GB 5009.210-2016 食品安全国家标准 食品中泛酸的测定

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中华人民共和国国家标准

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GB5009.2102016

食品安全国家标准

食品中泛酸的测定

2016-08-31发布2016-09-20实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

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GB5009.2102016

前言

本标准代替/—《食品中泛酸的测定》。

GBT5009.2102008

/—,:

本标准与GBT5009.2102008相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中泛酸的测定

———增加了高效液相色谱方法;

———修改了食品的前处理方法;

———增加了检出限和定量限。

Ⅰ

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GB5009.2102016

食品安全国家标准

食品中泛酸的测定

1范围

本标准规定了食品中泛酸和泛酸钙的测定方法。

,

本标准第一法适用于食品中泛酸的测定第二法适用于营养素补充剂类保健食品和配方食品中泛

()。

酸钙的测定

第一法微生物法

2原理

(),

泛酸是植物乳杆菌LactobacilluslantarumATCC8014生长所必需的营养素在一定控制条件

p

,,(),

下将植物乳杆菌液接种至含有试样液的培养液中培养一定时间后测定透光率或吸光度值根据泛

()。

酸含量与透光率或吸光度值的标准曲线计算出试样中泛酸的含量

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的二级水

3.1试剂

盐酸()。

3.1.1HCl

冰乙酸()。

3.1.2CHO

242

氢氧化钠()。

3.1.3NaOH

氯化钠()。

3.1.4NaCl

碳酸钠()。

3.1.5NaCO

23

碳酸氢钾()。

3.1.6KHCO3

磷酸氢二钾()。

3.1.7KHPO

24

三水合乙酸钠(·)。

3.1.8CHONa3HO

2322

三水合磷酸二氢钾(·)。

3.1.9KHPO3HO

242

七水合硫酸镁(·)。

3.1.10MSO7HO

g42

七水合硫酸亚铁(·)。

3.1.11FeSO7HO

42

一水合硫酸锰(·)。

3.1.12MnSOHO

42

三羟甲基氨基甲烷()。

3.1.13CHNO

4113

葡萄糖()。

3.1.14CHO

6126

甲苯()。

3.1.15CH

78

无水乙醇()。

3.1.16CHO

26

:。

3.1.17阴离子交换树脂Dowex1×8粒度38m~75m

μμ

1

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GB5009.2102016

:/。

3.1.18碱性磷酸酶酶活力≥23Ug

(,):/。

3.1.19鸽子肝脏丙酮提取物干粉liveracetoneowderfromieon酶活力≥0.1U

ppgg

:。

3.1.20蛋白胨含氮量≥10%

:。

3.1.21酵母提取物含氮量≥10%

3.1.22琼脂。

3.2试剂配制

(/):,,。

3.2.1乙酸溶液0.2molL吸取11.8mL冰乙酸用水稀释至1000mL混匀

(/):,,。

3.2.2乙酸钠溶液0.2molL称取27.2g三水合乙酸钠加水溶解并稀释至1000mL混匀

(/):,,。

3.2.3盐酸溶液1molL吸取83mL盐酸加水稀释至1000mL混匀

:。

盐酸浸泡液吸取盐酸与倍水混合

3.2.4100mL50

(/):,,。

3.2.5氢氧化钠溶液1molL称取40g氢氧化钠加水溶解并稀释至1000mL混匀

(/):,,。

3.2.6氢氧化钠溶液0.1molL称取4g氢氧化钠加水溶解并稀释至1000mL混匀

:,,

缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷溶于水中用冰乙酸调至加

3.2.7Tris121.0g500mLpH8.1±0.1

,。,。

水至混匀贮存于冰箱中可保存周

1000mL2℃~4℃2

:,,。,

3.2.8生理盐水称取9g氯化钠加水溶解并稀释至1000mL混匀临用前预先灭菌于121℃高

压灭菌10min后备用。

():。

3.2.9乙醇溶液20%量取200mL无水乙醇与800mL水混匀

(/):,,。

3.2.10碳酸钠溶液0.08molL称取8.5g碳酸钠加水溶解并稀释至1000mL混匀

(/):,。。

3.2.11碳酸氢钾溶液0.02molL称取2g碳酸氢钾加水溶解并稀释至1000mL混匀

:,。,

碱性磷酸酶溶液称取碱性磷酸酶加水溶解并稀释至临用现配冰箱

3.2.122g100mL2℃~4℃

预冷。

3.2.13鸽子肝脏提取液

:,,

3.2.13.1活化Dowex1×8称取100Dowex1×8于锥形瓶中加入1L盐酸溶液置于振荡器上充

g

,。,、

分振摇10min用铺有滤纸的布氏漏斗过滤Dowex1×8转回锥形瓶再加入1L盐酸溶液重复振摇

。,,。

过滤加入水振摇过滤重复用水洗涤次逐滴加入缓冲液调节

Dowex1×81L10min10Tris

。,。

至冰箱保存天内用完

Dowex1×8H8.0±0.12℃~4℃2

p

:。

3.2.13.2鸽子肝脏提取液配制此试剂前一天将所用容器放入2℃~4℃冰箱中冷藏过夜称取30g

,,,

鸽子肝脏丙酮提取物干粉放入研钵中冰浴条件下分两次加入300mL碳酸氢钾溶液研磨至匀浆转

,,/,

入具塞离心管中盖好塞后充分振摇-20℃冷冻10min后以3000rmin离心5min将上清液转至

。,,,

500mL广口瓶中加150g活化Dowex1×8放入冰浴中混匀5min将混合液倒入离心管中

/。,,

3000rmin离心5min将上清液移入另一500mL预冷的广口瓶中-20℃冷冻10min再加150g

,,,/,

活化Dowex1×8放入冰浴中混匀5min将混合液倒入离心管中3000rmin离心将上清液分装于

(),。。

具塞试管中每管大约3mL-20℃冷冻保存用前于2℃~4℃冰箱内化冻并保存至用时

3.3培养基

:,,

3.3.1甲盐溶液分别称取25g磷酸氢二钾和25g三水合磷酸二氢钾加水溶解并稀释至500mL混

。,。

匀加入甲苯冰箱可保存年

1mL2℃~4℃1

:、、

3.3.2乙盐溶液分别称取10g七水合硫酸镁0.5g氯化钠0.5g七水合硫酸亚铁和0.5g一水合硫

,。,。

酸锰加水溶解并稀释至加滴盐酸冰箱可保存年

500mL52℃~4℃1

:,,,。

琼脂培养基按表称取或吸取各试剂加水至混合沸水浴加热至琼脂完全溶化趁

3.3.31100mL

///。,

热用盐酸溶液和或氢氧化钠溶液调节至尽快分装根据试管内径粗

1molL1molLpH6.8±0.1

,。,。

细加入3mL~5mL液面高度不得低于2cm塞上棉塞121℃高压灭菌15min取出后试管直立放

2

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GB5009.2102016

,,。

置待冷却后于冰箱内保存备用

表1菌种储备用琼脂培养基配制一览表

试剂用量

葡萄糖1.0g

蛋白胨0.8g

酵母提取物干粉0.2g

三水合乙酸钠1.7g

甲盐溶液0.2mL

乙盐溶液0.2mL

琼脂1.2g

:。

泛酸测定用培养液可按附录配制泛酸测定用培养液也可直接由试剂公司购买效力相当的

3.3.4A

,。

泛酸测定用培养基用前按说明书配制

3.4标准品

():。

泛酸钙纯度

D-CHCaNO≥99%

1832210

3.5标准溶液的配制

(/):,

泛酸标准储备溶液精确称取预干燥至恒重的泛酸钙加水溶解并转

3.5.140.0mL43.5mD-

μgg

,,,。

移至1000mL容量瓶中加10mL乙酸溶液100mL乙酸钠溶液用水定容至刻度储存于棕色瓶

,,。

中加入滴滴甲苯于冰箱中可保存年

3~52℃~4℃2

(/):,

3.5.2泛酸标准中间液1.00mL准确吸取25.0mL泛酸标准储备溶液置于1000mL容量瓶中

μg

,,。

加入乙酸溶液乙酸钠溶液用水定容至刻度加入滴滴甲苯于冰箱

10mL100mL3~52℃~4℃

中可保存年。

1

(/):,

3.5.3泛酸标准工作溶液20nmL准确吸取2.00mL泛酸标准中间溶液置于100mL容量瓶中

g

,。。

用水定容至刻度混匀临用前现配

4仪器和设备

:。

4.1天平感量0.1mg

恒温培养箱:。

4.237℃±1℃

压力蒸汽消毒器:。

4.3121℃

4.4漩涡振荡器。

:/。

4.5离心机转速≥3000rmin

4.6接种针和接种环。

:。

4.7H计精度±0.01

p

紫外分光光度计。

4.8-

4.9超净工作台。

4.10超声振荡器。

3

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GB5009.2102016

5菌种的制备与保存

5.1菌种

植物乳杆菌()。

LactobacilluslantarumATCC8014

p

5.2储备菌种的制备

(),

将菌种植物乳杆菌LactobacilluslantarumATCC8014转接至琼脂培养基中在37℃±1℃恒

p

,。。

温箱中培养连续传种次次取出后放入冰箱作为储备菌株保存每月至

20h~24h2~3