GB/T 25223-2010 动植物油脂 甾醇组成和甾醇总量的测定 气相色谱法

ICS67.200.10

X14

中华人民共和国国家标准

/—/:

GBT252232010ISO122281999

动植物油脂

甾醇组成和甾醇总量的测定

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

气相色谱法

—

Animalandveetablefatsandoils

g

Determinationofindividualandtotalsterols

—

contentsGaschromatorahicmethod

gp

(:,)

ISO122281999IDT

2010-09-26发布2011-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

/—/:

GBT252232010ISO122281999

前言

:《》(

本标准等同采用动植物油脂甾醇组成和甾醇总量的测定气相色谱法英

ISO122281999

文版)。

,::

为了便于使用本标准对ISO122281999进行了下列编辑性修改

———“”“”;

将本国际标准改为本标准

———删除了国际标准的前言;

———“”“,”;

用小数点代替国际标准中作为小数点的逗号

.

———/:;/

规范性引用文件中用等同采用的GBT15687代替ISO6611989用适用的GBT6682代替

:;

ISO36961987

:,、

———将的硅胶薄层板调整为原5.5~5.106.5~6.13条款顺序及标准

ISO1222819995.66.5

中所涉及条款作了相关调整;

———对公式进行了编号。

本标准的附录为资料性附录。

A

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

Ⅰ

/—/:

GBT252232010ISO122281999

动植物油脂

甾醇组成和甾醇总量的测定

气相色谱法

1范围

、、、

本标准规定了采用气相色谱测定动植物油脂中甾醇组成和甾醇总量的术语和定义原理试剂仪

、、。

器设备操作步骤结果表示和精密度

本标准适用于动植物油脂中甾醇组成和甾醇总量的测定。

2规范性引用文件

。,

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件其随后所有

(),,

的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究

。,。

是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准

/分析实验室用水规格和试验方法(/—,:,)

GBT6682GBT66822008ISO36961987MOD

/动植物油脂试样的制备(/—,:,)

GBT15687GBT156872008ISO6612003IDT

3术语和定义

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

甾醇组成erols

comositionofst

p

,()。

本标准规定条件下测得的甾醇总量中从胆甾醇到燕麦甾烯醇的单个甾醇组分见表

Δ7-1

:,。

注组分含量通过峰面积归一化计算以质量分数表示

3.2

甾醇总量totalsterolcontent

,,

本标准规定条件下测得的从胆甾醇到燕麦甾烯醇所有单个甾醇的总质量占试样的质量分数

Δ7-

/()。

以m100表示见表1

gg

4原理

,。

样品用氢氧化钾乙醇溶液回流皂化后不皂化物以氧化铝层析柱进行固相萃取分离脂肪酸阴离

-

,。。

子被氧化铝层析柱吸附甾醇流出层析柱通过薄层色谱法将甾醇与不皂化物分离以桦木醇为内标

,。

物通过气相色谱法对甾醇及其含量进行定性和定量

5试剂

,,/。

除非另有说明仅使用分析纯试剂水须符合GBT6682规定的三级水要求

/:,(),

氢氧化钾乙醇溶液溶解氢氧化钾于水中再用乙醇稀释溶

5.10.5molL-3g5mL100mL5.3

液应呈无色或淡黄色。

桦木醇内标溶液:/()。

5.21.0mmL的丙酮溶液见5.9的注

g

:,()。

注在橄榄果渣油里可能含桦木醇推荐用胆甾烷醇胆甾烷醇为内标物

5-α--3

β

:()。

5.3乙醇纯度≥95%体积分数

:,,。

5.4氧化铝中性粒径0.063mm~0.200mmⅠ级活性

1

/—/:

GBT252232010ISO122281999

:,。

5.5乙醚新蒸馏无过氧化物和残留物

:,。()。

警告乙醚极易燃可以形成爆炸性的过氧化物空气中的爆炸极限为1.7%~48%体积分数

使用时应采取特殊的预防措施。

:()()。

5.6展开剂V己烷+V乙醚=1+1

薄层色谱用标准溶液:/胆甾醇丙酮溶液,/桦木醇丙酮溶液。

5.71.0mmL5.0mmL

gg

:。

5.8显色剂甲醇

:()。

5.9硅烷化试剂在甲基三甲基硅烷七氟丁酰胺中加入甲基咪唑

N--N-MSHFBA50L1-

μ

:,,

注一般不使用其他硅烷化试剂除非采用特别措施以保证桦木醇的两个羟基被硅烷化否则在气相色谱分离时桦

木醇可能会出现两个峰。

6仪器设备

,。

实验室常规仪器设备以及下列特殊的仪器设备

磨口圆底烧瓶:和。

6.125mL50mL

:,()。

6.2回流冷凝器磨口连接与烧瓶6.1配套

:、,,。

6.3玻璃柱具聚四氟乙烯活塞烧结玻璃砂芯及100mL的储液器长25cm内径1.5cm

:()。

6.4旋转蒸发器附真空泵和水浴锅40℃恒温

:,。

6.5硅胶薄层色谱板20cm×20cm薄层厚度0.25mm

:,。

6.6玻璃展开槽具磨砂玻璃盖应适合规格为20cm×20cm薄层板的使用

6.7微量注射器或微量移液管:。

100L

μ

:。

6.8烘箱可恒温105℃±3℃

:,。

6.9干燥器装有有效的干燥剂用于储存薄层板

:,(),。

6.10反应瓶容量0.3mL具螺纹瓶盖和聚四氟乙烯PTFE线纹封口用于甾醇衍生物的制备

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

:、、。

6.11气相色谱仪具有毛细管柱分流进样装置氢火焰离子化检测器和合适的记录仪

:,,(

6.12石英玻璃或玻璃毛细管柱长25m~60m内径0.2mm~0.25mm固定相SE-54或使用温度

);。

极限最小为280℃~300℃的非极性固定相液膜厚度约为0.1m

μ

6.13气相色谱用微量注射器:。

1L

μ

:。

6.14分析天平感量0.0001g

7扦样

,。

实验室收到的样品应具有真实的代表性运输和储存过程中不得受损和变质

,/。

扦样不是本标准规定的内容推荐按GBT5524执行

8试样制备

按/执行。

GBT15687

9操作步骤

9.1称量

()()。/

称取试样约250m精确至1m于25mL烧瓶6.1中对于甾醇含量低于100m100的油

gggg

,,。

脂可用三倍量的试样并相应地调整试剂用量和相关仪器设备

9.2测定

9.2.1氧化铝柱的制备

()(),(),

在20mL乙醇5.3中加入10g氧化铝5.4并将悬浮液倒入玻璃柱中6.3使氧化铝自然沉

,,。

降打开活塞放出溶剂待液面到达氧化铝顶层时关闭活塞

9.2.2不皂化物的提取

()(),

准确吸取桦木醇内标溶液加于试样烧瓶中再加入氢氧化钾乙醇溶液

1.00mL5.29.15mL-

2

/—/:

GBT252232010ISO122281999

()。,,,,

5.1和少许沸石在烧瓶上连接好回流冷凝器加热并保持混合液微沸15min后停止加热并趁热

(),。

加入5mL乙醇5.3稀释烧瓶中的混合液振摇均匀

()。(),

吸取5mL上述溶液加于准备好的氧化铝柱中9.2.1以50mL圆底烧瓶6.1收集洗脱液打

,。(),

开活塞放出溶剂直到液面到达氧化铝顶层先用5mL乙醇5.3洗提不皂化物再用30mL乙醚

(),/。()。

5.5洗提流速大约为2mLmin用旋转蒸发器6.4去除烧瓶中的溶剂

:,,。

警告此操作中必须采用氧化铝柱不可用硅胶柱或者其他柱代替也不可采用溶剂萃取法

9.2.3薄层色谱

()。()

由9.2.2得到的不皂化物用少量乙醚5.5溶解用微量注射器6.7吸取该溶液点在距离薄层板

,,。

下边缘2cm处样液点成线状线两端距离边缘至少留出3cm间隙吸取5L薄层色谱标准溶液

μ

(),。()()。

5.7在距边缘1.5cm处左右各点一点在展开槽6.6中加入大约100mL展开剂5.6将板放

,。,。

入展开槽中展开直至溶剂到达上边缘取出薄层板在通风橱中挥干溶剂

:。。。

注转移由9.2.2得到的残渣到薄层板上是不必定量的可使用自动点样装置展开槽不需饱和

9.2.4甾醇的分离

(),(),

在薄层色谱板上喷洒甲醇5.8直到甾醇和桦木醇区带在半透明暗色背景下呈现白色桦木醇

。()。用刀片

斑点略低于甾醇区带标记包括标准点上方2mm及可见斑点区下方4mm的区域见图1

,。

刮下全部标记部分的硅胶层并将硅胶全部收集于小烧杯中

:(,)。

注将可见斑点区下方设定为宽于上方下方为4mm上方为2mm是为了避免操作过程中桦木醇的损失葵花

籽油可能显示三个带(甾醇,甾醇和桦木醇)。

Δ5-Δ7-

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

———三萜烯类;

1

2———甲基甾醇;

———甾醇;

3Δ5-

———甾醇;

4Δ7-

———桦木醇;

5

———原点。

6

:,(,),。():

注透明背景上呈现白色区带标记区带斑点下方4mm上方2mm刮下阴影线的部分区带的比移值Rf为

、、、。

桦木醇甾醇甾醇三萜烯

0.30Δ7-0.33Δ5-0.450.53

()

图不皂化物由至步骤获得中甾醇的薄层色谱分离示意图

19.2.39.2.4

3

/—/:

GBT252232010ISO122281999

()。(),

在收集的硅胶中加入0.5mL乙醇5.3用5mL乙醚5.5对烧杯中的硅胶洗提三次并滤入烧

()。()。()。

瓶6.1中用旋转蒸发器6.4将乙醚提取物浓缩至约1mL将浓缩液转移至反应瓶6.10中用

氮气流吹干反应瓶中的溶剂。

9.2.5甾醇三甲基硅醚的制备

()()。,

取100L硅烷化试剂5.9加于浓缩液的反应瓶9.2.4中密封反应瓶置于105℃烘箱中加热

μ

。,()。

15min取出并冷却至室温后将溶液直接注入到气相色谱仪6.11进行分析

9.2.6气相色谱分析

。。

优化程序升温和载气流速使得到的色谱图接近于图已知油的硅烷化甾醇的分离见图

22

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

注:条件下所得色谱图按表确定色谱峰的数目。

9.2.61

()、()()

图葵花籽油菜籽及橄榄油中甾醇的气液色谱图

2ABC

可采用下列色谱参数:

:,,,;

气相色谱柱固定相长内径薄膜厚度

SE-5450m0.25mm0.10m

μ

:,:/,;

载气氢气载气流速36cms分流比1∶20

:;,/

检测器温度及进样口温度320℃柱温采用程序升温方式以4℃min的速度从240℃增加至

255℃;

进样量1L。

μ

也可采用其他等效的毛细管柱。

、、。

用一个含有胆甾醇菜籽甾醇豆甾醇和谷甾醇的标准溶液检查保留时间用空白溶液校正来自溶

、、()。

剂玻璃壁过滤器和手指等可能带来的污染如测定胆甾醇

4

/—/:

GBT252232010ISO122281999

10结果表示

10.1甾醇鉴定

(),