SC/T 3303-1997 冻烤鳗

SC/'r3303-1997

前言

冻烤鳗是一种加工要求高、营养丰富的食品，目前在我国主要是供出口用。本标准在编制过程中参

考了很多贸易合同中对规格、感官的要求和主要进口国对鳗鲡及其产品的卫生要求。

冻烤鳗产品中农药及渔药残留量是各国严格检查的项目，其控制应从活的原料鳗开始，为方便烤鳗

生产者，本标准将我国有关部门对鱼类食品中兽药的最高残留量列出，并以提示的附录将日本厚生省对

进口鳗鲡的规定列出。

本标准的附录A是标准的附录。

本标准的附录B和附录C是提示的附录。

本标准由农业部渔业局提出。

本标准由中国水产科学研究院黄海水产研究所归口。

本标准起草单位:广东金曼集团股份有限公司、潮州市技术监督局、汕头商检局、汕头大学、汕头市

技术监督局。

本标准主要起草人:张旭强、张兆彬、陈会波、蔡继伟、林永胜、陈镇安、蔡东牛

中华人民共和国水产行业标准

冻烤鳗SC/T3303-1997

Frozenroastedeel

1范围

本标准规定了冻烤鳗的技术要求、检验规则、试验方法、标志、标签、包装、运输与贮存。

本标准适用于以活鳗鲡(Anguillajapouicus,Anguillaanguilla)经宰杀、去内脏、烤制后冷冻而成

的冻烤鳗产品。冻烤鳗鱼肝可相应参照。

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时.所示版本均

为有效所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB2828-87逐批检查计数抽样程序及抽样表(适用于连续批的检查)

GB4789.2-94食品卫生微生物学检验菌落总数测定

GB4789.3--94食品卫生微生物学检验大肠菌群测定

GB4789.4--94食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验

GB4789.10--94食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验

GB5009.19-1996食品中六六六、滴滴涕残留量的测定方法

GB574985生活饮用水卫生标准

GB7718-94食品标签通用标准

3定义

本标准采用下列定义。

3门冻烤鳗

以养殖活鳗鲡为原料，经去除内脏及骨加工处理和烤制后，冷冻而成的熟制品。

3.2冻原味烤鳗(冻白烧烤鳗)

未加入调味配料的冻烤鳗。

3.3冻调味烤鳗(冻蒲烧烤鳗)

加入调味配料的冻烤鳗。

3.4冻有头整条烤鳗(冻有头长烧烤鳗)

鳗体完整的有头冻烤鳗。

3.5冻无头整条烤鳗(冻无头长烧烤鳗)

鳗体完整的去头冻烤鳗

I6冻串块烤鳗(冻串烧烤鳗)

条鳗去头、去骨、去内脏后切成块状，穿入竹签成串，然后进行烤制冷冻的串状冻烤鳗。

中华人民共和国农业部1997一12一19批准1998一05一01实施

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4技术要求

4门品种

冻烤鳗按加工工艺不同分为有头整条原味、无头整条原味、串块原味、有头整条调味、无头整条调

味、串块调味等品种。

4.2规格

冻整条烤鳗按每条质量定规格;冻串块烤鳗按每串质量定规格。

4.2.1各规格的整条冻烤鳗的条质量，每箱成品包装含量规定见表1,

表1整条规格包装含量规定

冻烤鳗质量每箱成品包装含量

规格代号

9/条条数净含量

7L311一9一360`名30

6L271-5^-310'035士1

5L2369~270笼40

4L211-9一235+曹45士110kg;

31-191--210+050负偏差毛0.01kg

2L176-9~190`合55土1

L156-5^-175+言60

M136-'-155"70

S2116-2-135"80

S1106_,-115',90

2S296_5-105十{100

2S186理~95'0110

3S76劣一85十吕120

注:每箱2盒，每盒5kg

4.2.2各规格的串块冻烤鳗质量及每箱成品包装含量规定见表2。

完2串协失贝格句努含量规宁

规格质量范围

每箱成品包装含量

9/串

56』一65千孟

66_宝~75+君100串

76_0,--88"

89-,^-92'}1

SC/T3303-1997

表2(完)

规格质量范围

每箱成品包装含量

卿9/串

一

001

93-0,^-108`,',

011021901311扣-129`100串

一

401C31

每箱5盒，每盒20串。601511臼

冻烤鳗的规格质量及每箱成品包装含量，合同中另有要求的按合同执行。

感官

冻烤鳗的感官指标见表3

表3感官指标

项目指标

色泽原味烤鳗呈乳白色或淡黄色;调味烤鳗呈黄色、棕黄色或褐色，有光泽感

切面有光泽，刀口平滑，鱼片平整无破损，无软化融解现象;整条烤鳗体表完整，无异常

组织形态

的边缘卷起及尾鳍分又.烘烤焦斑均匀

具有烤鳗特有的气味，滋味鲜美、淳厚;调味烤鳗咸甜适度、口感好书无泥土味、油脂及蛋

气味及滋味

白变质等异味

杂质不应有内脏遗留物、寄生虫及其他外来杂质

4.4冻品中心温度

冻品中心温度不得高于一15'C,

4.5微生物

冻烤鳗的微牛物指标见表4

表4微生物指标

项目指标

细菌总数，个/9簇s.ox104

大肠菌群，个/100g《3

沙门氏菌不得检出

金黄色葡萄球菌不得检出

4.6农药及渔药残留量

4.6.1土霉素最高残留量为0.1mg/kg(肌肉)和0.3mg/kg(肝脏)。

4.6.2其他农药和渔药最高残留量见附录B(提示的附录)或执行合同规定。

4.了原料鳗

采用形态正常无病、无寄生虫的活鳗鲡加工烤制。

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5试验方法

5门感官

5.”.，外观:启箱后，带上经消毒的医用乳胶手套，逐条(串)翻动，观察色泽、组织状态是否正常;检验

是否混有杂质。

5.1.2水煮:判断气味及滋味时，需进行水煮试验。

水煮用水应符合GB5749的要求，容器应清洁卫生，无异味，水煮时不加任何调料。

将250g样品切成宽为2cm条状，与适量的水放入大小适宜的密封容器内煮沸2min，打开容器

盖，用手煽蒸气，嗅气味，看颜色，尝口味。

5.2规格、包装含量与中心温度

5.2.1主要设备要求:衡器最大称量值应低于被衡样品质量的5倍;温度计的分度值为。.5C,

5.2.2冻烤鳗规格及每箱成品包装含量。

5.2.2门每箱成品净含量为毛重减去内、外包装物总重。检验时直接称重(不必解冻)，先称毛重，后称

包装物总重。

5.2-2.2条(串)质量检验在操作台上进行，逐条(串)称重(不必解冻)。

5.2.3成品中心温度:将样品从冷库取出后立即放在。-20'C场所内，启箱后取中层的烤鳗，将温度计

探头插到肉质最厚部分中间，待温度指示稳定后读数。

5，3微生物

细菌总数按GB4789.2、大肠菌群按GB4789.3、沙门氏菌按GB4789.4、金黄色葡萄球菌按

GB4789.10规定的方法进行。

5.4农药及渔药残留量

5.4.1土霉素((OTC)残留量的检验方法见附录A(标准的附录)。

5.4.2其他农药和渔药残留量的检验方法见附录C(提示的附录)或按合同方法执行。

5.5原料鳗

将活鳗鲡放入水槽中，随机抽取5-10条用肉眼尹见察鱼体有无出血、溃疡及水霉现象，当发现鳗鲡

游动缓慢或有其他异常状态时，应至少抽取20条鳗鲡(特别是有不良症状的)用肉眼或显微镜从表到里

仔细检查下领、鱼体有否出血;体表有否可见虫体或由虫体入侵引起的红肿发溃、寄生大量水霉菌现象

及由粘抱子虫类入侵、繁殖引起的乳白色斑纹等。

6检验规则

6.1抽样

以同原料、同条件下同一天加工的同一品种、同一规格的冻烤鳗构成一检验批。

6.1.1冻品中心温度:从提交批产品中抽取一箱检验，不符合要求者另抽两箱复检。

6.1.2每箱包装含量:从提交批产品中按GB2828的正常检查两次(特定情况下用加严检查两次或放

宽检查两次)抽样方案中的S-4检查水平随机抽取样本，批量、样本、A-R。以箱为单位。

6.1.3规格、感官:按GB2828正常检查两次(特定情况下用加严检查两次或放宽检查两次)抽样方案

中的S-4检查水平从经每箱包装含量检验的产品中抽取样本(不足时从提交批产品中补抽)，批量、样

本、A-R。以kg为单位。

气味及滋味需水煮试验时，从三箱已开封的产品中各抽取试样1条或几串(不足250g者取足

250g)，分别检验，有一个以上试样不符合要求者，加倍抽样复检。

6.1.4微生物随机抽取三箱样品，在无菌条件下，每箱取1^-3条或几串(不足250g者取足250g),

微生物指标不合格时，不得进行第二次抽样。

6.1.5农药及渔药残留量:抽取3条或几串烤鳗(不足300g者取足300g)。农药、渔药残留量不合格

sC/T3303-1997

时，不得进行第二次抽祥。

6.1.6原料鳗:同一供养户、品种的原料鳗为一批，随机抽取20条进行活力及鱼病、寄生虫检验。

6.2抽样方案转换规则

6.2.1每箱包装含量、规格、感官项目通常采用正常检查抽样方案。

6.2.2使用正常检查抽样连续5批中有2批不合格时，应及时转向加严检查抽样;加严检查抽样连续

5批合格，可转回正常检查抽样。

6.2.3使用正常检查抽样连续10批合格时，可转向放宽检查抽样;放宽检查抽样发现一批不合格时，

应转向正常检查抽样。

6.3判定规则

6.3.1应检项目全部合格判为批产品合格。

6.3.2允许复验的项目，以复验结果为判定依据。

6.3.3箱包装含量、规格、感官各项的合格质量水平(AQ工)见表50

先5合格后量7k平

序号检验项目合格质量水平(AQL)

1每箱净含量0.65

2每箱条(串)数4.0

3条(串)规格4.0

4感官2.5

规格、感官试验结果，若第一次抽检不合格品总重小于或等于A的数字，判该批合格;等于或大于

R。数字，判该批不合格;介于A-R。数字间，进行第二次抽检，并将第一、二次抽检中不合格品重量累

加，依照四舍五入法取整数位，按第二次抽检的A-R。数字判别。

6.3.4微生物、农药及渔药残留量、标志、标签、包装各项，其中有一项不合格即判为不合格，不得复验。

6.3.5原料鳗中有一条不符合要求时，应对该批原料逐条检查，剔除所有死、病、有寄生虫的。

了标志、标签、包装、运输与贮存

7门标志及标签

外包装上应有标志，标示产品名称、生产厂名、商标、规格、批号等。标志应清晰、易懂，位置醒目。国

内销售的烤鳗应有标签，标签内容符合GB7718规定。合同另有规定的按合同执行。

7.2包装

内包装用食品塑料薄膜，塑料膜外加纸盒包装，塑料薄膜及包装用纸应无异臭;外包装用瓦楞纸箱。

内外包装紧密、完整、清洁、牢固、不破裂。

7.3标志、标签及包装作为必检项目，根据7.1和7.2要求在每一检验批中随机抽取一箱进行检验。判

定规则同6.3.4.

7.4运输

采用专用冷藏车，车厢内应清洁卫生，温度保持在一18℃以下，装卸应轻拿轻放快捷，不得与有污染

物品混装，不得日晒雨淋。

了.5贮存

产品应贮存在清洁的冷库内，库温保持在一18℃以下，有防水、防霉、防鼠、防虫害等措施，不得同有

异味、有污染物品及杂物一起堆放。

了.6保质期

在符合上述规定的贮运条件、包装完整、未经启封的情况下，本产品保质期为一年

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附录A

(标准的附录)

土霉素(OTC)残留最的试验方法

Al原理

样品经XAD-2树脂吸收后，用甲醇洗脱，经CLC-CN柱分离后，用紫外检测器检测。

A2试剂和材料

乙睛(CH刃N):分析纯。

EDTA二钠盐:。.005mol/I_,

磷酸氢二钾(K2HPO);0.005mol/L，用2mol/L磷酸调至pH为2-5,

提取液(用1mol/L盐酸溶解的EDTA二钠盐溶液):0.05mol八

工作液:称取OTC10.0mg(精确至。.1mg)。用。.01mol/I磷酸定容至100ml,为储备液。再取

上述储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，用水定容，然后分别取该溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml.

于25m工一容量瓶中，用水定容后为工作液。该工作系列溶液的浓度分别为:0.04,0.08,0.12,0.16,

0.20fag/ml。

XAD-2树脂:粒度直径为。.3-1mm(相当于20^-40目的树脂)使用时将树脂用甲醇浸泡一夜，

弃去甲醇。用水充分洗涤后，装人200mmX10mm的玻璃柱内，柱高10cm，依次用甲醇、去离子水各

50ml冲洗后备用。用后经上述步骤处理，可反复使用。

A3仪器设备

高效液相色谱仪:配有紫外检测器。

匀浆机:转速大于1000r/min,

离心机:转速3000r/min.

A4色谱条件

色谱柱:Shim-pack,CI_C-CN,150mmX6mm(内径)柱或与之相当的液相柱。

流动相0.005mol/I，其中磷酸氢二钾(K2HPO)为75%，乙睛(CH,CN)为250o,

流速:1.0ml,/min,

柱温:30'C,

检测波长:1,=367nm,

进样体积:20川·。

A5试样的制备

A5门提取:称取捣碎均匀的去皮鱼肉10.0g(精确至。.1g)，加40ml提取液，匀浆5min。然后在离

心机上以3000r/min离心5min用G2砂芯漏斗过滤上层清液。按同样步骤，用30mL提取液对样品

残渣再提取一次，合并滤液。

A5.2净化将上述合并滤液以每秒3-4滴的速度过XAD-2层析柱，用200mL去离子水洗涤，随后

用80ml甲醇洗脱。收集甲醇洗脱液，用无水硫酸钠脱水。

将脱水后的甲醇洗脱液，在35C水浴上，

用旋转蒸发器浓缩至约0.5ml，然后用流动相定容至

2ml

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A6测定步骤

取20,1L标准液注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标做标准曲线。

再将等体积的对照工作液、样液，经。.45pm滤膜，滤液取20川一，注入液相色谱仪进行测定由所

得到的峰面积，从标准曲线查得样品液中的含量。

A7测定结果的表述

土霉素残留量按式(Al)计算:

·

一

一

一

·……(A1)

1

X

一

V

式中:X—样品中残留土霉素的含量,mg/kg;

。—由所得到的峰面积查得的被测提取液中土霉素浓度，,Ig/ml;

an—试样的质量，9;

V—经稀释后，提取液的体积，ml。

A8重复性

同时做两个平行样，结果取两次测定的算术平均值。两次测定的相对偏差不得超过10%.

A9检测限度

本方法最低检测限为10Ng/kg,

附录B

(提示的附录)

冻烤鳗中农药、渔药残留量指标

冻烤鳗中农药、渔药残留量指标见表Ble

表B1冻烤鳗中农药、渔药残留量指标mg/kg

项目指标

六六六毛0.05

滴滴涕<O.05

农药残留量荻氏剂<0.02

七抓(0.02

吠喃哇酮(痢特灵)_<O.03

恶唆酸簇0.05

磺胺甲基啼吮成0.01

渔药残留量

磺胺二甲基啼P,}<O.04

抗生素阴性

sC/T3303-1997

附录C

(提示的附录)

烤组中农药、渔药残留t试验方法

C月.

r六六六、滴滴涕、荻氏剂、七氮

Cf.

.

.1六六六、滴滴涕按GB5009.19规定的方法检验。

C月.

.

‘2荻氏剂、七氯的试验方法

C月!

:2.1原理:荻氏剂、七氯的试验方法采用与GB5009.19相同的方法。

CJl

.2.2试剂:使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。

a)荻氏剂、七氯标准溶液:称取荻氏剂或七氯10.0mg(精确至0.1mg)溶于苯中，再移入100mL

容量瓶中，加苯至刻度，混匀。此液荻氏剂或七氯100pg/mL，作为储备液存于冰箱中。

b)荻氏剂、七氯标准使用液:临用时，各吸取2.0mL分别移入10mL容量瓶中，加石油醚至刻度，

相当七氯或荻氏剂20pg/mL，此浓度用于薄层色谱法。用气相色谱法时，根据仪器灵敏度稀释至适当浓

度。

c)其他试剂同GB5009.19-1996中3.1-3.7,7.1-7.4,

C1.2.3仪器:与GB5009.19相同。

01.2.4分析步骤与GB5009.19相同。

C2峡喃哇酮(痢特灵)

C2.1原理

用二氯甲烷提取样品中的痢特灵残留，浓缩提取液，用乙睛溶解残渣并用正己烷微量液液萃取去除

脂肪及其杂质，清液作高效液相色谱仪(HPLC)测定用。

C2.2试剂

乙月4:分析纯。

二氯甲烷:分析纯。

正己烷:分析纯。

磷酸;0.017mol/I。

乙睛水溶液:乙睛:水=80:20,

无水硫酸钠:分析纯。

吠喃哇酮标准溶液:称取吠喃哇酮10.0mg(精确至。1mg)，用乙睛溶解并定容于50mL棕色容

量瓶中，该储备液浓度为200pg/mL，冰箱内保存。测定时用水将储备液稀释至10pg/mL的标准工作

液，冰箱内保存。

C2.3仪器

高效液相色谱仪配备紫外检测器。

KD一真空浓缩器。

旋涡混匀器。

高速离心机。

25川微量进样器。

C2.4样品处理

将抽取的烤鳗绞碎，均匀混合，作为试样备用，冰箱内保存。

C2.5测定步骤

sC/T3303-1997

C2.5.1提取与净化:称取10g均匀样品(精确至0.1g)，加25ml，二氯甲烷，用旋涡混匀器提取

2min。提取液过无水硫酸钠柱滤入磨口烧瓶中，残渣重复提取二次，合并滤液，50℃真空浓缩至干。用

l.0mL乙睛水溶液溶解残渣，同时加入1ml_正己烷振荡1min，移入5mL离心管中，3000r/min离心

2min,用尖嘴吸管弃去上层正己烷层，再向离心管加入1mL正己烷，混匀，离心，弃去上层正己烷层，

下层清液作HPLC分析用。

C2.5.2色谱条件:DOs柱((4mmX250mm),测定波长365nm,流动相为乙腊、磷酸混合液(乙睛:

0.017mol/I磷酸一40:60)，流速1.0min.

C2.5.3测定:配制。03,0.1,0.2,0.4kg/mL四种浓度标准溶液，各取20IL分别注入HPLC测得积

分面积。以浓度为X坐标，积分面积为Y坐标，在XOY坐标系上绘制标准曲线。取样品溶液20川一注

入HPLC测得积分面积后从标准曲线图中查出相应的浓度再折算样品吠喃哇酮含量。

C2.5.4计算:映喃哇酮残留量按式(CD计算

X二妻11000000·······，···············……(C1)

式中:X—样品中吠喃哇酮浓度，mg/kg;

A—样品中吠喃Wl酮含量，lug;

m—样品质量，9。

C2.5.5方法的测定低限和回收率:本方法的测定低限为0.01mg/kg,吠喃哇酮添加。.03Kg/g，平均

回收率为84.3%,

C3恶哇酸

C3.1原理

用二氯甲烷提取样品中的恶喳酸残留，浓缩提取液，用流动相溶解残渣并用正己烷微量液萃取去除

脂肪及杂质，清液作HPLC测定用。

C3.2试剂

甲醇:分析纯。

二氯甲烷:分析纯。

正己烷:分析纯。

盐酸:浓度分别为。.1mol/L和0.03mol/L

恶喳酸标准溶液:称取10.0mg恶嚎酸(精确至。.1mg)，用。.1mol/L盐酸溶解并定容至

100ml，此储备液浓度为。.1mg/mI，冰箱内保存。用流动相将储备液稀释至1.0pg/mI，作为标准工

作液，冰箱内保存。

C3.3仪器

高效液相色谱仪配备紫外检测器。

KD一真空浓缩器。

旋涡混匀器。

高速离心机。

C3.4样品处理

同C2.40

C3.5测定步骤

C3.5.1提取与净化:称取10g均匀样品(精确至。.1g)，加25mL二氯甲烷，用旋涡混匀器提取

2min提取液过无水硫酸钠柱滤入磨口烧瓶中，残渣重复提取二次，合并滤液,40℃真空浓缩至干。准确

加入1ml流动相、lmL正己烷，混匀1min，移入5ml离心管，3000r/min离心2min，用尖嘴吸管弃

去上层正己烷层，再向离心管加入1m[正己烷重复净化一次。下层清液作HPLC分析用。

sC/T3303-1997

C3.5.2色谱条件:ODS柱((4mmX250mm)，测定波长254nn，流动相为甲醇、水、盐酸混合液

(甲醇:水:0.03mol/L盐酸=70:20:10),流速为1.0mol/min,

C3.5.3测定:配制。05,0.1,0.2,0.4Ajg/m工，四种浓度标准溶液，各取20t}L分别注入HPLC测得积

分面积。以浓度为X坐标，积分面积为Y坐标，在XOY坐标系上绘制标准曲线。取样品溶液20川注入

HPLC测得积分面积后从标准曲线图中查出相应的浓度再折算样品恶哇酸含量。

C3.5-4计算:恶哇酸残留量按式((C2)计算:

AX1000

·‘····。，二“·······……(C2)

m义1000

式中:X—样品中恶喳酸浓度，mg/kg3

A—样品中恶喳酸含量，拜9;

、—样品质量，go

C3.6方法的测定低限和回收率

本方法的测定低限为。.05mg/kg‘恶喳酸添加。.05kg/g，平均回收率为85.8%.

C4磺胺甲基呛咤、磺胺二甲签咄吮

C4.1原理

用二氮甲烷提取样品中的磺胺甲基qP,磺胺二甲基嗜P,浓缩，流动相溶解，过滤，取清液作

HPLC分析。

C4.2试剂

二氯甲烷:分析纯。

乙月0:分析纯。

冰醋酸:分析纯。

磺胺甲基嚓陡标准溶液:称取10.0mg磺胺甲基啼陡(精确至。.1mg)，用甲醇溶解并稀释至

100ml，此储备液浓度为100pg/mL，冰箱内保存。用流动相逐级稀释至10Kg/mL，作为标准工作液冰

箱内保存。

磺胺二甲基啼陡标准溶液:同上配制成100ug/mL的储备液和10Pg/mL的标准液，冰箱内保存

无水硫酸钠:分析纯。

C4.3仪器

高效液相色谱仪配备紫外检测器。

KD一真空旋转浓缩器。

旋涡混匀器。

高速离心机。

亲水性滤膜(0.45pm,Millpore),

C4.4样品处理

同C2.4o

C4.5测定步骤

C4.5.1提取与净化:称取10g均匀样品(精确至。.1g)，加25mL二氯甲烷，用旋涡混匀器提取

15min。过无水硫酸钠柱滤人磨口烧瓶中，重复操作二次，合并滤液，400C真空浓缩至干。用1mL流动

相溶解残渣，移入5ml离心管中，3000r/min离心2min,清液经。.45pm滤膜过滤，滤液作HPLC分

析用。

C4.5.2色谱条件:ODS柱((4mmX250mm),测定波长272nm，流动相为乙腊、水、冰乙酸混合液(乙

睛:水:冰乙酸=20:80:。5),流速1.0mot/I

C4.5.3测定:配制。.01,0.05,0.1,0.2Vg/ml，四种浓度磺胺甲基rilPQ标准溶液，各取20pL分别注

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入HPLC测得积分面积。以浓度为X坐标，积分面积为Y坐标，在XOY坐标系上绘制标准曲线。取样

品溶液20川注入HPLC测得积分面积后从标准曲线图中查出相应的浓度再折算样品中磺胺甲基啥

吮含量。

C4.5-4计算:磺胺甲基rt,uQI磺胺二甲基eIrkq留量按式(C3)计算:

AX1000

...·...·……(C3)

m义1000

式中:X一一样品中磺胺甲基嗜咤(或磺胺二甲基嚓陡)单一浓度，mg/kg;

A—样品中磺胺甲基啥咤(或磺胺二甲基喀吮)单一浓度含量+119;

m—样品质量，9。

C4.6方法的测定低限和回收率

本方法的测定低限为。.01mg/kg.磺胺甲基啼陡添加。.05kg/g，平均回收率为77.70o;磺胺二甲

基嗜咤添加。.05pg/g，平均回收率为95.3000

C5抗生素

C5.1原理

烤鳗样品中所含的抗生素经适当方法提取后，滴注到贴在已接种试验菌的琼脂平板的滤纸片中，经

培养后，距纸片一定范围内的试验菌的生长受到抑制，形成明显的抑制环，借此可以定性地鉴别烤鳗样

品中抗生素残留。

C5.2菌种、培养基和试剂

C5.2.1菌种:大肠杆菌K12菌株(E.ColiK12),

C5.2-2培养基:

C5.2-2.，成分:

牛肉膏59;

蛋白脉10g;

氯化钠59;

琼脂15g.

C5.2-2.2制法:将上述成分的牛肉膏、蛋白膝、氯化钠混合，用蒸馏水溶解、配至1000mL>pH调至

7.2-7.4。分装烧瓶，121℃高压灭菌20min，形成液体培养基，制备试验菌液用。将上述培养基加人琼

脂15g，加热煮沸，使琼脂充分熔化。分装烧瓶，121'C高压灭菌20min，形成固体培养基，供制平板、斜面

用。

C5.2.3试剂:

乙酸乙A31:分析纯。

正己烷:分析纯。

p1{6.。磷酸缓冲溶液:磷酸二氢钾(KH2P0,)8g，亚磷酸氢钾(KHPO,)2g，用蒸馏水配至

1000mLe

pH3.。柠檬酸缓冲溶液:柠檬酸7g,磷酸氢二钠(Na2HPO,)3g，用蒸馏水配至1000mL

C5.3设备和材料

培养皿(笋90mm)o

台式离心机。

恒温培养箱。

无菌操作台。

微量注射器

分液漏斗。

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减压干燥器。

无菌试管(内放入适量玻璃珠)。

无菌刻度吸管。

05mm圆形灭菌滤纸片。

C5.4样品处理

在无菌条件下按C2.4规定处理样品。

C5.5测定步骤

C5.5.1试验菌液的沛」备:将试验菌种接种斜面，经35-37'C培养18^24h，以白金耳接种置于试管内

的液体培养基，在35-37℃培养18h，将液体培养物以无菌生理盐水稀释至1/10000，冰箱内存放备

用。

C5.5.2试验平板的制备:将C5.2.2制备的固体培养基用开水融化，冷却至50℃左右，倒入若干个灭

菌培养皿中(厚度约2mm)，充分凝固后制成平板，每个平板加入C5.5.1制备的菌液。1mL，用L形

玻璃棒涂布均匀。在其上均匀放进6片拓mm圆滤纸片。

C5.5.3四环素类抗生素:称取10g均匀样品(精确至0.1g)，置于无菌试管内，加人pH3。柠檬酸缓

冲溶液20ml,，充分振摇，3000r/min离心20min，吸取上层清液5pL注入平板上的圆形滤纸片(平行

做3片滤纸)，经35^-37℃培养((17士1)h，有2片以上滤纸片周围呈现明显抑菌环者为阳性，否则为阴

性。

C5.5.4氯霉素:称取10g均匀样品(精确至。.1g)，置于无菌试管内，加人乙酸乙醋40mL，充分振

摇，3000r/min离心20min，取上层清液在40C以下真空干燥，干燥样品加人10mI.pH6.0磷酸缓冲

溶液，用适量正己烷脱脂，吸取5pL下层清液注入平板上的圆形滤纸片(平行做3片滤纸)，经35-

37℃培养((17士1)h，有2片以上滤纸片周围呈现明显抑菌环者为阳性，否则为阴性。

C5.5-5其他水溶性抗生素:称取log均匀样品(精确至。1g),置于无菌试管中，加入无菌水20mL,

充分振摇，3000r/min离心20min，吸取上层清液5,1L注入平板上的圆形滤纸片(平行做3片滤纸)，

经35^-37℃培养((17士1)h，有2片以上滤纸周围呈现抑菌环者为阳性，否则为阴性。

C5.6方法的测定低限

本方法中各种抗生素的最低检出量见表C1.

表C1抗生素最低检出量

抗生素名称最低检出量(单位)

抓霉素6.3只10-0

硫酸庆大舞素2.0X10-3

硫酸卡那霉素8.0X10-'

硫酸链霉素3.9X10-

土霉素1.6又10-r

青母素0_20