GB 5009.204-2014 食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定

中华人民共和国国家标准

GB5009.204—2014

食品安全国家标准

食品中丙烯酰胺的测定

2014-12-01发布2015-05-01实施

GB5009.204—2014

前言

本标准代替GB/T5009.204－2005《食品中丙烯酰胺含量的测定方法气相色谱一质谱（GC-MS）法》。

本标准与GB/T5009.204－2005相比，主要变化如下：

——增加第一法稳定性同位素稀释的液相色谱-质谱/质谱法；

——气相色谱-质谱法将外标法改为稳定性同位素稀释法。

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GB5009.204—2014

食品安全国家标准

食品中丙烯酰胺的测定

1范围

本标准规定了食品中丙烯酰胺的测定方法。

本标准适用于热加工（如煎、炙烤、焙烤等）食品中丙烯酰胺的测定。

第一法稳定性同位素稀释的液相色谱-质谱/质谱法

2原理

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本标准应用稳定性同位素稀释技术，在试样中加入C标记的丙烯酰胺内标溶液，以水为提取溶剂，

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经过固相萃取柱或基质固相分散萃取净化后，以液相色谱-质谱/质谱的多反应离子监测(MRM)或选择反

应监测(SRM)进行检测，内标法定量。

3试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1甲酸(HCOOH)：色谱纯。

3.1.2甲醇(CHOH)：色谱纯。

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3.1.3正己烷(n-CH)：分析纯，重蒸后使用。

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3.1.4乙酸乙酯(CHCOOCH)：分析纯，重蒸后使用。

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3.1.5无水硫酸钠(NaSO)：400℃，烘烤4h。

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3.1.6硫酸铵[(NH)SO]。

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3.1.7硅藻土：ExtrelutTM20或相当产品。

3.2标准品

3.2.1丙烯酰胺(CH=CHCONH)标准品（纯度>99%）。

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3.2.2C-丙烯酰胺（CH2=CHCONH）标准品（纯度>98%）。

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3.3标准溶液的配制

3.3.1丙烯酰胺标准溶液的配制

3.3.1.1丙烯酰胺标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解并定容，使丙

烯酰胺浓度为1000mg/L，置﹣20℃冰箱中保存。

3.3.1.2丙烯酰胺中间溶液（100mg/L）：移取丙烯酰胺标准储备溶液1mL，加甲醇稀释至10mL，使

丙烯酰胺浓度为100mg/L，置﹣20℃冰箱中保存。

3.3.1.3丙烯酰胺工作溶液Ⅰ（10mg/L）：移取丙烯酰胺中间溶液1mL，用0.1%甲酸溶液稀释至

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GB5009.204—2014

10mL，使丙烯酰胺浓度为10mg/L。临用时配制。

3.3.1.4丙烯酰胺工作溶液Ⅱ（1mg/L）：移取丙烯酰胺工作溶液Ⅰ1mL，用0.1%甲酸溶液稀释至

10mL,，使丙烯酰胺浓度为1mg/L。临用时配制。

3.3.213C-丙烯酰胺内标溶液

3

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3.3.2.1C-丙烯酰胺内标储备溶液（1000mg/L）：准确称取C-丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解并

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13

定容，使C-丙烯酰胺浓度为1000mg/L，置﹣20℃冰箱保存。

3

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3.3.2.2内标工作溶液（10mg/L）：移取内标储备溶液1mL，用甲醇稀释至100mL，使C-丙烯酰

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胺浓度为10mg/L，置﹣20℃冰箱保存。

3.3.3标准曲线工作溶液

取6个10mL容量瓶，分别移取0.1mL、0.5mL、1mL丙烯酰胺工作溶液II（1mg/L）和0.5mL、

1mL和3mL丙烯酰胺工作溶液I（10mg/L）与内标工作溶液（10mg/L）0.1mL，用0.1%甲酸溶液稀

释至刻度。标准系列溶液中丙烯酰胺的浓度分别为10μg/L、50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000

μg/L、3000μg/L，内标浓度为100μg/L。临用时配制。

4仪器和设备

4.1液相色谱-质谱/质谱联用仪（LC-MS/MS）。

4.2HLB固相萃取柱：6mL、200mg，或相当产品。

4.3BondElut-Accucat固相萃取柱：3mL、200mg，或相当产品。

4.4组织粉碎机。

4.5旋转蒸发仪。

4.6氮气浓缩器。

4.7振荡器。

4.8玻璃层析柱：柱长30cm，柱内径1.8cm。

4.9涡旋混合器。

4.10超纯水装置。

4.11分析天平：感量为0.1mg。

4.12离心机：转速≤10000r/m。

5分析步骤

5.1试样制备

5.1.1样品提取

取50g试样，经粉碎机粉碎，﹣20℃冷冻保存。准确称取试样1g～2g（精确到0.001g），加入10

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mg/LC-丙烯酰胺内标工作溶液10μL（或20μL），相当于100ng（或200ng）的C-丙烯酰胺内标，

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再加入超纯水10mL，振摇30min后，于4000r/m离心10min，取上清液待净化。

5.1.2样品净化

注：任选下列一种方法进行净化。

5.1.2.1基质固相分散萃取方法（选择1）：在试样提取的上清液中加入硫酸铵15g，振荡10min，使

其充分溶解，于4000r/m离心10min，取上清液10mL，备用。如上清液不足10mL，则用饱和硫酸铵

补足。取洁净玻璃层析柱，在底部填少许玻璃棉并压紧，依次填装10g无水硫酸钠、2g硅藻土。称取

5g硅藻土ExtrelutTM20与上述试样上清液搅拌均匀后，装入层析柱中。用70mL正己烷淋洗，控制流

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速为2mL/min，弃去正己烷淋洗液。用70mL乙酸乙酯洗脱丙烯酰胺，控制流速为2mL/min，收集乙

酸乙酯洗脱溶液，并在45℃水浴中减压旋转蒸发至近干，用乙酸乙酯洗涤蒸发瓶残