DB34/T 2721-2016 转基因棉花土壤和水体环境安全检测技术操作规程

DB34/T 2721-2016 Genetically modified cotton soil and water environmental safety detection technology operating procedures

安徽省地方标准 简体中文 废止 页数:13页 | 格式:PDF

基本信息

标准号
DB34/T 2721-2016
标准类型
安徽省地方标准
标准状态
废止
中国标准分类号(CCS)
国际标准分类号(ICS)
发布日期
2016-09-27
实施日期
2016-10-27
发布单位/组织
安徽省市场监督管理局
归口单位
安徽省农业标准化技术委员会
适用范围
本标准规定了转基因棉花土壤养分(有机质、全氮、硝态氮、铵态氮、有效磷、速效钾)、土壤线虫、土壤酶活性(脲酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶)、土壤微生物多样性及土壤、水体中 Bt 蛋白含量的术语与定义、取样方法、检测方法等技术要求。 本标准适用于转基因棉花土壤和水体环境安全检测。

发布历史

研制信息

起草单位:
安徽省农业科学院棉花研究所、中国农业科学院棉花研究所、上海市农业科学院 生物技术研究所
起草人:
郑曙峰、刘小玲、雒珺瑜、刘华、陈敏、李常凤、王维、徐道青、阚画春、崔 金杰、唐雪明
出版信息:
页数:13页 | 字数:- | 开本: -

内容描述

ICS65.020

B04

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2721—2016

转基因棉花土壤和水体环境安全检测

技术操作规程

Codeofpracticefortechnologyofsoilandwaterenvironmentalsafetydetectionof

transgeniccotton

文稿版次选择

2016-09-27发布2016-10-27实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2721—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院棉花研究所提出。

本标准归口单位:安徽省农业标准化技术委员会。

本标准起草单位:安徽省农业科学院棉花研究所、中国农业科学院棉花研究所、上海市农业科学院

生物技术研究所。

本标准主要起草人:郑曙峰、刘小玲、雒珺瑜、刘华、陈敏、李常凤、王维、徐道青、阚画春、崔

金杰、唐雪明。

I

DB34/T2721—2016

转基因棉花土壤和水体环境安全检测技术操作规程

1范围

本标准规定了转基因棉花土壤养分(有机质、全氮、硝态氮、铵态氮、有效磷、速效钾)、土壤线

虫、土壤酶活性(脲酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶)、土壤微生物多样性及土壤、水体中Bt蛋白含量

的术语与定义、取样方法、检测方法等技术要求。

本标准适用于转基因棉花土壤和水体环境安全检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

LY/T1228森林土壤氮的测定

LY/T1234森林土壤钾的测定

NY/T88土壤全磷测定法

NY/T1121.1土壤检测第1部分:土壤样品的采集、处理和贮存

NY/T1121.6土壤检测第6部分:土壤有机质的测定

NY/T1121.24土壤检测第24部分:土壤全氮的测定自动定氮仪法

NY/T1121.25土壤检测第25部分:土壤有效磷的测定连续流动分析仪法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

贝尔曼浅盘法Baermanntraymethod

将10目不锈钢筛盘放入配套的浅盘中,在筛盘上放置两层纱网,并加一层线虫滤纸,把土样均匀

铺在滤纸上,加水至浸没土壤,在20℃室温条件下经过48h后,收集浅盘中的水,通过3个筛网过

筛、冲洗,收集后计数的一种土壤线虫分离方法。

4检测方法

4.1原理

4.1.1采用贝尔曼浅盘法分离土壤线虫,鉴定出线虫的营养性类群,通过引入多样性指数、均匀度指

数等生态学指数进行线虫群落多样性的检测分析。

1

DB34/T2721—2016

4.1.2采用苯酚-次氯酸钠比色法,根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚来分析土壤

脲酶活性。

4.1.3采用磷酸苯二钠比色法,即以磷酸苯二钠为基质,酶解释放出的酚,使其与氯代二溴对苯醌亚

胺试剂反应生色测定出游离的酚量来表示土壤碱性磷酸酶的活性。

4.1.4采用高锰酸钾滴定法,即用高锰酸钾溶液滴定过氧化氢分解反应,剩余过氧化氢的量来表示土

壤过氧化氢酶活性。

4.1.5采用PCR-DGGE技术进行微生物多样性分析。

4.1.6采用酶联免疫法检测转基因棉花土壤、水体中Bt蛋白的含量。

4.2仪器

4.2.1电子天平(感量0.01g)、冰箱、恒温水浴锅、体视显微镜(40×)、倒置显微镜(100×和

400×)。

4.2.2研磨机、玻璃研钵、土壤筛:孔径2mm(10目);1mm(16目)、分析天平、50ml三角瓶、

200ml三角瓶、恒温培养箱、50mL容量瓶、紫外可见分光光度计、震荡机、滴定管。

4.2.3高速冷冻离心机(-11℃—40℃,离心力大于30,000g)、PCR扩增仪、电泳仪等。

4.2.4研钵、冷冻离心机(-11℃—40℃,离心力大于30,000g)、酶标仪(波长340-850nm)、摇

床、低温冰箱、单道微量移液器(2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL,连续可调)、

多道微量移液器(8道或12道,10μL、100μL、300μL,连续可调)。

4.3试剂及配制方法

4.3.1试剂要求

除非另有说明,仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级超纯水。

4.3.24%福尔马林

将100mL40%福尔马林溶液加入到900mL的水中,混匀。

4.3.3甘油-酒精-水混合液

将100mL甘油和400mL酒精加入到500mL的水中,混匀。

4.3.410%尿素

称取10g尿素,用水溶至100mL。

4.3.5柠檬酸盐缓冲液(PH6.7)

称取184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾溶于蒸馏水。将两溶液合并,用1mol/LNaOH将pH调

至6.7,用水稀释至1000mL。

4.3.6苯酚钠溶液(1.35mol/L)

称取62.5克苯酚溶于少量乙醇,加2mL甲醇和18.5mL丙酮,用乙醇稀释至100mL(A),

存于冰箱中;27克NaOH溶于100mL水(B)。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将2溶液各20mL

混合,用蒸馏水稀释至100mL。

4.3.7次氯酸钠溶液

2

DB34/T2721—2016

用水稀释试剂,至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。

4.3.8氮的标准溶液

精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL,得到1mL含有0.1mg氮的标准液。使用

前将此溶液稀释10倍使用。

4.3.9缓冲液:硼酸盐缓冲液(pH9.6)

称取19.05g硼砂溶至1L,配成0.05mol/L硼砂溶液;称取8gNaOH溶至1L,配成0.2mol/L

NaOH溶液;取50mL的0.05mol/L硼砂溶液加23mL的0.2mol/LNaOH溶液稀释至200mL。

4.3.10氯代二溴对苯醌亚胺试

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