DB22/T 2053-2014 饲料中构巢曲霉测定 实时荧光PCR方法

ICS07.100.30

B20

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2053—2014

饲料中构巢曲霉测定实时荧光PCR方法

DeterminationofAspergillusnidulansinfeedstuffsReal-timePCRmethod

2014-02-28发布2014-04-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2053—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华

人民共和国吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、王莹、郎乐、张庆波、韩冰雪、李媛媛、王庆峰。

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DB22/T2053—2014

饲料中构巢曲霉测定实时荧光PCR方法

1范围

本标准规定了饲料中构巢曲霉的实时荧光PCR检验方法。

本标准适用于饲料中构巢曲霉的快速筛选检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T13092饲料中霉菌总数的测定

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

实时荧光PCRreal-timefluorescentPCR

实时荧光聚合酶链式反应。

3.2

Ct值cyclethresholdvalue

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4原理

对样品的培养物进行DNA提取，通过实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅曲线，从而对饲

料中的构巢曲霉进行快速检测。

5试剂

除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA

酶污染的容器分装。

5.1引物及探针：

a)上游引物：5’-GGCTACACCGAGGACGACAT-3’

b)下游引物：5’-CCCGCCTTAGCATCGAAGA-3’

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DB22/T2053—2014

c)探针：5’-FAM-TCAACGGTGACACCCGCTCTT-TAMR