DB22/T 1976-2013 人参中11种农药残留量的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法

ICS65.020.20

B38

DB22

吉林省地方标准

DB22/T1976—2013

人参中11种农药残留量的测定高效液相

色谱-质谱/质谱法

DeterminationofResiduesof11pestcidesinGinsengHighPerformanceLiquid

Chromatography-TandemMassSpectrometry

2013-12-18发布2013-12-31实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1976—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省农业委员会提出并归口。

本标准起草单位：吉林农业大学、吉林省参茸办公室、吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：许允成、王燕、崔丽丽、王雪、杨丽娜、马浴斌、姜云、陈晓琳、陈长卿、白

庆荣、王春伟、卢宝慧、李爱军、高洁。

I

DB22/T1976—2013

人参中11种农药残留量的测定高效液相色谱-质谱/质谱法的测定

高效液相色谱-质谱/质谱法

警告——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任

采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本标准规定了人参中丙环唑、戊唑醇、腈菌唑、多菌灵、福美双、氟吗啉、吡唑醚菌酯、异菌脲、

咪鲜胺、霜脲氰和霜霉威残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于鲜人参根、茎、叶中丙环唑、戊唑醇、腈菌唑、多菌灵、福美双、氟吗啉、吡唑醚菌

酯、异菌脲、咪鲜胺、霜脲氰和霜霉威残留量的测定。

本标准方法定量限：0.05ng～0.5ng。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6379测试方法与结果的准确度（准确度与精密度）

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

3原理

试料中的丙环唑、福美双、吡唑醚菌酯、腈菌唑、戊唑醇、异菌脲、霜脲氰、氟吗啉用丙酮提取，

咪鲜胺、霜霉威用乙腈提取，多菌灵用0.1%甲酸水提取；试料中的丙环唑、腈菌唑、咪鲜胺、霜霉威、

戊唑醇、吡唑醚菌酯、异菌脲、霜脲氰、氟吗啉经PSA固相萃取小柱净化，多菌灵经复合固相萃取小柱

净化，福美双经活性碳固相萃取小柱净化；多菌灵用乙腈-0.1%甲酸水混合溶液（3+1）洗脱，其余10种

农药用乙腈-甲苯混合溶液（3+1）洗脱，用高效液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。

4试剂与材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1乙腈（CH3CN）：优级纯。

4.2甲苯（C7H8）：优级纯。

4.3丙酮（C3H6O）：优级纯。

4.4甲酸（HCOOH）：色谱纯。

4.5乙腈-甲苯混合溶液（3+1）：量取3份乙腈和1份甲苯，混匀。

4.60.1%甲酸水溶液配制：1份甲酸+999份水。

1

DB22/T1976—2013

4.7乙腈-0.1%甲酸（3+1）：量取3份乙腈和1份0.1%甲酸水，混匀。

4.8有机相微孔滤膜：0.22µm。

4.9PSA固相萃取柱：500mg/6mL或相当者；使用前，用10mL乙腈-甲苯（4.5）活化，其主要成分

为，N—丙基乙二胺。

4.10GPR固相萃取柱：1500mg/12mL或相当者；使用前，用10mL乙腈-甲苯（4.5）活化，其主要

成分活性炭，N—丙基乙二胺，C18。

4.11活性碳固相萃取柱，500mg/6mL。使用前，用10mL乙腈-0.1%甲酸（4.7）活化，其主要成分

为活性炭。

4.12农药标准品

4.12.1丙环唑（C15H17Cl2N3O2，纯度为99.9%，CASNo.60207-90-1）。

4.12.2福美双(C6H12N2S4，纯度为98.9%，CASNo.137-26-8)。

4.12.3吡唑醚菌酯(C19H18ClN3O4，纯度为99.5%，CASNo.175013-18-0)。

4.12.4腈菌唑(C15H17Cl2N3O2，纯度为98.5%，CASNo.88671-89-0)。

4.12.5戊唑醇（C16H22ClN3O，纯度为99.8%，CASNo.107534-96-3）。

4.12.6咪鲜胺(C15H16Cl3N3O2，纯度为99.0%，CASNo.67747-09-5)。

4.12.7异菌脲（C13H13Cl2N3O3，纯度为99.5%，CASNo.36734-19-7）。

4.12.8霜脲氰（C7H10N4O3，纯度为99.4%，CASNo.57966-95-7）。

4.12.9霜霉威(C9H20N2O2，纯度为98.5%，CASNo.24579-73-5)。

4.12.10氟吗啉(C21H22NFO4，纯度为97.0%，CASNo.211867-47-9)。

4.12.11多菌灵(C9H9N3O2，纯度为98.2%，CASNo.10605-21-7)。

4.13标准储备液：分别称取上述丙环唑等11种农药标准品10.0mg(精确至0.1mg)，分别置于100

mL棕色容量瓶中，用乙腈（多菌灵用0.1%甲酸水）溶解，并定容配制成浓度100μg/mL的标准储备

液，-18℃以下保存，可保存6个月。

4.14标准工作液的制备：准确移取标准储备溶液，用乙腈（多菌灵用0.1%甲酸水）稀释、定容，配

制成需要的工作标准溶液，现用现配。

5仪器

5.1高效液相色谱仪。

5.2三重四级杆质谱联用仪。

5.3天平：感量为0.001g和0.0001g。

5.4高速离心机：10000r/min。

5.5涡旋混合器。

5.6旋转蒸发仪。

5.7组织捣碎机。

5.8高速粉碎机。

6试样制备

6.1人参根、茎、叶：取不少于200g试样，置于组织捣碎机中捣碎、混匀，装入聚乙烯塑料袋中，

密封，于-20℃保存。

2

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6.2干人参样品制备：取不少于200g试样，置于高速粉碎机中粉碎、混匀，装入聚乙烯塑料袋中，

密封，于-20℃保存。

7分析步骤

7.1试料称量

鲜样称量：在常温下解冻并均匀混合后，称取约4.0g，精确到1.0mg，于50mL离心管中。

干样称量：称取约1.0g，精确到0.1mg。

7.2测定

7.2.1提取

7.2.1.1丙环唑、福美双、吡唑醚菌酯、腈菌唑、戊唑醇、异菌脲、霜脲氰、氟吗啉：取称量好的试

料，加入丙酮20mL，涡旋混合1min后，以8000r/min离心5min，取上清液，移至浓缩瓶中，再加

入20mL丙酮，重复提取一次，合并上清液，于35℃下旋转浓缩至近干，加入乙腈-甲苯（4.5）5mL

溶解，待净化。

7.2.1.2咪鲜胺、霜霉威：取称量好的试料，加入乙腈20mL，涡旋混合1min后，以8000r/min离

心5min，取上清液，移至浓缩瓶中，再加入20mL乙腈，重复提取一次，合并上清液，于35℃下旋

转浓缩至近干，加入乙腈-甲苯（4.5）5mL溶解，待净化。

7.2.1.3多菌灵用0.1%甲酸水提取，加入0.1%甲酸（4.6）20mL，涡旋混合1min后，以8000r/min

离心5min，取上清液，移至浓缩瓶中，再加入20mL0.1%甲酸（4.6），重复提取一次，合并上清液，

于35℃下旋转浓缩至近干，加入0.1%甲酸水（4.6）5mL溶解，待净化。

7.2.2净化

7.2.2.1丙环唑、腈菌唑、咪鲜胺、霜霉威、戊唑醇、吡唑醚菌酯、异菌脲、霜脲氰、氟吗啉:用10mL

乙腈-甲苯（4.5）预淋洗固相萃取柱(4.9)，淋洗液弃去。将2.5mL提取液（7.2.1.1或7.2.1.2）倾入固相

萃取柱中，用20mL乙腈-甲苯（4.5）进行洗脱。收集全部洗脱液于250mL浓缩瓶中，于35℃水浴中

旋转浓缩至近干。准确加入2.0mL乙腈，加盖充分溶解，经0.22μm滤膜过滤后于1.5mL进样瓶中，

供液相色谱-质谱/质谱测定。

7.2.2.2多菌灵：用10mL乙腈-0.1%甲酸（4.7）预淋洗复合固相萃取柱（4.10），弃去淋洗液。将

2.5mL提取液（7.2.1.3）倾入固相萃取柱中，用20mL乙腈-0.1%甲酸（4.7）进行洗脱。收集全部洗

脱液于浓缩瓶中，于35℃水浴中旋转浓缩至近干。准确加入2mL0.1%甲酸（4.6），加盖充分溶解，

经0.22μm滤膜过滤后于1.5mL进样瓶中，供液相色谱-质谱/质谱测定。

7.2.2.3福美双：用10mL乙腈-甲苯（4.5）预淋洗活性碳固相萃取柱（4.11），弃去流出液。将2.5

mL提取液（7.2.1.1）倾入固相萃取柱中，用20mL乙腈-甲苯（4.5）进行洗脱。收集全部洗脱液于浓

缩瓶中，于35℃水浴中旋转浓缩至近干。准确加入2.0mL乙腈，加盖充分溶解，经0.22μm滤膜

过滤后于1.5mL进样瓶中，供液相色谱-质谱/质谱测定。

7.2.3测定

色谱参考条件：

a)色谱柱：C18（φ2.1mm×150mm，粒径5μm）或相当者；

b)流动相及流速见表1；

c)色谱柱柱温度：40℃；

d)离子源温度：725℃；

e)进样量：10μL；

3

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表1流动相及流速选择

步骤总时间（min）流速（μL/min）0.1%甲酸水溶液（%）乙腈（%）

10.02505050

28.02501090

312.02501090

412.12505050

518.02505050

质谱参考条件：

a)扫描方式：正离子扫描，多反应监测MRM；

b)离子源温度（TEM）：725℃

c)电离方式：电喷雾ESI；

d)电喷雾电压：5.5kV；

e)定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压见表2。

表2选择监测离子(m/z)、碰撞气能量及去簇电压等参数

农药名称保留时间/（min）定量离子对/（m>z）定性离子对/（m>z）去簇电压/（V）碰撞气能量/（eV）

342.1>159.1

丙环唑10.70342.1>159.15238;20

342.1>205.1

308.2>70.1

戊唑醇9.40308.2>125.12719;36

308.2>125.1

289.1>125.1

腈菌唑8.92289.1>125.12516;34

289.1>194.1

192.1>160.1

多菌灵1.94192.1>160.12725;41

192.1>132.1

263.0>143.0

福美双6.29263.0>143.04517;45

263.0>88.0

371.9>284.9

氟吗啉5.59371.9>284.95014;26

371.9>164.8

吡唑醚菌388.0>194.0

12.14388.0>194.0619;29

酯388.0>163.0

330.0>244.9

异菌脲9.80330>244.92515;13

330.0>287.9

376.1>308.0

咪鲜胺7.32376.1>308.03117;22

376.1>266.0

199.3>110.9

霜脲氰3.54199.3>128.15021;12

199.3>128.1

188.9>101.7

霜霉威1.80188.9>101.72517;12

188.9>143.7

注：由于测试结果取决于所使用仪器，因此不可能给出液相色谱-质谱/质谱分析的通用参数。设定的参数应保证色

谱测定时被测组分与其它组分能够得到有效的分离，表1和附录B给出的参数证明是可行的。

4

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7.2.3.1最低检出限和检出浓度

在上述条件下，最低检出量为0.05ng～0.5ng，最低检出浓度为0.005mg/kg～0.05mg/kg。测试

方法与结果的准确度参照GB/T6379进行。

7.2.3.2标准曲线线性关系

在本方法所确定的LC-MS/MS检测条件下，分别对人参中11种农药在0.01µg/mL～1.0µg/mL浓度范

围内制备5个～7个不同浓度水平的标准溶液进行测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回

归分析。

丙环唑等11种农药线性方程和相关系数见附录A。

7.2.3.3定性测定

按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试料和标准工作溶液，试料的质量色谱峰保留时间与标准品中对

应的保留时间偏差在±2.5%之内；且试料中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相

应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定试料中存在对应的被测物。

表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度＞50%（总粒子流强度）＞10%至20%（定性）≤10%（定性）

允许的相对偏差±20%±30%±50%

7.2.3.4定量测定

根据试料中被测样液中目标物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行分析，对于高浓度试

料须适当进行系列稀释。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，外标法定量。

7.3平行试验

按以上步骤对同一试样进行平行试验。

7.4空白试验

称取空白试料，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8结果计算

按式（1）计算试料中每种农药残留含量：

Ai×cis×V

Xi=…………(1)

Ais×m/2

式中：Xi——试料中农药i残留量，单位为微克每克（μg/g）；

Ai——样液中农药i的峰面积（或峰高）；

Ais——标准工作液中农药i的峰面积（或峰高）；

cis——标准工作液中农药i的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

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m——试料的质量，单位为克（g）；

2——分取倍数。

注：计算结果保留小数点后2位有效数字，计算结果应扣除空白值。数值约修与极限数值的表示和判定依照GB/T8170

数值修约规则与极限数值的表示和判定进行。测试方法与结果的准确度参照GB/T6379进行。

9精密度

9.1重复性

对人参的根、茎、叶添加3个不同的浓度，回收率和变异系数见附录B。

9.2再现性

5家检测单位对人参的根、茎、叶添加3个不同的浓度，回收率和变异系数见附录C。

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AA

附录A

（资料性附录）

丙环唑等11种农药线性方程和相关系数

表A.1丙环唑等11种农药线性方程和相关系数

农药名称线性方程相关系数（r）

丙环唑y=2.04×106x+3.04×1040.9993

福美双y=1.72×105x+5.65×1020.9945

吡唑醚菌酯y=1.74×107x+6.84×1050.9973

腈菌唑y=3.27×106x+2.72×1040.9996

戊唑醇y=1.3×106x+7.87×1030.9999

咪鲜胺y=4.98×106x+7.21×1040.9993

异菌脲y=4.6×106x+2.13×1040.9998

霜脲氰y=1.51×107x+4.65×1030.9997

霜霉威y=3.91×106x+1.31×1040.9961

氟吗啉y=1.51×107x+4.65×1020.9986

多菌灵y=9.54×106x+3.11×1050.9985

7

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BB