DB42/T 1590-2020 H7亚型禽流感病毒胶体金试纸条抗原检测方法

ICS65.020.30

CCSB4142

湖北省地方标准

DB42/T1590—2020

H7亚型禽流感病毒胶体金试纸条抗原检测

方法

ColloidalgoldstripstestfordetectingofH7subtypeavianinfluenzavirus

2020-07-07发布2020-11-07实施

湖北省市场监督管理局  发布

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2020

目次

前言II

引言III

1范围1

2规范性引用文件1

3术语和定义1

4检测原理1

5检测条件2

6检测方法2

7结果判定2

附录A（规范性）试剂配制4

附录B（资料性）H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备5

附录C（资料性）胶体金试纸条的制备8

附录D（资料性）样品处理注意事项9

I

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由华中农业大学提出。

本文件由湖北省农业农村厅归口。

本文件起草单位：华中农业大学、武汉科前生物股份有限公司。

本文件主要起草人：金梅林、范俊青、李冉、董俊、王园园、但汉并、邹忠、董晓辉、徐高原。

本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：

hbsnab@126.com；华中农业大学，联系电话：027-87282038，邮箱：xys@。对本文件

的有关修改意见建议请反馈至华中农业大学，电话：027-87286905，邮箱：jml8328@126.com。

II

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引言

禽流感（avianinfluenza,AI）是由甲型流感病毒感染引起的禽类急性传染病。按照致病力的强

弱可分为无致病性禽流感、低致病性禽流感、中致病性禽流感和高致病性禽流感。禽流感病毒H7亚型属

于高致病性禽流感，OIE将高致病性禽流感列为必须上报的传染病，我国将其列为是优先防治和重点防

范的人兽共患病。

目前，检测H7亚型禽流感病毒的方法主要是荧光定量PCR方法，该方法的优点是敏感性高，缺点是

对操作人员的专业素养要求高，试验条件苛刻，仪器使用昂贵。H7亚型禽流感病毒的胶体金检测方法，

是一种现场快速检测H7亚型禽流感病毒的方法，该方法有利于该病的早发现、早报告、早处置，为防控

节省时间；同时给临床检测提供一种简单，便捷的检测工具，使高通量检测成为可能，从而切实为实际

生产提供便利。

III

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H7亚型禽流感病毒胶体金试纸条抗原检测方法

1范围

本文件规定了H7亚型禽流感病毒胶体金试纸条抗原检测的术语和定义、检测原理、检测条件、检测

方法、结果判定。

本文件适用于H7亚型禽流感病毒的检测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4检测原理

本文件采用双抗夹心检测抗原的方法制备胶体金试纸条，属于一步式固相膜反应。首先制备两株具

有夹心效果的H7亚型禽流感病毒单克隆抗体，一株单抗包被在硝酸纤维素膜上，另一株单抗进行胶体金

标记，固定在金垫上。在加样孔处（A）加入待检样品时，待检样

品中的抗原先与胶体金标记的单抗进行反应，形成肉眼可见的红色金标抗体-抗原结合物。然后，

经毛细管作用，该红色结合物继续层析向前移动，与硝酸纤维素膜上的单抗结合，在观察窗口的检测线

（T）处，红色结合物中的抗原被此处预先包被在纤维素膜上的抗体捕获并截留下来，随着红色结合物

截留量增多，逐渐形成一条红线，因此根据红色T线的出现即可判定样品为阳性。如果样品中没有抗原，

则不形成红色金标抗体-抗原结合物，流过T线时，不发生捕获截留，T线保持白色，判定样品为阴性。

（检测时质控线（C）处出现红线检测结果有效）

胶体金试纸条结构如图1所示：

AS

TC

注：A：加样孔；S：检测区；T：检测线；C：质控线

图1胶体金试纸条结构示意图

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5检测条件

5.1仪器与耗材

Ⅱ级生物安全柜或者超净工作台、冷冻离心机（转速12,000r/min）、电子天平（0.01g-300g）、

玻璃匀浆器（5mL）、微量可调移液器（200µL、1mL）、枪头（200µL、1mL）、离心管（1.5mL、2mL、

5mL）。

5.2试剂

H7亚型禽流感病毒单克隆抗体、样本处理液、生理盐水

试剂配制方法见附录A。

H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备、纯化及鉴定见附录B。

6检测方法

6.1