GB 5009.274-2016 食品安全国家标准 水产品中西加毒素的测定

中华人民共和国国家标准

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GB5009.2742016

食品安全国家标准

水产品中西加毒素的测定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

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GB5009.2742016

前言

/—《》/—

本标准代替出口海产品中西加毒素的检测小鼠生物法和

SNT30382011SNT3869

2014《出口水产品中雪卡毒素的测定》。

/—/—,:

本标准与和相比主要变化如下

SNT30382011SNT38692014

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定

———,。

保留小鼠生物法为第一法增加液相色谱串联质谱法为第二法

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Ⅰ

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GB5009.2742016

食品安全国家标准

水产品中西加毒素的测定

1范围

本标准规定了水产品中西加毒素的测定方法。

本标准适用于水产品可食部分中西加毒素的测定。

第一法小鼠生物法

2原理

,,,

用丙酮提取水产品中西加毒素提取物经减压蒸干后再以吐温生理盐水为分散介质制备

1%-60

,,,

西加毒素吐温生理盐水混悬液将该混悬液注射入小鼠腹腔观察小鼠存活情况根据西加毒素

-1%-60

,,

致小鼠死亡时间和鼠单位的关系表查出对应的鼠单位并按小鼠体重校正鼠单位计算确定西加毒素含

()。

量鼠单位毒力

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

吐温()。

3.1.160CHO

6412626

苦味酸[()]。

3.1.2HO-CHNO

6223

丙酮()。

3.1.3CHCOCH

33

甲醇()。

3.1.4CHOH

3

正己烷()。

3.1.5CH

614

乙醇()。

3.1.6CHCHOH

32

乙醚()。

3.1.7CHOCH

33

氯仿()。

3.1.8CHCl

3

次氯酸钠()。

3.1.9NaClO

3.1.10生理盐水。

3.2试剂配制

():,,。

3.2.1次氯酸钠溶液5%称取次氯酸钠50g用9950mL水溶解搅拌使次氯酸钠充分溶解

():,,。

3.2.2甲醇溶液90%量取100mL甲醇加入900mL水混匀

():,,。

3.2.3乙醇溶液25%量取250mL甲醇加入750mL水混匀

():。

氯仿甲醇溶液将氯仿与甲醇按体积比为混合均匀

3.2.4-3+973∶97

:。

吐温生理盐水用生理盐水将吐温稀释为吐温含量为的溶液

3.2.51%60-60601%

1

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GB5009.2742016

3.3标准品

(,):。

太平洋西加毒素-1P-CTX-1CHO纯度≥90%

608819

3.4材料

:()(),。

小鼠昆明系封闭群清洁级CL或无特定病原菌级SPF且体重为18~22的健康雄性小鼠

gg

4仪器和设备

:。

4.1电子天平感量为0.001g

4.2均质器。

4.3恒温水浴箱。

4.4旋转蒸发仪。

4.5氮气浓缩仪。

5分析步骤

5.1试样制备

(),,。。

水产品取其可食部分去骨切成小块制成肉糜于-18℃以下保存

5.2试样提取

,。,,,

取试样200g置于塑料袋内于70℃水浴15min取出冷却后加丙酮400mL均质10min用布

。。,。

氏漏斗抽滤并收集滤液肉渣再重复萃取两次合并滤液于55℃旋转蒸发浓缩至近干加入

(),,,,

100mL甲醇溶液90%溶解转移至500mL分液漏斗中再加入100mL正己烷充分振荡萃取静置

,,,。

约30min以上待分层完全弃去上层正己烷层收集下层甲醇溶液层再加入100mL正己烷重复萃

。,(),

取一次将下层的甲醇溶液于55℃旋转蒸发至干以100mL乙醇溶液25%溶解并转移至分液漏

,,,,。

斗中加入100mL乙醚充分振荡萃取静置10min以上待分层完全收集上层乙醚层下层溶液再

。,。()

用乙醚萃取两次合并乙醚萃取液于旋转蒸发至近干浓缩物用氯仿甲醇溶液

40℃5mL-3+97

,,,,

溶解并转移至刻度试管中于用氮气浓缩至干用吐温生理盐水定容至充分振荡

45℃1%60-2mL

。。

制成均匀西加毒素吐温生理盐水混悬液该混悬液相当于试样以此混悬液进行

-1%60-0.5mL50g

小鼠实验。

:,,(),。

注为避免毒素的危害应戴手套进行操作用过的器材应在次氯酸钠溶液5%中浸泡1h以上以使毒素分解

5.3小鼠试验

5.3.1实验动物的饲养

、、,。

小鼠在通风透光清洁的室内环境饲养实验期间正常供给标准啮齿类动物食物和饮水

5.3.2小鼠试验

、、,,(

将小鼠随机分为试验组溶剂对照组空白对照组组每组只小鼠每只小鼠称重精确至

33

),。()。

0.5g并记录体重用染色法如3%~5%苦味酸溶液或其他染色剂做好编号

5.3.2.1试验组

。,,

每只试验组小鼠腹腔注射0.5mL试样提取液若注射时注射液溢出须将该只小鼠弃去并重新

2

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GB5009.2742016

注射一只小鼠。

5.3.2.2溶剂对照组

,

每只溶剂对照组小鼠腹腔注射吐温生理盐水以排除吐温生理盐水可能产生的

0.5mL1%60-60-

影响。

5.3.2.3空白对照组

,。

每只空白对照组小鼠不进行腹腔注射与实验组和溶剂对照组的小鼠在相同的环境和条件下饲养

5.3.3小鼠体征观察

,(

记录注射开始和完毕时间仔细观察并记录小鼠停止呼吸时的死亡时间到小鼠呼出最后一口气

止)。

:()、(:,:、

小鼠中毒死亡症状活动能力异常减少至不活动步态异常正常慢走或快走异常兴奋的不

)、、()、(、、、、)、()、

稳的腹泻呼吸困难急促浅的或喘息肤色青紫主要在阴茎耳鼻口尾部竖毛轻至显著颤

()、()、()、。

抖阵发性或持续麻痹阵发至后腿麻痹多涎可能浸湿脸部和胸前毛直至挣扎跳跃最后死亡

,,,

小鼠在注射2h内要仔细观察连续观察400min当小鼠接近死亡时更要密切观察准确记录死亡时间

()。

直至小鼠呼出最后一口气止

6分析结果的表述

6.1试样中西加毒素毒力的计算

,

观察从注射开始至小鼠的毒效应体征和存活情况计算出一组只小鼠中死亡只以上

400min32

。,。,

的中位数死亡时间根据中位数死亡时间在表A.1中查出对应的MU若小鼠体重小于或大于20g

则根据附录查出重量校正系数。

BC

():

试样中西加毒素的毒力按式计算

1

…………()

XMUC1

=××f

式中:

———,(/);

X试样中西加毒素的毒力单位为鼠单位毎五十克MU50g

———,(/);

MU0.5mL小鼠腹腔注射液中所含的西加毒素的鼠单位数单位为鼠单位毎五十克MU50g

C———小鼠体重校正系数;

f———试样提取液的稀释倍数。

(),

1MU的定义为使体重为20.0g的无特定病原体级SPF昆明系雄性小鼠400min死亡的毒力