DB21/T 3429-2021 蒙古栎SSR分析技术规程

ICS65.020.01

CCSB60

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3429—2021

蒙古栎SSR分析技术规程

TechnicalRegulationsofSSRanalysisinQuercusmongolica

2021-05-22发布2021-06-22实施

辽宁省市场监督管理局发布

目次

前言...........................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语和定义........................................................................1

4仪器设备及试剂....................................................................1

5引物..............................................................................2

6溶液配制..........................................................................2

7分析程序..........................................................................2

附录A（资料性）..................................................................5

附录B（资料性）..................................................................6

附录C（资料性）..................................................................7

附录D（资料性）..................................................................8

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DB21/T3429—2021

前言

本文件按照GB/T1.1的规则起草。

本文件由辽宁省林业和草原管理局提出并归口管理。

本文件起草单位：辽宁省林业科学研究院。

本文件起草人：陈罡、于世河、卜鹏图、郑颖、陆爱君、王占伟、王敬贤、庞忠义、赫亮、刘怡菲、

高旭、李昀峰、扈延伍、曹颖、刘金义、庞家举、许家铭、翟金凤、赵济川、战金伟。

本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，

我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（辽宁省沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：

024-23448927。

文件起草单位通讯地址：辽宁省林业科学研究院（辽宁省沈阳市皇姑区鸭绿江街12号），联系电话：

024-82241813。

I

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DB21/T3429—2021

蒙古栎SSR分析技术规程

1范围

本文件规定了蒙古栎SRR分析技术的定义和术语、仪器设备、溶液配制、引物和分析程序。

本文件适用于辽宁地区蒙古栎的SSR分析。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T28660马铃薯种薯真实性和纯度鉴定SSR分子标记

LY/T2426枣品种鉴定技术规程SSR分子标记法

LY/T2756白蜡品种分子鉴定方法—SRAP分子标记法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

简单重复序列

又称微卫星DNA，是一类由1～6个核苷酸为重复单位的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序列。

3.2

聚合酶链式反应

在耐热DNA聚合酶作用下，于体外快速大量特意扩增待定DNA序列的方法。

3.3

引物

一条互补结合在模板DNA链上的短的单链，提供3’-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模板

DNA的互补链。

3.4

引物扩增多态性

一对引物在两个或两个以上不同材料基因组DNA之间扩增，得到数目不同或长度不同的DNA片段。

4仪器设备及试剂

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DB21/T3429—2021

仪器设备及试剂见附录B。

5引物

引物相关信息见附录C。

6溶液配制

溶液配制方法见附录D。

7分析程序

7.1分析材料

采集蒙古栎新鲜幼嫩叶片为材料提取基因组DNA。选取适量样品装入冻存管，液氮速冻后置于-80℃

超低温冰箱保存备用。

7.2DNA的提取

a)采用CTAB法提取蒙古栎基因组DNA。将干净研钵、研杵、小匙、无水乙醇预先放入冰箱中

-20℃预冷，用自来水、蒸馏水先后冲洗叶面，再用滤纸吸干水分。

b)取5~10g叶片在液氮中迅速研磨成粉状，迅速转至灭过菌的1.5mL离心管中，加入500μL

预热过（60℃）的CTAB提取液、5μL0.2%β-巯基乙醇和5μLRNaseA(10mg/mL)，充分混匀后

放入65℃水浴30min。其间每隔10min轻轻摇动混匀2次~3次。

c)取出离心管加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀10min，再于台式冷冻离心机

上10000g离心10min。

d)将上清液转入另一新的1.5mL离心管中，重复c)步骤1~2次。

e)移取上清液至另一已加入2倍体积预冷（0℃以下）无水乙醇的1.5mL离心管中，轻轻颠倒混

匀，使DNA沉淀成絮状，-20℃放置30min以上。

f)用钩状玻璃棒轻轻挑出絮状沉淀并置于新的1.5mL离心管中。如果样品未出现云雾状沉淀或

看不清沉淀，10000g