GB 5009.212-2016 食品安全国家标准 贝类中腹泻性贝类毒素的测定

中华人民共和国国家标准

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GB5009.2122016

食品安全国家标准

贝类中腹泻性贝类毒素的测定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

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GB5009.2122016

前言

本标准代替/—《贝类中腹泻性贝类毒素的测定》、/—《腹泻性贝

GBT5009.2122008SCT30242004

类毒素的测定生物法》、/—《进出口贝肉中大田软海绵酸的检测液相色谱串联质谱

SNT22692009-

》、/—《:》、

法进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第部分小鼠生物法

SNT2131.220102

/—《贝类中腹泻性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法》、/—《进出口

SNT19962007SNT2131.12008

:》。

贝类腹泻性贝类毒素检测方法第部分荧光磷酸酶抑制法

1

/—,:

本标准与GBT5009.2122008相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准贝类中腹泻性贝类毒素的测定

———增加了酶联免疫吸附法;

———增加了液相色谱串联质谱法。

-

Ⅰ

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GB5009.2122016

食品安全国家标准

贝类中腹泻性贝类毒素的测定

1范围

,

本标准规定了贝类中腹泻性贝类毒素测定的小鼠生物法酶联免疫吸附法和液相色谱串联质

-

谱法。

,

本标准中小鼠生物法和酶联免疫吸附法适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的测定液相色谱-

()()、

串联质谱法适用于贝类可食部分及其制品不包括盐渍制品中腹泻性贝类毒素大田软海绵酸OA

鳍藻毒素()和鳍藻毒素()的测定。

-1DTX-1-2DTX-2

小鼠生物法

2原理

(),,,

用丙酮提取贝类中腹泻性贝类毒素经无水乙醚分配减压蒸干后再以含吐温的生

DSP1%-60

,。,,。

理盐水为分散介质制成DSP混悬液将该混悬液注射入小鼠腹腔观察小鼠存活情况计算其毒力

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

丙酮()。

3.1.1CHO

36

无水乙醚()。

3.1.2CHO

410

吐温()。

3.1.3-60CHO

6412626

氯化钠()。

3.1.4NaCl

3.2试剂配制

():,。

3.2.1氯化钠溶液0.85%称取0.85NaCl加水溶解并定容至100mL

g

():,()。

3.2.2吐温-601%称取1.0g吐温-60用氯化钠溶液0.85%溶解并定容至100mL

3.3材料

:。

3.3.1小鼠体重为16~20的健康ICR品系雄性小鼠

gg

:。

3.3.2金属筛网孔径约2mm

4仪器和设备

4.1旋转蒸发器。

1

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GB5009.2122016

4.2均质器。

:。

4.3天平感量为0.1g

5分析步骤

:,。、

注为避免毒素的危害应戴手套进行操作移液管及移液器吸头等用过的器材废弃的提取液等应在次氯酸钠溶

()。、,

液5%浸泡1h以上以使毒素分解对于动物实验过程中产生的污水废弃物及动物尸体处理应参照

GB14925执行。

5.1样品采集

,。,

采取足够的贝类样品个数并使贝肉达400g以上远离实验室不能及时送检的样品除了在常温

,,

下品质不会发生变化的应将样品置于保温盒中冷冻送检或采取必要措施保证其处于低温状态

()。,,。

0℃~10℃送检如为带壳样品应开壳去除水分后冷冻送检

5.2试样制备

5.2.1生鲜带壳样品

,,,,

用清水彻底洗净贝类样品外表切断闭壳肌开壳用清水淋洗内部去除泥沙及其他异物取出贝

。。,(

肉严禁以加热或药物方法开壳注意不要破坏闭壳肌以外的组织尤其是中肠腺中肠腺又称消化盲

,)。,。。

囊组织呈暗绿色或褐绿色将去壳贝肉置于孔径约2mm的金属筛网上沥水5min将贝肉剪碎

5.2.2冷冻样品

。、、,

在室温下使冷冻样品融化呈半冷冻状态带壳冷冻的样品按5.2.1方法清洗开壳淋洗取肉除

,。。

去贝肉外部附着的冰片抹去水分将贝肉剪碎

5.3试样提取

,。

称取剪碎的贝肉试样置于均质杯中按体积比加倍量丙酮后均质以上将均质好

200g32min

,。,

的物质倒入布氏漏斗中抽滤收集滤液分别用残渣倍量的丙酮再清洗残渣两次滤液与上述滤液合

2

。,,

并将滤液移入500mL的圆底烧瓶中56℃±1℃下减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油

状物。

,,,

用100mL~200mL无水乙醚溶解油状物倒入分液漏斗内再用少量无水乙醚清洗圆底烧瓶合

,,(),

并倒入分液漏斗内以少量的水洗下粘壁部分轻轻振荡不能生成乳浊液静置分层后去除水层

()。

下层

,,,

用相当乙醚半量的水洗乙醚层两次去除水层再将乙醚层移入或的圆底烧瓶中

250mL500mL

。,

于减压浓缩去除乙醚用少量无水乙醚将浓缩物移入或圆底烧瓶中再次

35℃±1℃50mL100mL

减压浓缩去除乙醚。

,,

用吐温的生理盐水将全部浓缩物转移至刻度试管中稀释到充分振摇制成均匀混

1%-6010mL

。,。

悬液1mL该混悬液相当于20g试样以此混悬液为试验原液

,,,

以试验原液注射小鼠当内只或只小鼠死亡时需振荡试验原液使成均匀混悬液用

24h231%

,,。

吐温生理盐水按表逐步稀释成倍或倍的稀释液充分混匀按表注射小鼠

-6014161

5.4小鼠试验

,,。

选择健康雄性小鼠只随机分为实验组和溶剂对照组两组每组只实验组

16~20ICR63

gg

,。

将腹腔注射试验原液或其稀释液溶剂对照组将腹腔注射吐温生理盐水

1%-60

2

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GB5009.2122016

。,

分别取待测液或吐温生理盐水腹腔注射小鼠注射过程中若有提取液溢出须将该

1mL1%-60

,。。

只小鼠丢弃并重新注射一只小鼠仔细观察并记录死亡时间死亡时间计算从注射完毕开始至小鼠

()。。,

停止呼吸小鼠呼出最后一口气止为止存活动物应连续观察24h观察时限24h内在溶剂对照组

,,,

小鼠正常的情况下实验组若出现只或只小鼠死亡则按表进一步实验以确定一组只小鼠中

2313

死亡只或只以上的最小染毒量或最大稀释度。

22

、

表1注射量稀释度与毒力的关系

注射量相对应的试样量毒力

注射液

mLgMU/g

试验原液11.0200.05

试验原液20.5100.1

4倍稀释液11.050.2

4倍稀释液20.52.50.4

16倍稀释液11.01.250.8

16倍稀释液20.50.6251.6

6分析结果的表述

,,,

观察时限内在溶剂对照组小鼠正常情况下若实验组无小鼠死亡或仅有只小鼠死亡则报

24h1

告样品中毒力为:/。

DSP<0.05MUg

,,,

观察时限内在溶剂对照组小鼠正常情况下若实验组有只或只小鼠死亡则按进行

24h235.4

,,:/。

动物实验并根据表计算样品中毒力报告样品中毒力为

1DSPDSP×××MUg

酶联免疫吸附法

7原理