T/GDBK 007-2023 焙烤食品中丙烯醛的快速测定 酶标仪法（荧光探针法）

范围:本文件规定了焙烤食品中丙烯醛含量测定的荧光法快速测定的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告等。 本文件适用于焙烤食品中丙烯醛的测定，方法检出限为1.12 μg/kg，定量限为3.92 μg/kg; 主要技术内容:4原理N-乙酸甲酯-4-巯基-1，8-萘酰亚胺中的巯基对萘酰亚胺荧光母核具有PET效应，其本身荧光十分微弱；而当丙烯醛存在的情况下，N-乙酸甲酯-4-巯基-1，8-萘酰亚胺的巯基与丙烯醛通过迈克尔加成反应形成加合产物，使得PET效应被抑制，加合物在波长380 nm发射光激发下产生强荧光，峰值在510 nm波长处，其荧光强度在固定条件下与待测样品中丙烯醛浓度成正比，使用带荧光检测器的酶标仪检测，外标法定量。荧光探针法测定丙烯醛的原理见图1。图1  荧光探针法测定丙烯醛的原理图5试剂和材料5.1试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4-溴-1，8-萘二甲酸酐（分析纯）。甘氨酸（分析纯）。三乙胺（分析纯）。乙醇（分析纯）。盐酸（分析纯）。对甲苯磺酸（分析纯）。甲醇（分析纯）。九水合硫化钠（分析纯）。二甲基亚砜（DMSO，分析纯）。柠檬酸（分析纯）。磷酸氢二钠（分析纯）。丙烯醛（分析纯）。5.2荧光探针的制备将554 mg 4-溴-1，8-萘二甲酸酐和165 mg甘氨酸、252 mg三乙胺在80 ℃的乙醇回流磁力搅拌反应6 h，反应完成后冷却至室温，向反应液中加入2.5 mL 1M 盐酸溶液调节pH至白色沉淀析出，经抽滤得到的固体分别用10 mL水和乙醇进行洗涤，得到的白色固体即为N-乙酸基-4-溴-1，8-萘酰亚胺；室温下，将167 mg N-乙酸基-4-溴-1，8-萘酰亚胺和600 mg九水合硫化钠溶解于5 mL N，N-二甲基甲酰胺中搅拌反应24 h，反应结束后将反应液倒入20 mL水中，并用1M 盐酸水溶液调节pH至2，有黄色沉淀析出。经抽滤得到的固体用水洗涤五遍后，得到的黄色固体即为N-乙酸基-4-巯基-1，8-萘酰亚胺（Pr-ACR），冷冻干燥，置于-20 ℃冰箱中备用。5.3试剂配制柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液 pH为2.2，1 mmol/L，15.198 g一水合柠檬酸和1.955 g十二水合磷酸氢二钠溶解于水中，再用250 mL容量瓶定容。探针母液：2.15