谱柱。

:,,(

4.14免疫亲和柱AFTB柱容量≥200nAFTB柱回收率≥80%AFTG的交叉反应率≥80%验

1g12

证方法参见附录B)。

:。

注对于不同批次的亲和柱在使用前需进行质量验证

():

4.15黄曲霉毒素专用型固相萃取净化柱或功能相当的固相萃取柱以下简称净化柱对复杂基质样

品测定时使用。

:(,)。

4.16微孔滤头带0.22m微孔滤膜所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象方可使用

μ

筛网:试验筛孔径。

4.171mm~2mm

4.18H计。

p

5分析步骤

,、,

使用不同厂商的免疫亲和柱在样品上样淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同应该按照供应

商所提供的操作说明书要求进行操作。

:。()、

警示整个分析操作过程应在指定区域内进行该区域应避光直射阳光具备相对独立的操作台

。,。

和废弃物存放装置在整个实验过程中操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施

5.1样品制备

(、、)

5.1.1液体样品植物油酱油醋等

,、(),

采样量需大于对于袋装瓶装等包装样品需至少采集个包装同一批次或号将所有液体

1L3

,()。

样品在一个容器中用匀浆机混匀后其中任意的100mL样品进行检测

g

(、、)

5.1.2固体样品谷物及其制品坚果及籽类婴幼儿谷类辅助食品等

,,,,

采样量需大于1kg用高速粉碎机将其粉碎过筛使其粒径小于2mm孔径试验筛混合均匀后缩

,,,。

分至100g储存于样品瓶中密封保存供检测用

(、)

5.1.3半流体腐乳豆豉等

(),、(),

采样量需大于对于袋装瓶装等包装样品需至少采集个包装同一批次或号用组织

1kL3

g

3

—

GB5009.222016

,,,。

捣碎机捣碎混匀后储存于样品瓶中密封保存供检测用

5.2样品提取

5.2.1液体样品

5.2.1.1植物油脂

(),()

称取5g试样精确至0.01g于50mL离心管中加入100L同位素内标工作液3.4.3振荡混合

μ

。()(),,/

后静置加入乙腈水溶液或甲醇水溶液涡旋混匀置于超声波涡

30min20mL-84+16-70+30

(),/,。

旋振荡器或摇床中振荡或用均质器均质在下离心取上清液备用

20min3min6000rmin10min

、

5.2.1.2酱油醋

(),

称取5g试样精确至0.01g于50mL离心管中加入125L同位素内标工作液振荡混合后静置

μ

。(),,/

30min用乙腈或甲醇定容至25mL精确至0.1mL涡旋混匀置于超声波涡旋振荡器或摇床中振

(),/(),

荡20min或用均质器均质3min在6000rmin下离心10min或均质后玻璃纤维滤纸过滤取上

清液备用。

5.2.2固体样品

5.2.2.1一般固体样品

(),

称取5g试样精确至0.01g于50mL离心管中加入100L同位素内标工作液振荡混合后静置

μ

。()(),,/

加入乙腈水溶液或甲醇水溶液涡旋混匀置于超声波涡旋振

30min20.0mL-84+16-70+30

(),/(

荡器或摇床中振荡20min或用均质器均质3min在6000rmin下离心10min或均质后玻璃纤维

),。

滤纸过滤取上清液备用

5.2.2.2婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品

(),

称取5g试样精确至0.01g于50mL离心管中加入100L同位素内标工作液振荡混合后静置

μ

。()(),,/

加入乙腈水溶液或甲醇水溶液涡旋混匀置于超声波涡旋振

30min20.0mL-50+50-70+30

(),/(

荡器或摇床中振荡20min或用均质器均质3min在6000rmin下离心10min或均质后玻璃纤维

),。

滤纸过滤取上清液备用

5.2.3半流体样品

(),

称取试样精确至于离心管中加入同位素内标工作液振荡混合后静置

50.0150mL100L

ggμ

。()(),/

加入乙腈水溶液或甲醇水溶液置于超声波涡旋振荡器或摇床

30min20.0mL-84+16-70+30

(),/(),

中振荡20min或用均质器均质3min在6000rmin下离心10min或均质后玻璃纤维滤纸过滤

取上清液备用。

5.3样品净化

5.3.1免疫亲和柱净化

5.3.1.1上样液的准备

,()(

准确移取上清液加入或吐温的使用甲醇水溶液提取

4mL46mL1%TritionX-100-20PBS-

),。

时可减半加入混匀

5.3.1.2免疫亲和柱的准备

将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

4

—

GB5009.222016

5.3.1.3试样的净化

,,,

待免疫亲和柱内原有液体流尽后将上述样液移至50mL注射器筒中调节下滴速度控制样液以

//。,,

1mLmin~3mLmin的速度稳定下滴待样液滴完后往注射器筒内加入2×10mL水以稳定流速

。,。,

淋洗免疫亲和柱待水滴完后用真空泵抽干亲和柱脱离真空系统在亲和柱下部放置10mL刻度

,,,//

试管取下50mL的注射器筒加入2×1mL甲醇洗脱亲和柱控制1mLmin~3mLmin的速度下

,,。,

滴再用真空泵抽干亲和柱收集全部洗脱液至试管中在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干加

,,,。

入1.0mL初始流动相涡旋30s溶解残留物0.22m滤膜过滤收集滤液于进样瓶中以备进样

μ

(、)

5.3.2黄曲霉毒素固相净化柱和免疫亲和柱同时使用对花椒胡椒和辣椒等复杂基质

5.3.2.1净化柱净化

,,。

移取适量上清液按净化柱操作说明进行净化收集全部净化液

5.3.2.2免疫亲和柱净化

,()[

用刻度移液管准确吸取上述净化液加入或吐温的使用甲

4mL46mL1%TritionX-100-20PBS

,()],。。

醇水溶液提取时加入或吐温的混匀按和处理

-23mL1%TritionX-100-20PBS5.3.1.25.3.1.3

:()()。

注全自动在线或半自动离线的固相萃取仪器可优化操作参数后使用

5.4液相色谱参考条件

液相色谱参考条件列出如下:

)::/;:();

流动相相乙酸铵溶液相乙腈甲醇溶液

aA5mmolLB-50+50

)梯度洗脱:(),(),(),

b32%B0min~0.5min45%B3min~4min100%B4.2min~4.8min

();

32%B5.0min~7.0min

):(,;),;

c色谱柱C柱柱长100mm柱内径2.1mm填料粒径1.7m或相当者