GB 5009.82-2016 食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定

中华人民共和国国家标准

—

GB5009.822016

食品安全国家标准

食品中维生素、、的测定

ADE

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

—

GB5009.822016

前言

本标准代替/—《食品中维生素和维生素的测定》、—《食品

GBT5009.822003AEGB5413.92010

安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素、、的测定》、/—《肉与肉制品维

ADEGBT9695.262008

生素含量测定》、/—《肉与肉制品维生素含量测定》、/—《食用

AGBT9695.302008ENYT15982008

植物油中维生素组分和含量的测定高效液相色谱法》。

E

/—,:

本标准与GBT5009.822003相比主要变化如下

———“、、”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中维生素的测定

ADE

———“”;

增加了食品中维生素的测定正相高效液相色谱法

E

———“”;

增加了食品中维生素的测定液相色谱串联质谱法

D-

———“”;

增加了食品中维生素的测定高效液相色谱法

D

———“”;

修改了食品中维生素和维生素的测定反相高效液相色谱法

AE

———,;

修改了维生素异构体的反相色谱分离条件可同时分离测定种生育酚异构体

E4

———,;

删除了苯并芘内标定量法改用外标法定量

———“”。

删除了比色法测定维生素A

Ⅰ

—

GB5009.822016

食品安全国家标准

食品中维生素、、的测定

ADE

1范围

、。

本标准规定了食品中维生素维生素和维生素的测定方法

AED

本标准第一法适用于食品中维生素和维生素的测定。

AE

、、。

本标准第二法适用于食用油坚果豆类和辣椒粉等食物中维生素的测定

E

本标准第三法适用于食品中维生素和维生素的测定。

D2D3

本标准第四法适用于配方食品中维生素或维生素的测定。

D2D3

第一法食品中维生素和维生素的测定反相高效液相色谱法

AE

2原理

()、、、,

试样中的维生素及维生素经皂化含淀粉先用淀粉酶酶解提取净化浓缩后或反

AECPFP

30

,,。

相液相色谱柱分离紫外检测器或荧光检测器检测外标法定量

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():,。

3.1.1无水乙醇CHOH经检查不含醛类物质检查方法参见A.1

25

抗坏血酸()。

3.1.2CHO

686

氢氧化钾()。

3.1.3KOH

[()]:,。

3.1.4乙醚CHCHO经检查不含过氧化物检查方法参见A.2

322

():。

3.1.5石油醚CHO沸程为30℃~60℃

5122

无水硫酸钠()。

3.1.6NaSO

24

3.1.7H试纸(H范围1~14)。

pp

():。

3.1.8甲醇CHOH色谱纯

3

:/。

3.1.9淀粉酶活力单位≥100Umg

,():。

二叔丁基对甲酚简称

3.1.1026-CHOBHT

1524

3.2试剂配制

(/):,,,

3.2.1氢氧化钾溶液50100称取50氢氧化钾加入50mL水溶解冷却后储存于聚乙烯

ggg

瓶中。

():,,。

石油醚乙醚溶液量取石油醚加入乙醚混匀

3.2.2-1+1200mL200mL

1

—

GB5009.822016

()。

3.2.3有机系过滤头孔径为0.22m

μ

3.3标准品

维生素标准品

3.3.1A

(,:):,。

视黄醇号纯度或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质

CHOCAS68-26-8≥95%

2030

维生素标准品

3.3.2E

(,:):,

生育酚号纯度或经国家认证并授予标准物质证书

3.3.2.1α-CHOCAS10191-41-0≥95%

29502

的标准物质。

(,:):,

生育酚号纯度或经国家认证并授予标准物质证书的

3.3.2.2-CHOCAS148-03-8≥95%

β28482

标准物质。

(,:):,

生育酚号纯度或经国家认证并授予标准物质证书的标

3.3.2.3γ-CHOCAS54-28-4≥95%

28482

准物质。

(,:):,

生育酚号纯度或经国家认证并授予标准物质证书的标

3.3.2.4δ-CHOCAS119-13-1≥95%

27462

准物质。

3.4标准溶液配制

(/):,

维生素标准储备溶液准确称取维生素标准品用无水乙醇溶解

3.4.1A0.500mmL25.0mA

gg

,,,/。

后转移入50mL容量瓶中定容至刻度此溶液浓度约为0.500mmL将溶液转移至棕色试剂瓶

g

,,,。,(

中密封后在下避光保存有效期个月临用前将溶液回温至并进行浓度校正校正

-20℃120℃

方法参见附录B)。

(/):、、

维生素标准储备溶液分别准确称取生育酚生育酚生育酚和生育酚

3.4.2E1.00mmLα--γ-δ-

gβ

,,,,/。

各50.0m用无水乙醇溶解后转移入50mL容量瓶中定容至刻度此溶液浓度约为1.00mmL

gg

,,,。

将溶液转移至棕色试剂瓶中密封后在下避光保存有效期个月临用前将溶液回温至

-20℃6

,()。

20℃并进行浓度校正校正方法参见附录B

:

维生素和维生素混合标准溶液中间液准确吸取维生素标准储备溶液和维生

3.4.3AEA1.00mL

,,

素标准储备溶液各于同一容量瓶中用甲醇定容至刻度此溶液中维生素浓度为

E5.00mL50mLA

/,/。,。

维生素各生育酚浓度为在下避光保存有效期半个月

10.0mLE100mL-20℃

μgμg

:

维生素和维生素标准系列工作溶液分别准确吸取维生素和维生素混合标准溶液中

3.4.4AEAE

、、、、、,

间液于棕色容量瓶中用甲醇定容至

0.20mL0.50mL1.00mL2.00mL4.00mL6.00mL10mL

,/、/、/、/、

刻度该标准系列中维生素浓度为

A0.20mL0.50mL1.00mL2.00mL

μgμgμgμg

/、/,维生素浓度为/、/、/、/、

4.00mL6.00mLE2.00mL5.00mL10.0mL20.0mL

μgμgμgμgμgμg

/、/。临用前配制。

40.0mL60.0mL

μgμg

4仪器和设备

:。

4.1分析天平感量为0.01mg

4.2恒温水浴振荡器。

4.3旋转蒸发仪。

4.4氮吹仪。

4.5紫外分光光度计。

4.6分液漏斗萃取净化振荡器。

2

—

GB5009.822016

:。

4.7高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器或荧光检测器

5分析步骤

5.1试样制备

、,,,。

将一定数量的样品按要求经过缩分粉碎均质后储存于样品瓶中避光冷藏尽快测定

5.2试样处理

:;;

警示使用的所有器皿不得含有氧化性物质分液漏斗活塞玻璃表面不得涂油处理过程应避免紫

,;。

外光照尽可能避光操作提取过程应在通风柜中操作

5.2.1皂化

5.2.1.1不含淀粉样品

()()

称取2~5精确至0.01经均质处理的固体试样或50精确至0.01液体试样于150mL

ggggg

,,,,,

平底烧瓶中固体试样需加入约20mL温水混匀再加入1.0抗坏血酸和0.1BHT混匀加入30

gg

,,,

mL无水乙醇加入10mL~20mL氢氧化钾溶液边加边振摇混匀后于80℃恒温水浴震荡皂化30

,。

min皂化后立即用冷水冷却至室温

:,,,,。

注皂化时间一般为30min如皂化液冷却后液面有浮油需要加入适量氢氧化钾溶液并适当延长皂化时间

5.2.1.2含淀粉样品

()()

称取2~5精确至0.01经均质处理的固体试样或50精确至0.01液体样品于150mL

ggggg

,,,

平底烧瓶中固体试样需用约20mL温水混匀加入0.5~1淀粉酶放入60℃水浴避光恒温振荡

gg

,,,,,

30min后取出向酶解液中加入1.0抗坏血酸和0.1BHT混匀加入30mL无水乙醇10mL~

gg

,,,

20mL氢氧化钾溶液边加边振摇混匀后于80℃恒温水浴振荡皂化30min皂化后立即用冷水冷却至

室温。

5.2.2提取

,,

将皂化液用水转入的分液漏斗中加入石油醚乙醚混合液振荡萃取

30mL250mL50mL-

,,,。

5min将下层溶液转移至另一250mL的分液漏斗中加入50mL的混合醚液再次萃取合并醚层

:,。

注如只测维生素与生育酚可用石油醚作提取剂

Aα-

5.2.3洗涤

,,(

用约水洗涤醚层约需重复次直至将醚层洗至中性可用试纸检测下层溶液

100mL3pHpH

),。

值去除下层水相

5.2.4浓缩

(),

将洗涤后的醚层经无水硫酸钠约3g滤入250mL旋转蒸发瓶或氮气浓缩管中用约15mL石油

,,,

醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠次并入蒸发瓶内并将其接在旋转蒸发仪或气体浓缩仪上于水

240℃

,,,。

浴中减压蒸馏或气流浓缩待瓶中醚液剩下约2mL时取下蒸发瓶立即用氮气吹至近干用甲醇分

,。

次将蒸发瓶中残留物溶解并转移至10mL容量瓶中定容至刻度溶液过0.22m有机系滤膜后供高

μ

效液相色谱测定。

3

—

GB5009.822016

5.3色谱参考条件

色谱参考条件列出如下:

):(,,),;

a色谱柱C柱柱长250mm内径4.6mm粒径3m或相当者

30μ

)柱温:;

b20℃

)::;:,;

流动相水甲醇洗脱梯度见表

cAB1

)流速:/;

d0.8mLmin

):;;

紫外检测波长维生素为维生素为

eA325nmE294nm

)进样量:;

f10L

μ

)标准色谱图和样品色谱图见。

gC.1

:,,。

注如难以将柱温控制在可改用柱分离异构体流动相为水和甲醇梯度洗脱

120℃±2℃PFP

:,,,。

注如样品中只含生育酚不需分离生育酚和生育酚可选用柱流动相为甲醇

2α--γ-C

β18

:,,,

注如有荧光检测器可选用荧光检测器检测对生育酚的检测有更高的灵敏度和选择性可按以下检测波长检

3

:,;,。

测维生素激发波长发射波长维生素激发波长发射波长

A328nm440nmE294nm328nm

表色谱柱反相高效液相色谱法洗脱梯度参考条件

1C-

30

时间流动相A流动相B流速

/

min%%mLmin

0.04960.8

13.04960.8

20.001000.8

24.001000.8

24.54960.8

30.04960.8

5.4标准曲线的制作

。,

本法采用外标法定量将维生素和维生素标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中测

AE

,,,。

定相应的峰面积以峰面积为纵坐标以标准测定液浓度为横坐标绘制标准曲线计算直线回归方程

5.5样品测定

,,。

试样液经高效液相色谱仪分析测得峰面积采用外标法通过上述标准曲线计算其浓度在测定过

,。

程中建议每测定个样品用同一份标准溶液或标准物质检查仪器的稳定性

10

6分析结果的表述

():

试样中维生素或维生素的含量按式计算

AE1

Vf100

ρ×××

……()

X=1

m

式中:

———,(/),

试样中维生素或维生素的含量维生素单位为微克每百克维生素

XAEA100E

μgg

单位为毫克每百克(/);

m100

gg

———,(/);

根据标准曲线计算得到的试样中维生素或维生素的浓度单位为微克每毫升

ρAEμgmL

4

—

GB5009.822016

———,();

V定容体积单位为毫升mL

———(:;:);

换算因子维生素A=1维生素E=0.001

fff

100———试样中量以每100克计算的换算系数;

———,()。

m试样的称样量单位为克g

计算结果保留三位有效数字。

:(),:(/)

注如维生素的测定结果要用生育酚当量表示可按下式计算维生素生育酚

Eα-α-TEEmα-TE100=α-

gg

(/)生育酚(/)生育酚(/)生育酚(/)。

m100+-m100×0.5+γ-m100×0.1+δ-m100×0.01

ggβgggggg

7精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

8其他

,,/,/;

当取样量为定容时维生素的紫外检出限为定量限为生

510mLA1010030100

gμggμgg

/,/。

育酚的紫外检出限为40100定量限为120100

μggμgg

第二法食品中维生素的测定正相高效液相色谱法

E

9原理

、,,

试样中的维生素经有机溶剂提取浓缩后用高效液相色谱酰氨基柱或硅胶柱分离经荧光检测

E

,。

器检测外标法定量

10试剂和材料

,。/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

10.1试剂

():,,。

10.1.1无水乙醇CHOH色谱纯经检验不含醛类物质检查方法参见A.1

25

[()]:,,。

10.1.2乙醚CHCHO分析纯经检验不含氧化物检查方法参见A.2

322

():。

10.1.3石油醚CHO沸程为30℃~60℃

5122

无水硫酸钠()。

10.1.4NaSO

24

():。

10.1.5正己烷n-CH色谱纯

614

[()]:。

10.1.6异丙醇CHCHOH色谱纯

32

[()]:。

10.1.7叔丁基甲基醚CHOCCH色谱纯

333

():。

10.1.8甲醇CHOH色谱纯

3

():。

10.1.9四氢呋喃CHO色谱纯

48

,():。

二氧六环色谱纯

10.1.1014-CHO

482

,():。

二叔丁基对甲酚简称

10.1.1126-CHOBHT

1524

()。

10.1.12有机系过滤头孔径为0.22m

μ

5

—

GB5009.822016

10.2试剂配制

():,,,。

石油醚乙醚溶液量取石油醚加入乙醚混匀临用前配制

10.2.1-1+1200mL200mL

:[()]