GB/T 22966-2008 牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04OB

中华人民共和国国家标准

GB/T22966—2008

牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量

的测定液相色谱■串联质谱法

Determinationofsixteensulfonamideresiduesinmilkandmilkpowder—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

发布

GB/T22966—2008

刖

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人：吕红英、段文仲、陈瑞春、郭春海、艾连峰、贾海涛、窦彩云、马育松、庞国芳。

T

GB/T22966—2008

牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量

的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了牛奶和奶粉中16种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定。

本标准的方法检出限：牛奶中磺胺醋酰、磺胺甲基囉曉、磺胺卩比曉、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧囉喘、

磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁卩坐、磺胺邻二甲氧咳曉、磺胺-6-甲氧嚅礎、磺胺二甲囉喘、磺胺嗟噁咻、磺胺

咳曉、磺胺噬哩、磺胺甲囉二卩坐、甲氧节氨嚅咚和磺胺二甲异噁醴等16种磺胺类药物残留量的方法检出

限均为1.0Mg/kg；奶粉中磺胺醋酰、磺胺甲基囉曉、磺胺毗曉、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧咳曉、磺胺氯

哒嗪、磺胺甲基异噁卩坐、磺胺邻二甲氧吨喘、磺胺-6-甲氧咳睫、磺胺二甲咳曉、磺胺嗟噁咻、磺胺囉喘、磺

胺哩、磺胺甲廛二卩坐、甲氧节氨喘睫和磺胺二甲异噁醴等16种磺胺类药物残留量的方法检出限均为

4.0/ig/kg0

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分:总则与定义（GB/T6379.1-

2004,ISO5725-1：1994,IDT）

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT）

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD）

3原理

用高氯酸溶液提取试样中磺胺类药物残留，OasisHLB固相萃取柱“净化，甲醇洗脱，液相色谱-质

谱/质谱仪测定,外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1高氯酸。

4.2甲醇：色谱纯。

4.3乙酸：色谱纯。

4.4高氯酸溶液:p=2,l000mL水中加入1mL高氯酸，再用水调至p=20

4.50.1%乙酸溶液：100mL水中加入0.1mL乙酸（4.3）。

4.6甲醇-乙酸溶液（1+19）：量取50mL甲醇（4.2）与950mL乙酸溶液（4.5）混合。

4.7磺胺醋酰、磺胺甲基囉喘、磺胺毗喘、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧喘睫、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异卩恶

1）OasisHI.B固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

1

GB/T22966—2008

睦、磧胺邻二甲氧咳喘、磺胺-6-甲氧咳曉、磺胺二甲囉喘、磺胺座噁咻、磺胺囉曉、磺胺廛卩坐、磺胺甲噬二

睦、甲氧节氨囉睫和磺胺二甲异噁醴标准物质：纯度$95%。

4.80.1mg/mL16种磺胺类药物标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成

0.1mg/mL的标准储备溶液。该溶液在4"C保存。

4.91.ug/mL磺胺类药物混合标准中间溶液:分别吸取11111标准储备溶液(4.8)移至1001111.容量瓶

中，用甲醇(4.2)定容至刻度。该溶液在41保存。

4.10基质混合标准工作溶液:根据每种磺胺类药物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成

不同浓度(ng/niL)的基质混合标准工作溶液。基质混合标准工作溶液在4C保存。

4.11OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg,3mL。使用前在柱上塞上一小块脱脂棉，再分别用

3mL甲醇和5mL高氯酸溶液(4.4)活化;保持柱体湿润。

4.12滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01go

5.3超声波萃取仪。

5.4涡旋振荡器。

5.5固相萃取装置。

5.6氮气吹干仪。

5.7真空泵。

5.8p计:测量精度土0.02p单位。

5.9贮液器：通过转接头连接于OasisHLB固相萃取柱上。

5.1010mL具刻度离心管.

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。

6.2试样保存

牛奶置于4€冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。

7测定步骤

7.1提取

7.1.1牛奶

称取2g试样，精确到0.01g,置于50mL具塞塑料离心管中，加入25mL高氯酸溶液(4.4),涡旋

振荡器振荡提取1min,超声波萃取10min。

7.1.2奶粉

称取0.5g试样，精确到0.01g,置于50mL具塞塑料离心管中，加入25mL高氯酸溶液(4.4),于

涡旋振荡器振荡提取1min,超声波萃取10min。

7.2净化

将7.1的溶液全部转移到储液器中，再用5mL高氯酸溶液(4.4)洗离心管，洗液合并到贮液器，以

约1mL/min的流速全部过HLB固相萃取柱(4.11),待样液完全流出后，用5mL水淋洗柱，抽干，用

3mL甲醇洗脱于10mL具刻度离心管中，洗脱液于40C用氮气吹至约0.2mL吋停止浓缩，用甲醇-

乙酸溶液(4.6)补至1mLo旋涡混匀，过0.2“n滤膜，供液相色谱串联质谱分析。

2

GB/T22966—2008

7.3空白基质溶液的制备

取牛奶阴性样品2g,奶粉阴性样品0.5g,按7.1和7.2操作。

7.4测定条件

7.4.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：Go,5卩m,150mmX2.1mm（内径）或相当者；

b）色谱柱温度：30°C；

c）进样量：10卩L；

d）流动相梯度及流速见表1。

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间/min流速/（卩L/min）0.1%乙酸水溶液/%甲醇/%

0.002007525

5.002005545

8.002002080

10.002002080

10.102007525

13.002007525

7.4.2质谱参考条件

a）离子化模式:电喷雾正离子模式（ESI+）；

b）质谱扫描方式：多反应监测（MRM）；

c）鞘气压力：104kPa；

d）辅助气压力：138kPa；

e）正离子模式电喷雾电压（IS）：4000V；

f）毛细管温度：320°C；

g）源内诱导解离电压：10V；

h）QI,Q3分辨率：Q1为0.2,Q3为0.7；

i）碰撞气：高纯氮气；

j）碰撞气压力：0.2Pa；

k）其他质谱参数及16种磺胺类药物的CAS编号、保留吋间见表2。

表216种磺胺类药物的CAS编号、定性离子对、定量离子对和碰撞能量

保留时间/定性离子对定量离子对碰撞能量/

化合物中文名称化合物英文名称CAS编号

min（7»/z）eV

215.05/155.9110

磺胺醋酰sulfacetamide3.74144-80-9251.05/155.91

215.05/107.9822

291.14/229.9425

甲氧节氨喀呢trimethoprim4.6623256-42-0291.14/229.94

291.14/260.9021

251.05/155.9618

磺胺嗨喘sulfadiazine4.5668-35-9251.05/155.96

251.05/107.9725

256.02/155.9916

磺胺嗟醴sulfathiazole4.8472-14-0256.02/155.99

256.02/108.0522

3

GB/T22966—2008

表2(续)

保留时间/定性离子对定量离子对碰撞能量/

化合物中文名称化合物英文名称CAS编号

min(m/z)S/'z)eV

250.07/155.9816

磺胺毗喘sulfapyridine5.09144-83-2250.07/155.98

250.07/184.0119

265.06/155.9118

磺胺甲基喀咙sulfamerazine5.61127-79-7265.06/155.91

265.06/171.9414

281.06/155.9017

磺胺对甲氧喀呢sulfamethoxydiazine6.62651-06-9281.06/155.9()

281.06/107.9127

271.02/155.8612

磺胺甲嗟二醴sulfamethizole6.60144-82-1271.02/155.86

271.02/107.9621

279.08/185.9816

磺胺二甲喀咙sulfamethazine6.6757-68-1279.08/185.98

279.08/155.9918

281.07/155.9817

磺胺甲氧哒嗪sulfamethoxypyridazine7.2680-35-3281.07/155.98

281.07/107.9822

254.05/155.9916

磺胺甲基异噁醴sulfamethoxazole7.49127-69-5254.05/155.99

254.05/107.9124

281.06/155.9419

磺胺-6-甲氧嗨呢sulfamonomethoxine7.681220-83-3281.06/155.94

281.06/107.9028

268.06/155.9212

磺胺二甲异噁醴sulfisoxazole7.93127-69-5