GB 5009.255-2016 食品安全国家标准 食品中果聚糖的测定

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中华人民共和国国家标准

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GB5009.2552016

食品安全国家标准

食品中果聚糖的测定

2016-08-31发布2016-09-20实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

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GB5009.2552016

食品安全国家标准

食品中果聚糖的测定

1范围

本标准规定了食品中果聚糖含量的离子色谱法测定方法。

、、、、

本标准适用于乳及乳制品婴幼儿配方食品婴幼儿谷类辅助食品固体饮料配制酒中单独添加的

、。

低聚果糖多聚果糖或菊粉含量的测定

2原理

,,

试样经热水浸提样液中的蔗糖经蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖葡萄糖和果糖经硼氢化钠还原成相

,。,

应的糖醇多余的硼氢化钠用乙酸中和样液中的果聚糖经过果聚糖酶水解成果糖和葡萄糖经离子色

,,。

谱脉冲安培检测器测定果糖含量通过换算系数折算得到果聚糖的含量

-

3试剂和材料

3.1试剂

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1.1氢氧化钠()。

NaOH

3.1.2马来酸()。

CHO

444

:,。

3.1.3蔗糖酶来源于酵母酶活力≥300U

3.1.4硼氢化钠()。

NaBH4

3.1.5冰乙酸()。

CHCOOH

3

三水乙酸钠(·)。

3.1.6CHCOONa3HO

32

:,。

3.1.7果聚糖酶来源于黑曲霉酶活力≥10000U

():。

3.1.850%氢氧化钠溶液NaOH色谱纯

():。

3.1.9无水乙酸钠CHCOONa纯度≥99.0%

3

():。

3.1.10氮气N2纯度≥99.9%

3.2试剂配制

(/):(),,

3.2.1氢氧化钠溶液1molL称取40g氢氧化钠精确至0.01g溶于水并稀释至1000mL室温

下可放置个月。

2

(/,):()

3.2.2马来酸钠缓冲溶液100mmolLH6.5称取1.16马来酸精确至0.01于150mL烧杯

pgg

,,/,。,

中加入约70mL水溶解用1molL氢氧化钠溶液调节pH6.5用水稀释至100mL4℃保存可放

置个月。

3

(/):(),

3.2.3蔗糖酶溶液4.5UmL将蔗糖酶活力为300U溶解于66mL马来酸钠缓冲溶液分装到

,,。。

2mL的离心管中-20℃保存可放置6个月使用前需测定酶活力

(/):(),,

3.2.4氢氧化钠溶液50mmolL称取2g氢氧化钠精确至0.01g溶于水并稀释至1000mL室

1

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GB5009.2552016

温下可放置个月。

2

(/):(),

3.2.5硼氢化钠溶液10mmL准确称取适量硼氢化钠精确至0.001于聚丙烯离心管中用

gg

/,/,。

50mmolL氢氧化钠溶液溶解最终质量浓度为10mmL用时现配

g

(/):,,,。

乙酸溶液吸取冰乙酸用水稀释至保存可放置个月

3.2.6200mmolL0.6mL50mL4℃2

(/):(),,

3.2.7乙酸钠溶液200mmolL称取1.36g三水乙酸钠精确至0.01g溶于水并稀释至50mL

,。

保存可放置个月

4℃2

():,

3.2.8乙酸钠缓冲溶液pH4.5吸取14mL乙酸溶液和11mL乙酸钠溶液混合并用水稀释至

,。

50mL用时现配

(/):(),

3.2.9果聚糖酶溶液455UmL将果聚糖酶活力为10000U溶解于22mL乙酸钠缓冲溶液分装

,,。。

到的离心管中保存可放置个月使用前需测定酶活力

2mL-20℃6

(/):,,

3.2.10氢氧化钠溶液200mmolL取10.4mL50%氢氧化钠溶液用水稀释至1000mL通入氮气

,,。

保护缓慢摇匀室温下可放置7d

(/)(/):(

3.2.11氢氧化钠150mmolL乙酸钠500mmolL混合溶液称取41g无水乙酸钠精确至

),,,,,

0.01g用约500mL水溶解0.22m滤膜过滤脱气10min加入7.8mL50%氢氧化钠溶液并用水

μ

,,,。

稀释至1000mL通入氮气保护缓慢摇匀室温下可放置7d

3.3标准物质

():。

果糖标准物质CHO纯度≥99.0%

6126

3.4标准溶液的配制

(/):()

3.4.1果糖贮备溶液2000mL准确称取0.05精确至0.1m80℃烘干至恒重的果糖标准物质

ggg

,,,,,,

于50mL烧杯中加入约10mL热水待果糖溶解后冷却至室温用水稀释至25mL容量瓶中摇匀

,。

保存可放置个月

4℃1

(/):,,。

3.4.2果糖中间溶液80.0mL吸取果糖贮备溶液1mL用水稀释至25mL容量瓶中用时现配

g

:,/、/、

3.4.3果糖标准曲线工作溶液取适量果糖中间溶液用水配制成质量浓度为0.800mL1.60mL

gg

/、/、/的标准曲线工作溶液。

4.00mL8.00mL16.0mL

ggg

3.5材料

:,,。

3.5.1净化柱反相固相萃取柱填料为苯乙烯二乙烯基苯2.5mL

:,。

3.5.2微孔滤膜水相0.22m

μ

4仪器和设备

:,,。

4.1离子色谱仪配有三元及以上梯度泵脉冲安培检测器Au工作电极

:、。

4.2天平感量为0.1m0.001和0.01

ggg

:。

4.3H计精度为0.01H

pp

4.4旋涡振荡器。

:。

4.5恒温水浴摇床控温精度±1℃

:/。

4.6离心机转速≥3000rmin

2

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GB5009.2552016

5分析步骤

5.1试样制备

5.1.1试样预处理

:“”,,。

固体样品用四分法缩分至约200g样品经粉碎机粉碎混匀备用

:,,。

液体样品将试样装入能够容纳倍试样体积的带盖容器中摇匀备用

2

5.1.2提取

(,),

准确称取1~5精确至0.001至少含有果聚糖5m试样于150mL锥形瓶中加入80℃±

gggg

,,/,,,

1℃热水约50mL置于80℃±1℃恒温水浴摇床中150rmin振摇15min后取出冷却至室温转

,,,,,

移至100mL容量瓶中用水分三次冲洗锥形瓶定容摇匀溶液经滤纸过滤或者离心滤液或上清液

,。

依据标准曲线的线性范围确定稀释倍数备用

,,

取上述备用样液于具塞玻璃试管中估算样液中可能的蔗糖含量按照每毫克蔗糖

200L10mL

μ

,,,/,

加入300L蔗糖酶溶液旋涡振荡混匀置于40℃±1℃恒温水浴摇床中150rmin振摇60min后

μ

,,,/

加入300L硼氢化钠溶液旋涡振荡混匀置于40℃±1℃恒温水浴摇床中150rmin振摇30min

μ

,,。,。,

后取出冷却至室温加入750L乙酸溶液静置10min估算样液中可能的果聚糖含量按照每毫

μ

,,,/

克果聚糖加入1.2mL果聚糖酶溶液旋涡振荡混匀置于40℃±1℃恒温水浴摇床中150rmin振摇

,,。,,,。

30min后取出冷却至室温转移至10mL容量瓶中用水分三次冲洗玻璃试管定容摇匀

,,,

活化净化柱试样溶液依次通过水相滤膜和净化柱弃去前面倍柱体积洗脱液收集后

0.22m3

μ

。。

面洗脱液待测同时做试剂空白试验

5.2仪器参考条件

5.2.1仪器参考条件1

:。

色谱柱可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换色谱柱

::;:(/);:(/)(/)

淋洗液水氢氧化钠溶液氢氧化钠乙酸钠

AB200mmolLC150mmolL500mmolL

。。

混合溶液梯度洗脱条件见表1

表1梯度洗脱条件

淋洗液

时间流速

%曲线

/

minmLmin

ABC

0~201.080200线性

20.1~301.000100线性

30.1~401.001000线性

40.1~501.0