DB13/T 2593-2017 禽腺病毒4型PCR检测方法

ICS11.220

B43

DB13

河北省地方标准

DB13/T2593—2017

禽腺病毒4型PCR检测方法

2017-11-22发布2017-12-22实施

河北省质量技术监督局发布

DB13/T2593—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北农业大学提出。

本标准起草单位：河北农业大学。

本标准主要起草人：袁万哲、王建昌、孙继国、刘聚祥、李丽敏、陈立功、李睿文、张磊、白云、

陈赛娟、李杰峰。

I

DB13/T2593—2017

禽腺病毒4型PCR检测方法

1范围

本标准规定了禽腺病毒4型PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于检测家禽咽喉拭子、肛拭子，发病禽组织和这些采集样品培养物中的禽腺病毒4型。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

DNA

脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

2.2

EB

溴化乙锭（ethidiumbromide）

2.3

PCR

聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

2.4

dNTP

脱氧核苷酸三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

3试剂或材料

包括各种市售病毒核酸提取试剂盒，1.0%琼脂糖凝胶，50×TAE缓冲液，溴化乙锭（EB，10ug/μL）

或核酸染料，焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，DNA分子量标准（100bp），2×TaqMasterMix

或商品化的一步法PCR反应试剂。

警示:电泳中用到的EB在操作中应戴手套和口罩。试验中被EB污染的物品要进行无害化处理；DEPC

在操作中应在通风条件下进行，使用时戴手套和口罩，不小心沾到皮肤应立即冲洗。

3.1病毒核酸提取试剂盒。

3.21.0%琼脂糖凝胶，配制方法见附录A中A.1。

3.350×TAE缓冲液，配制方法见附录A中A.2。

3.4溴化乙锭（EB，10ug/μL）或核酸染料，配制方法见附录A中A.3。

3.5焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，配制方法见附录A中A.4。

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DB13/T2593—2017

3.6DNA分子量标准（100bp）:包含100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp几种分

子量标准。

3.72×TaqMasterMix。

3.8商品化的一步法PCR反应试剂：含有PCR缓冲液、酶混合物、dNTP混合物、无RNA酶的水等。

3.9引物：上游引物与下游引物见附录B中的表B.1。引物浓度为10μmol/L。

4仪器设备

4.1PCR仪：温度范围4.0℃～99.9℃；样品基座配置至少包括单个