T/CVDA 2-2022 动物新型冠状病毒中和抗体检测技术

ICS11.220

B41

T/CVDA

团体标准

T/CVDA2-2022

动物新型冠状病毒中和抗体检测技术

DetectingtechniqueofneutralizationantibodyagainstSARS-CoV-2inanimals

2022-07-19发布2022-07-25实施

中国兽药协会发布

T/CVDA2—2022

目录

目录1

前言2

1范围3

2规范性引用文件3

3符号和缩略语3

4试剂和材料3

5器材和设备4

6动物血清4

6.1安全防护4

6.2血清采集4

7PRNT实验操作4

7.1安全防护4

7.2材料准备4

7.2.1病毒繁殖5

7.2.2毒价测定5

7.2.3细胞5

7.2.4血清灭活5

7.3检测操作5

7.3.1对照设置5

7.3.2血清稀释5

7.3.3病毒与血清中和6

7.3.4接种细胞6

7.3.5结果判定6

附录A7

A.1培养液7

A.2稀释液7

A.3细胞分散液7

A.4磷酸盐缓冲液(PBS)7

附录B8

B.1材料和试剂8

B.2方法8

B.2.1嵌合SARS-CoV-2S蛋白重组水泡性口炎病毒的构建与拯救8

B.2.2重组病毒的传代与毒价测定9

B.2.3重组病毒的鉴定9

B.2.4rVSVΔG-nCoVS-EGFP为抗原的中和实验的回归分析9

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T/CVDA2—2022

前言

本标准按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由中国兽药协会提出并归口管理，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所起草。

本标准主要起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨医科大学，东北林业大学。

本标准主要起草人：步志高、葛金英、王永、王晓龙、山丹、王喜军。

本标准为首次发布。

2

T/CVDA2—2022

动物新型冠状病毒中和抗体检测技术

1范围

本标准规定了用于动物新型冠状病毒血清中和抗体测定的实验操作方法及结果判定标准。

本标准适用于动物血清中新型冠状病毒中和抗体的定性检测和定量测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则。

GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法。

GB194892008实验室生物安全通用要求。

3符号和缩略语

下列符号和缩略语适用于本标准。

SARS-CoV-2：新型冠状病毒（SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus2）；

VeroE6：非洲绿猴肾细胞（Africangreenmonkeykidneycell）；

rVSVΔG-nCoVS-EGFP：表达绿色荧光蛋白的新型冠状病毒纤突蛋白S嵌合水泡性口炎病毒；

TCID50：半数组织培养感染量（TissueCultureInfectiveDose）；

BSL-2：生物安全2级实验室（BiosafetyLaboratoryLevel-2）；

BSL-3：生物安全3级实验室（BiosafetyLaboratoryLevel-3）；

PRNT：噬斑减少中和试验（plaque-reductionneutralizationtest）；

DMEM：Dulbecco改良的Eagle培养基（Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium）；

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate-BufferedSaline）；

PFU：噬斑形成单位（PlaqueFormingUnit）；

FFU：荧光灶单位（FluorescenceFocusUnits）；

FBS：胎牛血清（FetalBovineSerum）。

4试剂和材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.1水：GB/T6682-2008，二级水。

4.2新型冠状病毒抗体阴性血清，由中国农业科学