GB 5009.300-2025 食品安全国家标准 食品中左旋肉碱的测定

中华人民共和国国家标准

GB5009300—2025

.

食品安全国家标准

食品中左旋肉碱的测定

2025-03-16发布2025-09-16实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

国家市场监督管理总局

GB5009300—2025

.

前言

本标准代替食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定

GB29989—2013《》。

本标准与相比主要变化如下

GB29989—2013,:

标准名称更改为食品安全国家标准食品中左旋肉碱的测定

———《》;

更改了分光光度法

———;

增加了第二法柱前衍生高效液相色谱法

———“-”;

增加了第三法液相色谱串联质谱法

———“-”。

Ⅰ

GB5009300—2025

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食品安全国家标准

食品中左旋肉碱的测定

1范围

本标准规定了食品中左旋肉碱的测定方法

。

第一法分光光度法适用于婴幼儿食品不含特殊医学用途婴儿配方食品中的乳蛋白部分水解配方

(、

乳蛋白深度水解配方和氨基酸配方和乳品中左旋肉碱的测定

)。

第二法柱前衍生高效液相色谱法适用于食品不含特殊医学用途婴儿配方食品和特殊医学用途配

-(

方食品中左旋肉碱的测定

)。

第三法液相色谱串联质谱法适用于婴幼儿配方食品和特殊医学用途配方食品中左旋肉碱的测定

-。

第一法分光光度法

2原理

试样经过水提取用高氯酸沉淀蛋白质后过滤滤液中结合态的左旋肉碱经碱皂化游离出来与乙

,。,

酰辅酶在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶游离的辅酶和二硫

AA。A5,5'-

双硝基苯甲酸反应生成黄色物质其颜色深浅与游离的辅酶含量成正比因游离的辅酶与左

(2-),A。A

旋肉碱是等摩尔反应关系可间接求出试样中左旋肉碱的含量

,。

3试剂和材料

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为规定的三级水

,,GB/T6682。

31试剂

.

311高氯酸

..(HClO4)。

312氢氧化钠

..(NaOH)。

313氢氧化钾

..(KOH)。

314二硫双硝基苯甲酸

..5,5'-(2-)(C14H8N2O8S2)。

羟乙基哌嗪乙烷磺酸

315NN

..-2---2-(C8H18N2O4S)。

316乙二胺四乙酸二钠

..(C10H14N2Na2·2H2O)。

317乙酰辅酶纯度在下保存

..A(AcetylCoA):≥85%,2℃~8℃。

318乙酰肉碱转移酶在下保存

..(CAT):2℃~8℃。

32试剂配制

.

321高氯酸溶液吸取高氯酸用水稀释至

..(13%):13mL,100mL。

322高氯酸溶液吸取高氯酸用水稀释至

..(3%):3mL,100mL。

1

GB5009300—2025

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323氢氧化钠溶液称取氢氧化钠用水溶解冷却后稀释至

..(10mol/L):40g,100mL。

324氢氧化钾溶液称取氢氧化钾用水溶解冷却后稀释至

..(4mol/L):22.4g,100mL。

325显色储备液分别称取二硫双硝基苯甲酸N羟乙基哌嗪N乙烷磺

..:50mg5,5'-(2-)、5.96g-2---2-

酸乙二胺四乙酸二钠溶于水中用氢氧化钠溶液调节至然后

、185mg30mL,10mol/LpH7.4~7.6,

用水稀释至保存有效期个月

50mL。4℃,3。

326显色工作液吸取显色储备液用水稀释至

..:5mL25mL。

327乙酰辅酶溶液称取乙酰辅酶溶于水中临用现配

..A(AcetylCoA):20mgA2mL。。

328乙酰肉碱转移酶溶液吸取乙酰肉碱转移酶悬浮液加水至混匀临用

..(CAT):100μL,2mL,。

现配

。

33标准品

.

左旋肉碱标准品号纯度或经国家认证并授予标准物质证书

(C7H15NO3,CAS:541-15-1):≥98%,

的标准物质使用前于电热鼓风干燥箱中干燥

。102℃±2℃2h。

34标准溶液配制

.

341左旋肉碱标准储备液准确称取精确至左旋肉碱置于烧杯

..(1mg/mL):10mg(0.01mg)10mL

中加入水溶解全部转移至容量瓶中用水定容至刻度混匀将溶液转移至棕色容器

,5mL,10mL,,。

中避光保存有效期个月

,4℃,3。

342左旋肉碱标准中间液吸取左旋肉碱标准储备液置于容量瓶中用

..(80μg/mL):2.00mL,25mL,

水定容至刻度混匀将溶液转移至棕色容器中避光保存有效期个月

,。,4℃,1。

343左旋肉碱系列标准工作液分别吸取左旋肉碱标准中间液

..:0.125mL、0.50mL、1.00mL、

置于容量瓶中用水定容至刻度混匀即得该系列标准工作液质

2.00mL、3.00mL、5.00mL25mL,,,。

量浓度分别为临用现配

0.4μg/mL、1.6μg/mL、3.2μg/mL、6.4μg/mL、9.6μg/mL、16μg/mL。。

4仪器和设备

41分析天平感量分别为和

.:0.001g0.01mg。

42计

.pH。

43恒温水浴装置

.。

44分光光度计

.。

45电热鼓风干燥箱

.。

5分析步骤

51试样处理

.

511固态试样准确称取精确至混合均匀的试样于烧杯中用温水溶解

..:5.0g(0.001g),30mL40℃,

转入容量瓶中加入高氯酸溶液混合均匀后静置用水定容至刻度

100mL。10mL(13%),20min。,

混匀用定量滤纸过滤

,。

取滤液用氢氧化钾溶液调节至后置于水浴中冷

20mL,(4mol/L)pH12.5~13.0,40℃60min。

却后先用高氯酸溶液将调至再用高氯酸溶液将调节至将样液

(13%)pH9~10,(3%)pH7.0~7.5。

转入容量瓶中用水定容混匀后置于冰箱中静置以上将试样处理液从冰箱中取出

50mL,。4℃2h。

放置至室温取上清液用滤膜过滤后备用

,,0.45μm。

2

GB5009300—2025

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512液态试样准确称取精确至混合均匀的试样转入容量瓶中后续步骤

..:25.0g(0.001g),100mL。

按中加入高氯酸溶液混合均匀后静置处理

5.1.1“10mL(13%),20min……”。

52标准曲线的绘制

.

吸取左旋肉碱系列标准工作液于比色皿中加入显色工作液和乙

2.00mL1cm,0.80mL100μL

酰辅酶溶液盖上比色皿盖混合均匀后放入分光光度计中分光光度计的波长调为

A,,,412nm,5min

后归零迅速加入乙酰肉碱转移酶溶液混合均匀后放入分光光度计中反应后记录吸

。100μL,,10min

光值以左旋肉碱系列标准工作液的浓度为横坐标以吸光值为纵坐标制作标准曲线

。,,。

53试样测定

.

取试样处理液按的步骤测定其吸光值在标准曲线上查得试样待测液的浓度

2.00mL5.2。。

6分析结果的表述

试样中左旋肉碱的含量按式计算

(1)。

c×

Χ=50×

m×V×100……(1)

10

式中

:

X试样中左旋肉碱的含量单位为毫克每百克

———,(mg/100g);

c由标准曲线得到的试样溶液中左旋肉碱的质量浓度单位为微克每毫升

———,(μg/mL);

样液的定容体积单位为毫升

50———,(mL);

m试样的取样质量单位为克

———,(g);

V滤液的体积单位为毫升

———,(mL);

换算系数

10———;

样液的定容体积单位为毫升

100———,(mL)。

计算结果保留至小数点后位

2。

7精密度

在重复性条件下获得的次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的

210%。

8其他

固态试样的方法检出限为定量限为液态试样的方法检出限为