T/CMBA 017-2022 人胃肠上皮组织类器官的构建与保藏操作指南

ICS11

CCSC05

T/CMBA

团体标准

T/CMBA017—2022

人胃肠上皮组织类器官的构建与保藏

操作指南

Guidelineofconstructionandpreservationoforganoidsofgastrointestinalepithelial

tissues

2022-3-28发布2022-3-28实施

中国医药生物技术协会发布

T/CMBA017—2022

目次

前言..................................................................................I

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4通则...............................................................................2

5操作流程...........................................................................2

5.1组织获取和类器官构建........................................................2

5.2类器官的传代与冻存..........................................................2

5.3类器官的复苏................................................................3

5.4废弃类器官处置..............................................................3

6质量控制...........................................................................3

附录A（资料性）胃肠上皮类器官培养用主要试剂材料与操作要点..........................4

A.1主要试剂材料................................................................4

A.2类器官构建流程..............................................................4

A.3胃肠上皮类器官培养操作要点..................................................5

附录B（资料性）胃肠上皮类器官鉴定..................................................6

B.1类器官显微镜下状态评估......................................................6

B.2单细胞悬液细胞定量评估......................................................6

B.3细胞活力评估................................................................6

B.4类器官的形态学及免疫标记鉴定................................................6

附录C（资料性）类器官的核酸与蛋白质提取............................................7

C.1DNA提取...................................................................7

C.2RNA提取...................................................................7

C.3蛋白质提取..................................................................8

参考文献..............................................................................9

T/CMBA017—2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的

规定起草。

本文件由中国医药生物技术协会组织生物样本库分会提出。

本文件由中国医药生物技术协会归口。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件起草单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院、生物芯片上海国家工程研究中心、上海

芯超生物科技有限公司。

本文件主要起草人：于颖彦、向臻、臧潞、燕然林、杨蕊馨、关颖欣、朱正纲、郜恒骏、张小

燕。

I

T/CMBA017—2022

人胃肠上皮组织类器官的构建与保藏操作指南

1范围

本文件描述了从人胃肠道上皮活组织及其上皮起源的病变活组织提取上皮细胞构建类器官的原理、

实验方法、传代、储存以及复苏方法。

本文件适用于科研用胃肠道上皮活组织及其上皮起源的病变活组织类器官的培养、类器官传代、类

器官储存和复苏。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T38736-2020人类生物样本保藏伦理要求

T/NAHIEM6医学研究伦理委员会通用要求

3术语和定义

GB/T38736-2020界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

胃肠道上皮或上皮来源的病变活组织类器官organoidsofgastrointestinalepitheliumand

epitheliallesions

由正常胃肠道上皮组织或由上皮来源的病变组织中的上皮干细胞或者多能干细胞通过体外诱导分

化而来的，在细胞成分、组织架构及功能上与胃肠道正常上皮或者上皮来源病变组织具有相似性的3D

微小活组织结构。

3.2

胃肠道类器官培养基culturemediumofgastrointestinalorganoid

可以实现体外模拟胃肠道上皮组织细胞生长所需微环境，能诱导胃肠道干细胞和多能干细胞分化为

各种类型的胃肠道上皮细胞，同时能够持续维持胃肠道干细胞和多能干细胞的特性，实现体外胃肠道活

组织类器官的长期存活的培养介质。

3.3

3D培养基质胶matrigelmatrix

由层黏连蛋白、IV型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等组成，加入有生长因子和基质金属蛋白酶。

3D培养基质胶在室温条件下能够聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜结构和功

能，能够为胃肠道黏膜上皮细胞的生长提供支架。

3.4

传代passage

1

将培养状态良好的类器官采用物理吹打和化学酶消化方法使其解离为单细胞悬液，再重新接种于与

原培养条件相同的培养体系内,继续进行类器官培养。新一代类器官与原来类器官具有相同的形态功能

特征。

3.5

冻存cryopreservation

使暂时不需要进行实验研究的类器官脱离生长状态，但又可以保持其细胞组成、形态和功能特征的

低温冷冻过程。

3.6

复苏thawing

将处于深低温冻存的类器官取出恢复其继续生长状态的过程。

3.7

知情同意informedconsent

与组织细胞提供者签署书面的合法有效的知情同意书，包括但不限于合适条件下潜在研究应用、研

究成果潜在的商业应用及其他问题所适用的内容。

注：伦理要求与隐私保护见GB/T38736-2020第3.7条。

4通则

4.1胃肠道上皮类器官采集与处理应获得伦理委员会审批。

4.2组织采集前应签署知情同意书，应在充分告知、尊重提供者权利的前提下签署知情同意书。

4.3组织的处理宜采用可操作性强、成功率高、结果稳定的方法。

4.4胃肠道上皮类器官采集与处理应由接受过专业培训的医护人员/工作人员进行。

5操作流程

5.1组织获取和类器官构建

5.1.1组织的获取

肿瘤组织切取时应避开有明显坏死的区域，且组织块应不小于5mm×5mm。新鲜组织应在离

体30min内切取。

5.1.2组织的清洗

切取的组织应进行振荡清洗，去除污浊。

5.1.3类器官的构建

可采用酶消化法将人胃肠道上皮组织或者上皮来源的病变