GB 5009.24-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定

中华人民共和国国家标准

—

GB5009.242016

食品安全国家标准

食品中黄曲霉毒素族的测定

M

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

—

GB5009.242016

前言

本标准代替—《食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素的测定》、

GB5413.372010M1

—《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素和的测定》、/—《牛

GB5009.242010MBGBT232122008

11

、、、、、》/—

奶和奶粉中黄曲霉毒素的测定高效液相色谱法荧光检测法和

BBGGMM-SNT1664

121212

《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素、、、、含量的测定》。

2005MBBGG

11212

—,:

本标准与GB5413.372010相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素族的测定

M

———增加了方法适用范围;

———增加了对黄曲霉毒素的检测;

M2

———,;

修改了酶联免疫法并修改第三法名称为酶联免疫吸附筛查法

———修改了液相色谱质谱联用法;

-

———修改了液相色谱法的前处理方法;

———删除了免疫层析净化荧光分光度法。

Ⅰ

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GB5009.242016

食品安全国家标准

食品中黄曲霉毒素族的测定

M

1范围

本标准规定了食品中黄曲霉毒素和黄曲霉毒素(以下简称和)的测定

MMAFTMAFTM

1212

方法。

,、

第一法为同位素稀释液相色谱串联质谱法适用于乳乳制品和含乳特殊膳食用食品中

-AFTM1

和AFTM2的测定。

,。

第二法为高效液相色谱法适用范围同第一法

,、。

第三法为酶联免疫吸附筛查法适用于乳乳制品和含乳特殊膳食用食品中AFTM1的筛查测定

第一法同位素稀释液相色谱串联质谱法

-

2原理

,

试样中的黄曲霉毒素和黄曲霉毒素用甲醇水溶液提取上清液用水或磷酸盐缓冲液稀释

M1M2-

,,、,,

后经免疫亲和柱净化和富集净化液浓缩定容和过滤后经液相色谱分离串联质谱检测同位素内标

法定量。

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():。

3.1.1乙腈CHCN色谱纯

3

():。

3.1.2甲醇CHOH色谱纯

3

乙酸铵()。

3.1.3CHCOONH

34

氯化钠()。

3.1.4NaCl

磷酸氢二钠()。

3.1.5NaHPO

24

磷酸二氢钾()。

3.1.6KHPO

24

氯化钾()。

3.1.7KCl

盐酸()。

3.1.8HCl

():。

3.1.9石油醚CH沸程为30℃~60℃

n2n+2

3.2试剂配制

(/):,,。

3.2.1乙酸铵溶液5mmolL称取0.39g乙酸铵溶于1000mL水中混匀

():,。

乙腈水溶液量取乙腈加入水中混匀

3.2.2-25+75250mL750mL

():,。

乙腈甲醇溶液量取乙腈加入甲醇中混匀

3.2.3-50+50500mL500mL

1

—

GB5009.242016

():、(

3.2.4磷酸盐缓冲溶液以下简称PBS称取8.00g氯化钠1.20g磷酸氢二钠或2.92g十二水磷酸

)、、,,,

氢二钠磷酸二氢钾氯化钾用水溶解后用盐酸调节至再加水至

0.20g0.20g900mLpH7.4

。

1000mL

3.3标准品

(,:):,

3.3.1AFTM标准品CHOCAS6795-23-9纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书

117127

的标准物质。

(,:):,

3.3.2AFTM标准品CHOCAS6885-57-0纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书

217147

的标准物质。

13同位素溶液():/。

3.3.3C-AFTMCHO0.5mL

17117147μg

3.4标准溶液配制

(/):(),

标准储备溶液分别称取和精确至分别用乙腈

3.4.110mLAFTMAFTM1m0.01m

μg12gg

。,。

溶解并定容至100mL将溶液转移至棕色试剂瓶中在-20℃下避光密封保存临用前进行浓度校

()。

准校准方法参见附录A

(/):/

混合标准储备溶液分别准确吸取和标准储备液

3.4.21.0mL10mLAFTMAFTM1.00mL

μgμg12

,,/。

于同一10mL容量瓶中加乙腈稀释至刻度得到1.0mL的混合标准液此溶液密封后避光4℃

μg

,。

保存有效期个月

3

(/):(/)

混合标准工作液准确吸取混合标准储备溶液至容

3.4.3100nmL1.0mL1.00mL10mL

gμg

,。,。

量瓶中乙腈定容此溶液密封后避光下保存有效期个月

4℃3

13

/():(/),

3.4.450nmL同位素内标工作液1C-AFTM取AFTM同位素内标0.5mL1mL用

g1711μg

。,。。

乙腈稀释至在下保存供测定液体样品时使用有效期个月

10mL-20℃3

13

/():(/),

3.4.55nmL同位素内标工作液2C-AFTM取AFTM同位素内标0.5mL100L用

g1711μgμ

。,。。

乙腈稀释至在下保存供测定固体样品时使用有效期个月

10mL-20℃3

:、、、、、

3.4.6标准系列工作溶液分别准确吸取标准工作液5L10L50L100L200L500L至

μμμμμμ

,/,,

10mL容量瓶中加入100L50nmL的同位素内标工作液用初始流动相定容至刻度配制AFT

μg

和的浓度均为/、/、/、/、/、/的

MAFTM0.05nmL0.1nmL0.5nmL1.0nmL2.0nmL5.0nmL

12gggggg

系列标准溶液。

4仪器和设备

:、。

4.1天平感量0.010.001和0.00001

ggg

:。

4.2水浴锅温控50℃±2℃

4.3涡旋混合器。

4.4超声波清洗器。

离心机:/。

4.5≥6000rmin

4.6旋转蒸发仪。

()。

4.7固相萃取装置带真空泵

4.8氮吹仪。

:。

液相色谱串联质谱仪带电喷雾离子源

4.9-

圆孔筛:孔径。

4.101mm~2mm

:,,。

4.11玻璃纤维滤纸快速高载量液体中颗粒保留1.6m

μ

:(,

4.12一次性微孔滤头带0.22m微孔滤膜所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象方可

μ

2

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GB5009.242016

使用)。

:(、、)。

4.13免疫亲和柱柱容量≥100ng柱容量回收率柱回收率验证方法参见附录B

:。

注对于每个批次的亲和柱在使用前需进行质量验证

5分析步骤

,、,

使用不同厂商的免疫亲和柱在样品的上样淋洗和洗脱的操作方面可能略有不同应该按照供应

商所提供的操作说明书要求进行操作。

:。(),

警示整个分析操作过程应在指定区域内进行该区域应避光直射阳光具备相对独立的操作台

。,。

和废弃物存放装置在整个实验过程中操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施

5.1样品提取

、

5.1.1液态乳酸奶

(),13

称取4g混合均匀的试样精确到0.001g于50mL离心管中加入100LC-AFTM内标溶

μ171

(/),,。、/

液5nmL振荡混匀后静置30min加入10mL甲醇涡旋3min置于4℃6000rmin下离心

g

,,,。

10min或经玻璃纤维滤纸过滤将适量上清液或滤液转移至烧杯中加40mL水或PBS稀释备用

、

5.1.2乳粉特殊膳食用食品

(),13(/

称取1g样品精确到0.001g于50mL离心管中加入100LC-AFTM内标溶液5ng

μ171

),,。,

mL振荡混匀后静置30min加入4mL50℃热水涡旋混匀如果乳粉不能完全溶解将离心管置于

,。,,。

50℃的水浴中将乳粉完全溶解后取出待样液冷却至20℃后加入10mL甲醇涡旋3min置于

、/,,

4℃6000rmin下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤将适量上清液或滤液转移至烧杯中加40mL

,。

水或PBS稀释备用

5.1.3奶油

(),13(/

称取1g样品精确到0.001g于50mL离心管中加入100LC-AFTM内标溶液5ng

μ171

),,,,

mL振荡混匀后静置30min加入8mL石油醚待奶油溶解再加9mL水和11mL甲醇振荡

,。,,

30min将全部液体移至分液漏斗中加入0.3g氯化钠充分摇动溶解静置分层后将下层移到圆底

,,。

烧瓶中旋转蒸发至10mL以下用PBS稀释至30mL

5.1.4奶酪

、(),

称取1g已切细过孔径1mm~2mm圆孔筛混匀样品精确到0.001g于50mL离心管中加

13(/),,

100LC-AFTM内标溶液5nmL振荡混匀后静置30min加入1mL水和18mL甲醇振荡

μ171g

,、/,

30min置于4℃6000rmin下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤将适量上清液或滤液转移至圆

,,。

底烧瓶中旋转蒸发至2mL以下用PBS稀释至30mL

5.2净化

5.2.1免疫亲和柱的准备

将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

5.2.2净化

,,/

免疫亲和柱内的液体放弃后将上述样液移至50mL注射器筒中调节下滴流速为1mLmin~

3

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GB5009.242016

/。,,