GB 5009.240-2016 食品安全国家标准 食品中伏马毒素的测定

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中华人民共和国国家标准

—

GB5009.2402016

食品安全国家标准

食品中伏马毒素的测定

2016-08-31发布2016-09-20实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

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GB5009.2402016

前言

本标准代替/—《粮油检验玉米及其制品中伏马毒素含量测定免疫亲和柱净

GBT252282010

化高效液相色谱法和荧光光度法》、/—《进出口食品中伏马毒素残留量检测方法酶

SNT19582007B

1

联免疫吸附法》、/—《进出口粮谷中伏马毒素检验方法高效液相色谱法》。

SNT15722005

,:

本标准将以上标准进行了整合主要修订如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中伏马毒素的测定

———伏马毒素种类增加为伏马毒素、、三种;

BBB

123

———增加了免疫亲和柱净化柱后衍生液相色谱法作为第一法;

-

———增加了液相色谱串联质谱法作为第二法;

-

———取消荧光光度法;

———改变了样品提取溶液;

———改变了免疫亲和柱净化柱前衍生高效液相色谱法流动相的组成。

-

Ⅰ

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GB5009.2402016

食品安全国家标准

食品中伏马毒素的测定

1范围

、、(、、)

本标准规定了玉米及其制品中伏马毒素伏马毒素伏马毒素以下简写为

BBBFBFBFB

123123

的测定方法。

,,

本标准第一法为柱后衍生液相色谱法第二法为液相色谱串联质谱联用法第三法为柱前衍生液

-

,。

相色谱法适用于玉米及其制品中伏马毒素的测定

第一法免疫亲和柱净化柱后衍生高效液相色谱法

-

2原理

,,、、

样品用乙腈水溶液提取经稀释后过免疫亲和柱净化去除脂肪蛋白质色素及碳水化合物等干

-

。,,。

扰物质经高效液相色谱分离后柱后邻苯二甲醛衍生荧光检测外标法定量

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法使用的试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():。

3.1.1甲醇CHOH色谱纯

3

():。

3.1.2乙腈CHCN色谱纯

3

乙酸()。

3.1.3CHCOOH

3

氢氧化钠()。

3.1.4NaOH

氯化钠()。

3.1.5NaCl

磷酸氢二钠()。

3.1.6NaHPO

24

磷酸二氢钾()。

3.1.7KHPO

24

氯化钾()。

3.1.8KCl

硼砂(·)。

3.1.9NaBO10HO

2472

巯基乙醇()。

3.1.102-CHOS

26

邻苯二甲醛(,)。

3.1.11OPACHO

862

吐温()。

3.1.12-20CHO

5811426

3.2溶液配制

():,,。

3.2.1甲酸水溶液0.1%吸取1mL甲酸加入到999mL水中混合均匀

():,。

乙腈水溶液分别量取乙腈和水混合均匀

3.2.2-50+50500mL500mL

():,。

乙腈水溶液分别量取乙腈和水混合均匀

3.2.3-20+80200mL800mL

1

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—

GB5009.2402016

():,,。

甲醇乙酸溶液吸取乙酸加入到甲醇中混合均匀

3.2.4-98+22mL98mL

(/):,,。

3.2.5氢氧化钠溶液1molL准确称取氢氧化钠4.0g溶于100mL水混合均匀

():、、、,

3.2.6磷酸盐缓冲液PBS称取8.0g氯化钠1.2g磷酸氢二钠0.2g磷酸二氢钾0.2g氯化钾用

,,,。

水溶解用盐酸调整至用水稀释至混合均匀

980mLpH7.41000mL

/():,(),

3.2.7吐温-20PBS溶液0.1%吸取1mL吐温-20加入磷酸盐缓冲液3.2.6并稀释至1000mL

混合均匀。

(/,):,,

3.2.8硼砂溶液0.05molLH10.5称取硼砂19.1溶于980mL水中用氢氧化钠溶液调H至

pgp

,,。

10.5用水稀释至1000mL混合均匀

:,,(/,)()

3.2.9衍生溶液称取2.0邻苯二甲醛溶于20mL甲醇中用硼砂溶液0.05molLH10.53.2.8稀

gp

,,,,。

释至加入巯基乙醇混匀装入棕色瓶中现用现配

500mL2-500L

μ

3.3标准品

(,),,。

3.3.1伏马毒素BFBCHNO纯度≥95%或有证标准溶液

11345915

(,),,。

3.3.2伏马毒素BFBCHNO纯度≥95%或有证标准溶液

22345914

(,),,。

3.3.3伏马毒素BFBCHNO纯度≥95%或有证标准溶液

33345914

3.4标准溶液配制

(/):、、()

标准储备溶液分别准确称取各精确至至小烧杯

3.4.10.1mmLFBFBFB0.010.0001

g123gg

,(),,。

中用乙腈水溶液溶解并转移至容量瓶中定容至刻度此溶液密封后避光保

-3.2.2100mL-20℃

。。

存有效期个月

6

:、

混合标准溶液准确吸取标准储备液和标准储备液至同一

3.4.2FB1mLFBFB0.5mL10mL

123

,(),/、/

容量瓶中加乙腈水溶液稀释至刻度得到浓度为和浓度为

-3.2.2FB10mLFBFB5mL

1μg23μg

。,/、/

的混合标准溶液再稀释倍得到浓度为和浓度为的混合标准

10FB1mLFBFB0.5mL

1μg23μg

。,。

溶液此溶液密封后避光保存有效期个月

4℃6

:,(),

混合标准工作溶液准确吸取混合标准溶液用乙腈水溶液稀释配制成浓度依次

3.4.3-3.2.3FB

1

为/、/、/、/、/、/,和浓度依次为

20nmL80nmL160nmL240nmL320nmL400nmLFBFB

gggggg23

/、/、/、/、/、/的系列混合标准工作溶液。

10nmL40nmL80nmL120nmL160nmL200nmL

gggggg

4仪器和设备

,。

4.1高效液相色谱仪带荧光检测器

4.2柱后衍生系统。

:。

4.3天平感量0.01g和0.0001g

4.4均质器。

4.5振荡器。

4.6氮吹仪。

:/。

4.7离心机转速≥4000rmin

(,)()。

4.8免疫亲和柱柱容量≥5000nFB柱回收率≥80%柱容量及柱回收率验证方法参见附录B

g1

:。

注对于每个批次的亲和柱在使用前需进行质量检验

:,。

4.9微孔滤膜0.45m有机型

μ

5分析步骤

5.1样品制备

,,

将固体样品按四分法缩分至全部用谷物粉碎机磨碎并细至粒度小于混匀分成份作

1kg1mm2

2

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—

GB5009.2402016

,,,。

为试样分别装入洁净的容器内密封标识后置于4℃下避光保存

,,,。

玉米油样品直接取份作为试样分别装入洁净的容器内密封标识后置于下避光保存

24℃

,。

在制样的操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化

5.2试样提取

(),(),

准确称取固体样品精确至样品于离心管中加入乙腈水溶液

5g0.01g50mL20mL-3.2.2

,,/,。

涡旋或振荡提取20min取出后在4000rmin下离心5min将上清液转移至另一离心管中

,。

玉米油样品操作同固体样品提取液在下层

5.3试样净化

,/(),,

取2.0mL提取液加入47mL吐温-20PBS溶液3.2.7混合均匀后过免疫亲和柱流速控制在

//,,()

用缓冲液淋洗免疫亲和柱分别用甲醇乙酸溶液洗

1mLmin~3mLmin10mLPBS1mL-3.2.4

,,,()。

脱免疫亲和柱三次收集洗脱液下氮吹至干加入乙腈水溶液溶解残渣涡旋

55℃1mL-3.2.3

,,,。

过微孔滤膜后收集于进样瓶中待测

30s0.45m

μ

:,,。

注由于不同厂商提供的免疫亲和柱操作程序可能不同实际操作时请参照厂商提供的操作说明和程序使用

5.4仪器参考条件

::,,。

色谱柱C色谱柱250mm×4.6mm5m或相当者

18μ

:;。

检测波长激发波长335nm发射波长440nm

::();:。,。

流动相A甲酸水溶液3.2.1B甲醇梯度洗脱洗脱程序见表1

流动相流速:/。

0.8mLmin

衍生液流速:/。

0.4mLmin

柱温:。

40℃

反应器温度:。

40℃

进样量:。

50L

μ

表1流动相洗脱程序

时间流动相A流动相B

min%%

0.0045.055.0

2.0045.055.0

9.0030.070.0

14.0010.090.0

14.5010.090.0

15.0045.055.0

22.0045.055.0

5.5试样溶液的测定

,()

在5.4项色谱条件下将50.0L系列伏马毒素混合标准工作溶液3.4.3按浓度从低到高依次注

μ

;,(),

入高效液相色谱仪待仪器条件稳定后以目标物质的浓度为横坐标轴目标物质的峰面积为纵坐

x

(),,():

标轴对各个数据点进行最小二乘线性拟合标准工作曲线按式计算

y1

3

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—

GB5009.2402016

………………()

axb1

y=+

式中:

y———目标物质的峰面积比;

a———回归曲线的斜率;

x———目标物质的浓度;

b———回归曲线的截距。

,

标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内如果样品含量超过标准曲线

,。

范围需稀释后再测定

5.6空白试验

,。。

不称取试样按和的步骤做空白实验应确认不含有干扰待测组分的物质

5.25.3

6分析结果的表述

、、():

待测样品中的含量按式计算

FBFBFB2

123

cVf

i××

…………()

X=2