GB/T 45221-2025 化学品 EASZY试验 利用转基因tg(cyp19a1b:GFP)斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质

GB/T 45221-2025 Chemicals—EASZY assay—Detection of endorine active substances, acting through estrogen receptors, using tansgeic tg(cyp19a1b:GFP) zebrafish embryos

国家标准 中文简体 现行 页数:48页 | 格式:PDF

基本信息

标准号
GB/T 45221-2025
相关服务
标准类型
国家标准
标准状态
现行
中国标准分类号(CCS)
国际标准分类号(ICS)
发布日期
2025-01-24
实施日期
2025-05-01
发布单位/组织
国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会
归口单位
全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC 251)
适用范围
本文件描述了利用转基因tg(cyp19a1b:GFP)斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质的EASZY试验方法,包括试验原理、受试物信息、能力验证化学品、试验准备、试验程序、数据分析和结果评价、质量保证与质量控制、结果报告。
本文件适用于筛选和评估化学品中的内分泌活性物质。

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研制信息

起草单位:
广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)、生态环境部固体废物与化学品管理技术中心、广东省生物技术研究院(广东省实验动物监测中心)、中检科健(天津)检验检测有限责任公司、清华大学、完美(广东)日用品有限公司
起草人:
梅承芳、许玫英、许玉洁、李建军、窦从从、周小红、丰时运、王鹏、高亮、刘洪英、曾国驱、刘超武、周丽丽、刘纯新、肖亿金、高彩霞、袁艺
出版信息:
页数:48页 | 字数:65 千字 | 开本: 大16开

内容描述

ICS13300

CCSA8.0

中华人民共和国国家标准

GB/T45221—2025

化学品EASZY试验利用转基因tg

c19a1bGFP斑马鱼胚胎通过

(yp:)

雌激素受体检测内分泌活性物质

Chemicals—EASZYassa—Detectionofendorineactivesubstancesactin

y,g

throuhestroenrecetorsusintanseictc19a1bGFPzebrafish

ggp,ggg(yp:)

embryos

2025-01-24发布2025-05-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T45221—2025

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义缩略语

3、………………………1

试验原理

4…………………2

受试物信息

5………………3

能力验证化学品

6…………………………3

试验准备

7…………………4

试验程序

8…………………6

数据分析和结果评价

9……………………7

质量保证与质量控制

10……………………8

结果报告

11…………………8

附录资料性基因构造

A()tg(cyp19a1b:GFP)………10

附录资料性通过诱导表达来测定化学品产生雌激素活性的途径

B()GFP………11

附录资料性试验流程

C()EASZY……………………13

附录资料性试验成像分析

D()EASZY………………15

附录资料性后转基因斑马鱼体内荧光成像

E()96h…………………16

附录资料性转基因斑马鱼的体内成像广角荧光显微镜

F():………18

附录资料性转基因斑马鱼的体内成像中图像分析宏的使用示例

G():ImageJ……19

附录资料性数据报告和分析

H()………………………24

附录资料性数据统计分析的流程图

I()………………31

附录资料性试验中的浓度反应关系示例

J()EASZY-………………32

参考文献

……………………38

GB/T45221—2025

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC251)。

本文件起草单位广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心生态环境部固体废物

:()、

与化学品管理技术中心广东省生物技术研究院广东省实验动物监测中心中检科健天津检验检测

、()、()

有限责任公司清华大学完美广东日用品有限公司

、、()。

本文件主要起草人梅承芳许玫英许玉洁李建军窦从从周小红丰时运王鹏高亮刘洪英

:、、、、、、、、、、

曾国驱刘超武周丽丽刘纯新肖亿金高彩霞袁艺

、、、、、、。

GB/T45221—2025

引言

利用转基因斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质试验

EASZY[tg(cyp19a1b:GFP)]

是一种基于机制的体内筛选试验旨在通过诱导启动子驱动的绿色荧光蛋白的表

,cyp19a1b(GFP)

达检测作为雌激素受体激动剂的内分泌活性物质试验可用于检测化学物质对转基因tg

,。EASZY

斑马鱼胚胎暴露的雌激素活性附录描述了用于建立转基因品系的基因

(cyp19a1b:GFP)96h。A

结构

基因编码的脑芳香化酶是一种负责从雄激素中合成雌激素的酶在鱼类中

cyp19a1b,。,cyp19a1b

基因的表达仅限于放射状胶质细胞它是从胚胎期到成年期产生新神经元的祖代细胞基因

,。cyp19a1b

的转录需要被激活的雌激素受体结合于雌激素反应元件的配体复合物以及位于

(ERs)、(EREs)-ER

基因启动子区域的半个共同参与调控还需要与胶质细胞反应元件

cyp19a1bEREs。cyp19a1bx

结合的胶质细胞特异性因子与序列的协同作用在基因的细胞特异性

(GxRE)ERE。GxREcyp19a1b

调控及其受雌激素的调控中发挥着重要作用

除雌激素外类固醇雄激素也可调控基因的转录活性对于可芳构化的雄激素如睾

,cyp19a1b。(

酮这种调控预示着它们可被芳构化为雌激素随后与结合并诱导的表达而不可芳构

),,ERscyp19a1b。

化的雄激素中酮睾酮无法诱导的表达二氢睾酮则已被证实具有雌激素样活

,11cyp19a1b;5α-(DHT)

性它通过依赖性途径诱导的表达这可能是由于通过羟基类固醇脱氢酶的作

,ERcyp19a1b。DHT3β-

用转化为一种已知的雌激素类固醇二醇见附录

———β-(B)。

在斑马鱼胚胎的端脑视前区和下丘脑中可检测到和的表达但对于本文件中

、ERβ1ERβ2mRNA,

所处发育阶段的斑马鱼胚胎在其大脑中未检测到的转录体这表明和或可驱动芳

,ERα。ERβ1/ERβ2

香化酶的表达其中斑马鱼比对天然和合成雌激素具有更高的亲和力这与已报道的人

B,ERβ2ERα,

亚型对这些物质的亲和力不同

ERs。

在转基因tg斑马鱼中完美地模拟了斑马鱼大脑中内源性的表

(cyp19a1b:GFP),GFPcyp19a1b

达因此测量tg胚胎中的报告基因可用于评估化学品诱导基因表

。,(cyp19a1b:GFP)GFP,cyp19a1b

达的能力

试验技术已成功应用于测试一批化合物包括天然和合成激素药物农药工业化学

EASZY,、、、

品用于评估它们在tg斑马鱼胚胎中诱导的能力

,(cyp19a1b:GFP)GFP。

经济合作与发展组织修订后的指南文件已将试验确定为内分泌

(OECD)No.150EASZYOECD

评估概念框架中的级鱼类筛选试验即一种提供关于特定内分泌干扰机制通路数据的体内试验作

3,/。

为级筛选试验试验可通过是否诱导由调控的启动子驱动的来识别

3,EASZYERcyp19a1bGFP,ER

信号通路上的活性和非活性受试物质试验数据不宜用于化学品的风险评估

。。

GB/T45221—2025

化学品EASZY试验利用转基因tg

c19a1bGFP斑马鱼胚胎通过

(yp:)

雌激素受体检测内分泌活性物质

1范围

本文件描述了利用转基因tg斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质的

(cyp19a1b:GFP)

试验方法包括试验原理受试物信息能力验证化学品试验准备试验程序数据分析和结果

EASZY,、、、、、

评价质量保证与质量控制结果报告

、、。

本文件适用于筛选和评估化学品中的内分泌活性物质

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

水质物质对蚤类大型蚤急性毒性测定方法

GB/T13266()

3术语和定义缩略语

31术语和定义

.

下列术语和定义适用于本文件

311

..

激动剂agonist

能结合并激活特异性核受体诱导核受体调控基因转录活性的化学物质或配体

,。

312

..

拮抗剂antagonist

能结合核受体阻断或者抑制激动剂配体介导的反应的化学物质或配体

,。

313

..

活性受试物activetestchemical

能显著诱导表达且对的最低平均诱导水平大于空白对照组两倍的受试化合物

GFPGFP。

314

..

脑芳香化酶brainaromatase

由基因编码负责雌激素的内源性合成的酶

cyp19a1b,。

315

..

效应浓度effectconcentrationECx

;

在给定测试周期内与对照组相比导致胚胎荧光强度降低x的受试物浓度

,,%。

316

..

雌激素活性estrogenicactivity

受试物模拟雌二醇作用的能力以雌激素受体特异性的方式激活内源性和或由

17β-,cyp19a1b/

1

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