WS/T 683-2020 消毒试验用微生物要求

ICS11.080

C50

WS

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T683—2020

消毒试验用微生物要求

Requirementsofmicroorganismfordisinfectiontest

2020-07-20发布2021-02-01实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

WS/T683—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准起草单位：中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、江苏省疾病预防控制中心、

中国人民解放军疾病预防控制中心、北京市疾病预防控制中心、山东省疾病预防控制中心、黑龙江省疾

病预防控制中心、广州海关技术中心。

本标准主要起草人：沈瑾、段弘扬、王林、张流波、徐燕、魏秋华、王佳奇、佟颖、崔树玉、李涛、

李炎、林玲、吴晓松、于礼、孙惠惠、廖如燕、杨彬、韩杰、李俐、朱亭亭。

I

WS/T683—2020

消毒试验用微生物要求

1范围

本标准规定了消毒试验微生物、培养基、传代与保存、菌悬液和染菌载体制备的要求。

本标准所指消毒试验用微生物仅包括细菌、真菌、分枝杆菌和细菌芽胞，不涉及消毒试验用病毒及

其他微生物的替代物（如酶、抗原、核酸等）。

本标准适用于各种消毒试验用微生物（除病毒和替代物外）的使用和保存。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB18281.5医疗保健产品灭菌生物指示物第5部分：低温蒸汽甲醛灭菌用生物指示物

GB/T33417过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法

GB/T33419环氧乙烷灭菌生物指示物检验方法

GB/T33420压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法

消毒技术规范（2002年版）卫生部（卫法监发〔2002〕282号）

3试验微生物

3.1来源

试验微生物来源于具有资质的菌种保藏机构，并能通过常规检测方法进行鉴定。

3.2细菌

3.2.1金黄色葡萄球菌

消毒试验以金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表，试验

常用菌种为ATCC6538；消毒剂对皮肤消毒模拟现场试验时，用ATCC27217。

3.2.2大肠杆菌

消毒试验以大肠杆菌(Escherichiacoli)作为细菌繁殖体中肠道菌的代表，试验常用菌种为8099；

消毒剂对手消毒模拟现场试验时，用8099或NCTC10538。

3.2.3铜绿假单胞菌

消毒试验以铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)作为医院感染中最常分离的细菌繁殖体的代

表，试验菌种为ATCC15442。

3.2.4白色葡萄球菌

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WS/T683—2020

消毒试验以白色葡萄球菌(Staphylococcusalbus)作为空气中细菌的代表，试验菌种为8032。

3.3真菌

3.3.1白色念珠菌

消毒试验以白色念珠菌(Candidaalbicans)作为致病性真菌的代表，试验常用菌种为ATCC10231。

3.3.2黑曲霉菌

消毒试验以黑曲霉菌(Aspergillusniger)作为致病性真菌的代表，试验常用菌种为ATCC16404。

3.4分枝杆菌

消毒试验以龟分枝杆菌脓肿亚种(Mycobacteriumchelonaesubsp.abscessus)、鸟分枝杆菌

（Mycobacteriumaviumsubsp.avium）或地分枝杆菌（Mycobacteriumterrae）作为人结核分枝杆菌

的代表，试验用菌种为龟分枝杆菌脓肿亚种CMCC（B）93326或ATCC19977，鸟分枝杆菌ATCC15769，地

分枝杆菌ATCC15755。

3.5细菌芽胞

3.5.1枯草杆菌黑色变种芽胞

消毒试验以枯草杆菌黑色变种芽胞（Bacillussubtilisvar.niger）作为细菌芽胞的代表，试验

常用菌种为ATCC9372；用于指示干热灭菌效果时，符合《消毒技术规范》（2002年版）的要求；用于

指示环氧乙烷灭菌效果时，符合GB/T33419的要求。

3.5.2嗜热脂肪杆菌芽胞

嗜热脂肪杆菌芽胞（Geobacillusstearothermophilus）是灭菌效果指示菌，菌种为ATCC7953或

SSIK31；用于指示压力蒸汽灭菌效果时，符合GB/T33420的要求；用于指示过氧化氢气体灭菌效果时，

符合GB/T33417的要求；用于指示低温蒸汽甲醛灭菌效果时，符合GB18281.5的要求。

3.5.3短小杆菌芽胞

短小杆菌芽胞（Bacilluspumilus）是电离辐射灭菌或消毒的指示菌，菌种为E601或ATCC27142，

符合《消毒技术规范》（2002年版）的要求。

3.6其他

可根据消毒试验要求，选择抗力相当的其他菌种进行试验。

4培养基

4.1选择相应培养基和试剂进行菌种的传代和培养，消毒试验所需培养基和试剂见附录A。

4.2实验室自行制备的固体斜面培养基和平板冷藏保存，保存期不超过3个月，如出现缺水、干裂等

情况，灭菌处理后销毁。实验室自行制备的液体培养基密封冷藏保存，保存期不超过3个月，如出现浑

浊，灭菌处理后销毁。

4.3商品化平板、斜面和培养基按产品说明书储存并在有效期内使用。

5传代与保存

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WS/T683—2020

5.1复苏与传代

5.1.1以无菌操作方式开启冻干菌种管，加入适量培养液（按菌种选择培养液，如细菌选择营养肉汤、

白色念珠菌选择沙堡液体培养基、分枝杆菌选择苏通综合液体培养基、黑曲霉菌选择麦芽浸膏营养肉汤

培养基），吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mL～10.0mL相应培养液的试管，滴入少许菌种悬

液，在适宜温度下培养至规定时间（一般为36℃±1℃培养18h～24h、黑曲霉菌为30℃±1℃培

养42h～48h），此为第1代培养物。

5.1.2用接种环取第1代培养物，或从菌种冻存管中取适量菌液/瓷珠，划线接种于相应培养基平板（按

菌种选择培养基，如细菌选择营养琼脂培养基、白色念珠菌选择沙堡琼脂培养基、分枝杆菌选择改良罗

氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基、黑曲霉菌选择麦芽浸膏琼脂培养基），在适宜温

度下培养至规定时间（一般为36℃±1℃培养18h～24h、分枝杆菌36℃±1℃培养72h、黑曲霉

菌30℃±1℃培养42h～48h），此为第2代培养物。

5.1.3挑取第2代培养物中典型菌落，接种于相应培养基斜面或平板（按菌种选择培养基斜面，如细

菌选择营养琼脂斜面、白色念珠菌选择沙堡琼脂斜面、分枝杆菌选择改良罗氏培养基或其他商品化分枝

杆菌专用复合琼脂斜面、黑曲霉菌选择麦芽浸膏琼脂培养基平板），在适宜温度下培养至规定时间（一

般为36℃±1℃培养18h～24h、分枝杆菌36℃±1℃培养72h、黑曲霉菌30℃±1℃培养42h～

48h），此为第3代培养物。

5.1.4取第3代培养物，接种于相应培养基斜面，在适宜温度下培养至规定时间，此为第4代培养物。

5.1.5按上述方法培养至所需代数，传代时在试管上注明菌种名称、菌种号、代数及传代日期等基本

信息。

5.2保存

5.2.1菌种斜面的保存

5.2.1.1传代用菌种采用斜面冷藏保存。

5.2.1.2将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，在适宜温度下培养至规定时间，生长充分后，转移

至冰箱冷藏保存，以备实验传代用。此法用于实验用菌种的短期保存，随时检查其污染杂菌和变异等情

况，发现异常，灭菌处理后销毁。

5.2.1.3保存时间与菌种类型有关，一般存储时间不超过9周，铜绿假单胞菌和分枝杆菌不超过6周，

如保存期内，斜面出现缺水、干裂等情况，灭菌处理后销毁。

5.2.2菌