DB13/T 5221-2020 土壤中土霉素、金霉素、四环素、多西环素、美他霉素的测定 高效液相色谱-串联质谱法

ICS11.120.10

C12

DB13

河北省地方标准

DB13/T5221—2020

土壤中土霉素、金霉素、四环素、多西

环素、美他霉素的测定高效液相色谱-串联

质谱法

2020-09-18发布2020-10-18实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5221—2020

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由河北省市场监督管理局提出。

本标准起草单位：河北省环保产品质量监督检验院、张家口翼华环境检测技术有限责任公司、河

北德普环境检测有限公司。

本标准主要起草人：吕晓飞、蔡立鹏、耿晓红、陈静、刘肖肖、何淑娟、张玉、刘娜、孙鹏、王

玲、米卫军、王天星。

I

DB13/T5221—2020

土壤中土霉素、金霉素、四环素、多西环素、美他霉素的测定高效

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了土壤中土霉素、金霉素、四环素、多西环素、美他霉素的高效液相色谱-串联质谱测

定方法。

本标准适用于土壤中土霉素、金霉素、四环素、多西环素、美他霉素的测定。

按称样量5g，50mL提取液中移取10mL净化，净化液浓缩、定容至1.0mL，进样量1μL分析，

土壤中土霉素、金霉素、四环素、多西环素、美他霉素的检出限为2.5μg/kg，测定下限为10μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

HJ/T166土壤环境监测技术规范

HJ613土壤干物质和水分的测定重量法

3原理

土壤中四环素类抗生素用Na2EDTA-Mellvaine缓冲液（pH=4.0）+乙腈（7+3）提取，经过滤和离心

后，上清液用HLB固相萃取柱净化。净化液中的四环素类抗生素经高效液相色谱分离，电喷雾离子源离

子化，通过保留时间和特征离子对丰度比定性，峰面积外标法定量。

4干扰和消除

四环素类抗生素均属于高极性弱酸弱碱化合物，易与土壤中的金属离子、蛋白质结合，影响提取。

通过Na2EDTA-Mellvaine缓冲液可有效防止金属离子与四环素类抗生素螯合。提取液中加入乙腈，并在

低温下离心，可有效去除蛋白质的干扰。提取液经HLB固相萃取柱净化，可进一步去除干扰物质并有效

降低基质对质谱的干扰效应。

5试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1甲醇：色谱纯。

5.2乙腈：色谱纯。

5.3乙酸乙酯：色谱纯。

5.4甲酸：色谱纯。

1

DB13/T5221—2020

5.5乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·H2O）。

5.6柠檬酸（C6H8O7·H2O）。

5.7磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。

5.8柠檬酸溶液（0.1mol/L）：称取21.01g柠檬酸（5.6），用水溶解，定容至1000mL。

5.9磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：称取28.41g磷酸氢二钠（5.7），用水溶解，定容至1000mL。

5.10Mellvaine缓冲溶液：将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液（5.8）与625mL0.2mol/L磷酸氢

二钠溶液（5.9）混合，必要时用氢氧化钠或盐酸调节pH=4.0。

5.11Na2EDTA-Mellvaine缓冲溶液（0.1mol/L）：称取60.5g乙二胺四乙酸二钠（5.5）放入1625

mLMellvaine缓冲溶液（5.10）中，使其溶解，摇匀。

5.12Na2EDTA-Mellvaine缓冲溶液+乙腈（7+3）：量取700mLNa2EDTA-Mellvaine缓冲溶液与300

mL乙腈混合。

5.13甲醇+水（1+19）：量取5mL甲醇（5.1）与95mL水混合。

5.14甲醇+乙酸乙酯（1+9）：量取10mL甲醇（5.1）与90mL乙酸乙酯（5.3）混合。

5.15HLB固相萃取柱：二乙烯苯/N-乙烯基吡咯烷酮复合填料萃取柱（60mg，3mL），或其他性能

相

5.16近的固相萃取小柱。使用前用5mL甲醇、5mL水活化处理，保持柱体湿润。

5.17甲酸水溶液（0.1%）：准确量取1.0mL甲酸（5.4）于1000mL容量瓶中，用水溶解并定容至

刻度。

5.18乙腈+甲酸水溶液（2+8）：量取20mL乙腈（5.2）与80mL甲酸水溶液（5.16）混合。

5.19标准物质：土霉素（oxytetracycline，CAS：6153-64-6）、金霉素（chlortetracycline，CAS：

57-62-5）、四环素（tetracycline，CAS：60-54-8）、多西环素（doxycycline，CAS：564-25-0）、

美他霉素（methacycline，CAS：914-00-1）。纯度均大于或等于95%。

5.20标准储备液（100μg/mL）：准确称取土霉素、金霉素、四环素、多西环素和美他霉素各10.0

mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，4℃贮存于密封棕色瓶