GB 5009.118-2016 食品安全国家标准 食品中T-2毒素的测定

中华人民共和国国家标准

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GB5009.1182016

食品安全国家标准

食品中T-2毒素的测定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

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GB5009.1182016

前言

本标准代替/—《谷物中毒素的测定》、/—《食品中毒

GBT5009.1182008T-2GBT235012009T-2

素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、/—《进出口粮谷中毒素的测定

SNT17712006T-2

免疫亲和柱液相色谱法》、/—《进出口粮谷中毒素的检测方法酶联免疫吸附法》。

-SNT26762010T-2

/—,:

本标准与GBT5009.1182008相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中毒素的测定

T-2

———增加了适用范围;

———增加了直接ELISA法二。

Ⅰ

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GB5009.1182016

食品安全国家标准

食品中T-2毒素的测定

1范围

本标准规定了食品中T-2毒素的测定方法。

,,、、,、

本标准第一法适用于粮食及粮食制品酒类酱油醋酱及酱制品中T-2毒素含量的测定第二法

第三法适用于粮食及粮食制品中T-2毒素的测定。

第一法免疫亲和层析净化液相色谱法

2原理

,、,,

用提取液提取试样中的T-2毒素经免疫亲和柱净化衍生后用高效液相色谱荧光检测器测定外

标法定量。

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():。

3.1.1甲醇CHOH色谱纯

3

():。

3.1.2乙腈CHCN色谱纯

3

():。

3.1.3甲苯CHCH色谱纯

653

二甲基氨基吡啶。

3.1.44-

蒽腈(,)。

3.1.51-1-anthrolnitrile1-AN

y

3.2试剂配制

:(,)。

提取液甲醇水体积比

3.2.1-8∶2

:,

二甲基氨基吡啶溶液准确称取二甲基氨基吡啶于容量瓶中用甲苯定容

3.2.24-0.03254-100mL

g

至刻度。

:,。

蒽腈溶液准确称取蒽腈于容量瓶中用甲苯定容至刻度

3.2.31-0.0301-100mL

g

3.3标准品

(,:):,

毒素号纯度或经国家认证并授予标准物质证书的标

T-2CHOCAS21259-20-1≥98.0%

24349

准物质。

3.4标准溶液配制

:(),,

3.4.1标准储备液准确称取适量的T-2毒素标准品精确至0.0001g用乙腈溶解配制成浓度为

1

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GB5009.1182016

/的标准储备液,以下避光保存。

100mL-18℃

μg

:,,/、/、

3.4.2标准工作液根据需要准确吸取适量的标准储备液用乙腈稀释配制成5nmL10nmL

gg

/、/、/的标准工作液,避光保存。

50nmL100nmL200nmL4℃

ggg

3.5材料

:,,。

毒素免疫亲和柱柱规格或柱容量或等效柱

3.5.1T-21mL3mL≥1500ng

:,,。

3.5.2玻璃纤维滤纸直径11cm孔径1.5m无荧光特性

μ

4仪器和设备

:。

4.1高效液相色谱仪配有荧光检测器

:/。

4.2高速粉碎机转速≥12000rmin

:/。

4.3均质器转速≥12000rmin

4.4氮吹仪。

4.5离心机。

4.6涡旋混合仪。

4.7空气压力泵。

:。

4.8试验筛孔径1.0mm

:。

4.9天平感量0.0001g和0.01g

:。

4.10超声波发生器功率>180W

玻璃注射器:。

4.1110mL

5分析步骤

5.1提取

5.1.1粮食及粮食制品

,。()

将样品研磨硬质的粮食等用高速粉碎机磨细并通过试验筛称取25.0g精确到0.1g过筛样品

,,,,。

于容量瓶中用提取液定容至100mL转移至均质杯中以均质器高速搅拌提取2min定量滤纸过滤

,,。

移取10.0mL滤液加入40mL水稀释混匀经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清滤液备用

、、

5.1.2酱油醋酱及酱制品

(),,,。

称取25.0g精确到0.1g混匀的试样用甲醇定容至50.0mL超声提取10min定量滤纸过滤

,,。

移取10.0mL滤液加入40mL水稀释混匀经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清滤液备用

5.1.3酒类

(,)

取脱气酒类试样含二氧化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏30min过滤或超声脱气或其他

(),,,

不含二氧化碳的酒类试样20.0g精确到0.1g于50mL容量瓶中用甲醇定容至刻度摇匀定量滤纸

。,,。

过滤移取10.0mL滤液加入40mL水稀释经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清滤液备用

5.2净化和洗脱

,,。

将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下准确移取10.0mL5.1中的提取滤液注入玻璃注射器中将

,/,

空气压力泵与玻璃注射器连接调节压力使溶液以约滴的流速缓慢通过免疫亲和柱直至空气进

1s

2

—

GB5009.1182016

。,//,,

入亲和柱中用水淋洗亲和柱流速为滴滴直至空气进入亲和柱中弃去全部流出

10mL1s~2s

,。,/,。

液抽干小柱准确加入甲醇洗脱流速约为滴收集洗脱液

1.0mL1s

5.3衍生

:,,

标准工作液的衍生取不同浓度的标准工作液各在下用氮气吹干加入二

5.3.11mL50℃50L4-

μ

,,,

甲基氨基吡啶溶液和蒽腈溶液在涡旋混合器上混匀反应在冰水中冷却

50L1-1min50℃15min

μ

,,,。

10min后取出50℃下氮气吹干用1.0mL流动相溶解待HPLC测定

:,。

5.3.2样品的衍生将5.2中洗脱液在50℃下用氮气吹干按5.3.1步骤进行

5.4测定

5.4.1高效液相色谱参考条件

高效液相色谱参考条件列出如下:

):,,,,;

a色谱柱C柱柱长150mm内径4.6mm粒径5m或等效柱

18μ

):(,);

流动相乙腈水体积比

b-75∶25

)流速:/;

c1.0mLmin

):,;

d检测波长激发波长381nm发射波长470nm

)进样量:;

e20L

μ

)柱温:。

f35℃

5.4.2色谱测定

,。

在5.4.1色谱条件下将系列T-2毒素标准工作液按浓度从低到高依次注入高效液相色谱仪待

,(),(),

仪器稳定后以目标物质的浓度为横坐标轴目标物质的峰面积为纵坐标轴对各个数据点进

xy

,():

行最小二乘线性拟合标准工作曲线按式计算

1

…………()

axb1

y=+

式中:

y———目标物质的峰面积比;

a———回归曲线的斜率;

x———目标物质的浓度;

b———回归曲线的截距。

,

标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内如果样品含量超过标准曲线范

,。

围需稀释后再测定

5.5空白试验

,、。。

不称取试样按和的步骤做空白试验应确认不含有干扰待测组分的物质

5.15.25.3

5.6结果计算

():

试样中毒素的含量按式计算

T-22

V1000

ρ××

…………()

X=×f2

m1000

×

式中:

———,(/);

X试样中T-2毒素的含量单位为微克每千克k

μgg

———