DB34/T 2073-2014 转基因抗虫水稻科丰8号实时荧光PCR检测方法

ICS65.020.01

B20

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2073—2014

转基因抗虫水稻科丰8号实时荧光PCR检测

方法

Detectionofgeneticallymodifiedinsect-resistantricekefeng8usingReal-timePCR

method

2014-02-17发布2014-03-17实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2073—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省质量技术监督局提出。

本标准起草单位：安徽省农业科学院水稻研究所。

本标准主要起草人：马卉、李莉、杨剑波、汪秀峰、陆徐忠、倪大虎、魏鹏程、宋丰顺、李浩、倪

金龙、杨亚春。

I

DB34/T2073—2014

转基因抗虫水稻科丰8号实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了转基因抗虫水稻科丰8号转化体特异性实时荧光PCR检测方法的术语和定义、原理、试

剂与材料、主要仪器和设备、操作步骤、结果分析与表述。

本标准适用于转基因抗虫水稻科丰8号及其衍生品种，含有科丰8号成分的相关制品参照本标准执

行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

NY/T673转基因植物及其产品检测抽样

农业部1485号公告-4-2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

农业部1861号公告-1-2012转基因植物及其产品成分检测水稻内标准基因定性PCR方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

科丰8号转化体特异性序列event-specificsequenceofkefeng8

外源插入载体5’端与水稻基因组的连接区序列，包括水稻基因组部分序列和外源载体部分序列。

3.2

阈值threshold

实时荧光PCR中以PCR反应的前15个循环荧光信号作为本底信号，荧光阈值的缺省设置是3～

15个循环荧光信号的标准偏差10倍。

3.3

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。

4原理

1

DB34/T2073—2014

水稻内标准基因SPS检测引物和探针序列参照农业部1861号公告-1-2012中附录A合成，根据科

丰8号转化体特异性序列，设计引物和探针进行实时荧光PCR扩增，即每扩增一条DNA链，就有一个

荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，分别建立水稻内标准基因SPS和科

丰8号转化体实时荧光PCR检测方法，根据Ct值判断试样中是否含有科丰8号转化体成分。

5试剂与材