GB/T 43584.1-2025 生物技术 大规模并行测序 第1部分：核酸与文库制备

ICS07080

CCSA.40

中华人民共和国国家标准

GB/T435841—2025/ISO20397-12022

.:

生物技术大规模并行测序

第1部分核酸与文库制备

:

Biotechnology—Massivelyparallelsequencing—

Part1Nucleicacidandlibrarrearation

:ypp

ISO20397-12022IDT

(:,)

2025-10-31发布2026-05-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T435841—2025/ISO20397-12022

.:

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

核酸样品质量评价

4………………………2

通则

4.1…………………2

样本定量

4.2……………2

样本纯度

4.3……………2

样本完整性

4.4…………………………2

核酸文库的制备

5…………………………3

通则

5.1…………………3

片段化

5.2………………3

通用序列的添加

5.3……………………4

大小选择

5.4……………5

扩增

5.5…………………5

纯化和清洗程序

5.6……………………5

文库定量

5.7……………6

文库定性

5.8……………6

验证

6………………………6

参考资料或对照

7…………………………7

通则

7.1…………………7

对照样品

7.2……………7

阳性对照

7.3……………7

阴性对照

7.4……………7

无模板对照

7.5…………………………7

内参对照

7.6……………7

参考资料

7.7……………8

污染

8………………………8

通则

8.1…………………8

初始样本评估

8.2………………………8

协议和操作程序

8.3……………………8

附录资料性文库构建前样品质量评估检查表

A()……………………9

附录资料性选定的平台和应用程序的质量标准示例

B()MPS……10

附录资料性参考资料清单

C()…………12

参考文献

……………………13

Ⅰ

GB/T435841—2025/ISO20397-12022

.:

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件是生物技术大规模并行测序的第部分已经发布了以下

GB/T43584《》1,GB/T43584

部分

:

第部分核酸与文库制备

———1:;

第部分测序数据的质量评估

———2:。

本文件等同采用生物技术大规模并行测序第部分核酸与文库制备

ISO20397-1:2022《1:》。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由全国生化检测标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC387)。

本文件起草单位中国测试技术研究院生物研究所苏州大学附属第一医院中国人民解放军总医

:、、

院第三医学中心中国计量科学研究院赛纳生物科技北京有限公司四川徕伯益自动化技术有限公

、、()、

司南京医科大学第一附属医院迈克生物股份有限公司深圳市海普洛斯生物科技有限公司南京大学

、、、、

医学院附属鼓楼医院深圳赛陆医疗科技有限公司深圳华大智造科技股份有限公司深圳市真迈生物

、、、

科技有限公司圣湘生物科技股份有限公司成都市第三人民医院迪飞医学科技南京有限公司上海

、、、()、

睿璟生物科技有限公司苏州百源基因技术有限公司瑞孚迪生物医学上海有限公司重庆浦洛通生

、、()、

命科技集团有限公司纳昂达南京生物科技有限公司广州金墁利医药科技有限公司中国计量测试

、()、、

学会四川省轻工业研究设计院有限公司四川振兴检测科技股份有限公司

、、。

本文件主要起草人周李华徐杰易艳王玉飞曾昭宇朱琼芳许明炎徐建刘二凯陈子天

:、、、、、、、、、、

沈瀚龙腾镶董莲华周万青杨丽梁冬颜钦陈芳刘佳郑晶车团结韩勋领姜展樾王永攀

、、、、、、、、、、、、、、

车妍张爱铃杨扬仲夫孟宪法李青松何强吴强陈廷龙姚曾胡春红李慧

、、、、、、、、、、。

Ⅲ

GB/T435841—2025/ISO20397-12022

.:

引言

大规模并行测序是一种利用大规模并行处理进行核酸测序的高通量分析方法该方法可在

(MPS),

相对较短时间内对不同生物体的全基因组转录组和特定靶核酸进行研究

、。

已用于许多生命科学领域能对数百万乃至数千万个核苷酸碱基进行测定和高通量分析生

MPS,。

物体内脱氧核糖核酸和核糖核酸聚合物的生物变异为准确测定序列带来了挑战通过测定序

。MPS,

列质量取决于许多因素包括但不限于样品质量文库制备平台选择及测序数据质量

,、、。

拟由以下部分构成

GB/T43584:

第部分核酸与文库制备目的在于规定测序和数据生成前文库制备和文库质量评估的一

———1:。

般准则和注意事项

。

第部分测序数据的质量评估目的在于基于第部分开展具体操作和数据质量控制并为

———2:。1,

第部分提供研究基础

3。

第部分宏基因组学的总体要求和指南目的在于在第部分和第部分的基础上规定宏

———3:。12,

基因组学从样品制备生成和分析测序数据的准则

、。

制备的核酸与文库的质量对于获得高质量的序列数据至关重要通过对的上游处理步

MPS。MPS

骤进行控制并系统评估核酸样本和文库的测序适用性能显著改善结果的质量优化下游分析

,,MPS、

流程从而确保基于数据所得结论的可靠性

,MPS。

Ⅳ

GB/T435841—2025/ISO20397-12022

.:

生物技术大规模并行测序

第1部分核酸与文库制备

:

1范围

本文件规定了核酸样品质量评估的一般要求和指导原则

。

本文件规定了测序和数据生成之前的文库制备和文库质量评估的一般指导方针

。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

生物技术核酸靶序列定量方法的性能评价要求法和法

GB/T42077—2022qPCRdPCR

(ISO20395:2019,IDT)

3术语和定义

界定的以及下列术语和定义适用于本文件

GB/T42077—2022。

31

.

接头adapter

一种已知序列的寡核苷酸经酶促加入例如连接酶或聚合酶链反应至片段的末端

,()DNA/cDNA。

32

.

条形码barcode

索引index

通常是个或更多核苷酸组成的短序列在单个测序通道芯片上并行测序时确保能准确区分不

6,、,

同来源样本的数据

。

注条形码通常位于测序接头内

:(3.1)。

33

.

编码barcoding

建立索引indexing

独特的序列识别

DNA。

一种能让多个样本进行测序的方法

。

注每个样本都由一个唯一的条形码标识这使得在并行分析过程中能识别出结果

:(3.2),。

34

.

GC含量GCcontentGC

;

一种或多个核酸序列中鸟嘌呤和胞嘧啶所占的百分比

(s)。

注多核苷酸中鸟嘌呤和胞嘧啶的含量通常以占总含氮碱基的比例或百分比来表示总含氮碱基是指来自一

:,()。

次或多次大规模并行测序运行读取的核苷酸碱基总数

(MPS)。

来源有修改

[:GB/T43584.2—2023,3.15,]

1

GB/T435841—2025/ISO20397-12022

.:

35

.

文库library

测序文库sequencinglibrary

为大规模并行测序而制备的具有特定大小范围的或通常含有序列特异性识

、DNA、cDNARNA,

别的接头和或引物便于后期序列捕获和或特异性提取物的识别

/,/。

注文库可能是或文库用于大多数测序仪上的测序有些仪器能直接对进行测序

:DNAcDNA,cDNARNA,RNA。

36

.

文库制备librarypreparation

测序文库制备sequencinglibrarypreparation

用于制备含有标签的或片段的程序以及用于的测序引物结合区域

DNARNA,MPS。

37

.

掺入对照spike-incontrol

掺入过程对照spike-inprocesscontrol

在大规模并行测序方案的各个步骤中样本中通常会加入特定序列和浓度的目标序列

,。

注过程对照能用来评估任何协议步骤但通常用于文库制备前的核酸对照

:,(3.6)。

38

.

质量值qualityscore

Q值Qscore

测定给定核苷酸碱基的测序质量

。

来源有修改

[:GB/T43584.2—2023,3.32,]

4核酸样品质量评价

41通则

.

实验室应建立实施和记录核酸定量的工作流程以确保结果的准确性和可重复性核酸样品数量

、,。