DB15/T 3534-2024 籽用西葫芦叶片三种病毒RT-PCR检测技术规程

ICS65.020.01

CCSB04

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3534—2024

籽用西葫芦叶片三种病毒RT-PCR检测

技术规程

TechnicalcodeofpracticeforRT-PCRdetectionofthreeviruses

fromleavesofseed-usedpumpkin(CucurbitapepoL.)

2024-06-28发布2024-07-28实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T3534—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古弘昌农业有限责任公司、呼和浩市农牧技术推广中心。

本文件主要起草人：王萍、龙建国、刘杰才、陈贵华、苏利民、孙婧、许珂、尚鹏。

I

DB15/T3534—2024

籽用西葫芦叶片三种病毒RT-PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了籽用西葫芦叶片三种病毒RT-PCR检测技术中涉及的术语和定义、试剂与材料、仪器和

设备、对照设置、样品采集、样品病毒检测、结果分析。

本文件适用于籽用西葫芦叶片中黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）、西瓜花叶病毒

（Watermelonmosaicvirus，WMV）、小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV）

的RT-PCR检测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

黄瓜花叶病毒Cucumbermosaicvirus

属于雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒（Cucumovirus），可以侵染1000多种植物。

主要通过蚜虫以非持久方式传播，也是典型的种传病毒。黄瓜花叶病毒一般为系统侵染植物，主要表现

为叶片斑驳花叶，叶肉浅绿，叶脉深绿；严重时呈现叶片皱缩，叶肉退化，蕨叶等症状。

西瓜花叶病毒Watermelonmosaicvirus

属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus），在自然界中通过蚜虫以非持久

性方式传播，也可经汁液摩擦接种传播。受侵染的病株叶片表现花叶、畸形、新生叶片扭曲，植株生长

受阻，果实畸形。

小西葫芦黄化花叶病毒Zucchiniyellowmosaicvirus

属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus），可由多种蚜虫以非持久性方式

传播，也能通过种子传播。小西葫芦黄化花叶病毒表现为系统侵染，整株花叶、黄化、叶片皱缩、果实

畸形、表面有泡状或者瘤状突起。

4试剂与材料

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DB15/T3534—2024

试剂

琼脂糖、核酸染料、PremixTaq酶、TRIzol试剂、PCR产物回收试剂盒、TransScriptOne-StepgDNA

RemovalandcDNASynthesisSuperMix试剂盒、pMD18-T载体、大肠杆菌感受态细胞DH5a、DNA分子量

标准：可以清楚区分100bp～500bp的DNA片段。

溶液配制

4.2.110mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，

再加水定容至200mL。

4.2.20.5mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液(pH8.0)：称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加入

70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(见4.3)直