LY/T 2107-2013 化学信息诱引松材线虫快速取样技术规程

ICS65.020

B16

中华人民共和国林业行业标准

/—

LYT21072013

化学信息诱引松材线虫

快速取样技术规程

ㅤㅤㅤㅤ

Technicalrulesforattractantsamlinof

pg

()

BursahelenchusxlohilusSteinerandBuhrerNickle

pyp

2013-03-15发布2013-07-01实施

国家林业局发布

/—

LYT21072013

引言

,,

本文件的发布机构提请注意声明符合本文件时可能涉及和中的松材线虫耐久型三龄幼

5.15.2

虫与繁殖型幼虫和成虫诱引剂配制相关专利的使用。

、。

本文件的发布机构对于该专利的真实性有效性和范围无任何立场

,,

该专利持有人已向本文件的发布机构保证他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下

。。

就专利授权许可进行谈判该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案相关信息可以通过以下

联系方式获得:

:

专利持有人姓名孙江华

:,()

地址北京市朝阳区北辰西路号院中国科学院动物研究所

1100101

,。

请注意除上述专利外本文件的某些内容仍可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专

利的责任。

ㅤㅤㅤㅤ

Ⅱ

/—

LYT21072013

化学信息诱引松材线虫

快速取样技术规程

1范围

、。

本标准规定了松材线虫化学信息诱引取样的运用条件以及取样保存和镜检的方法

本标准适用于利用化学信息诱引的方法对松材线虫取样和鉴定。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/—松材线虫病检疫技术规程

GBT234762009

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1ㅤㅤㅤㅤ

松材线虫()

BursahelenchusxlohilusSteinerandBuhrerNickle

pyp

,()()()

一种无脊椎动物属线虫门Nemata侧尾腺口纲Secernentea滑刃目Ahelenchida滑刃总科

p

()滑刃科()伞滑刃亚科()伞滑刃属(

AhelenchoidoideaAhelenchoididaeBursahelenchinaeBursahe

pppp-

)。(),。

lenchus松材线虫主要寄生在松属Pinus植物体内并可导致其迅速死亡

[/—,]

定义和

GBT2347720093.13.2

3.2

化学信息诱引attractantsamlin

pg

,

利用生物种类间或者种内个体间进行化学通讯所利用的化学信息物质对目标生物进行诱引从而

获得目标生物的样本个体。

3.3

取样samlin

pg

从大量的生物种类和个体中获得少量目标生物个体作为样本。

4使用条件

4.1取样对象

、。

可能感染松材线虫的松属植物松木及其制品

4.2可诱引的松材线虫虫态

松材线虫耐久型三龄幼虫与繁殖型幼虫和成虫。

1

/—

LYT21072013

4.3适用范围和环境条件

4.3.1适用范围

。,

适用于松材线虫适生区内寄主植物的取样取样方法与发生区域和寄主无关与寄主植物表现出

()。

的症状和松材线虫所处的生活周期繁殖周期和扩散周期密切相关

4.3.2适用环境条件

。,。

无环境条件限制气温10℃以上空气相对湿度40%以上时使用效果最佳

5诱引剂的配制

5.1松材线虫耐久型三龄幼虫诱引剂的配制

()、()(),

将蒎烯纯度蒎烯纯度和长叶烯纯度>80%按照质量比1∶2.7∶1.1配

α->80%->80%

β

,()溶解成浓度为/的引诱剂备用。

制后用40L正己烷纯度>90%7m40L

μgμ

5.2松材线虫繁殖型幼虫和成虫诱引剂的配制

()、()(),

将蒎烯纯度蒎烯纯度和长叶烯纯度>80%按照质量比1∶0.1∶0.01

α->80%->80%

β

,()溶解成浓度为/的引诱剂备用。

配制后用40L正己烷纯度>90%130m40L

μgμ

6取样管的制备

ㅤㅤㅤㅤ

使用离心,,。

2mL管内装引诱剂载体后用0.8%琼脂凝固在引诱剂载体上方周围离心管用盖封

。,,。

口并储藏在-20℃待用使用时用移液枪将40L引诱剂转移到引诱剂载体内制成取样管待溶

μ

。。

剂挥发后进行取样取样管制备示意图参见附录中图

AA.1

7林间松树取样方法

7.1松材线虫耐久型三龄幼虫取样方法

7.1.1取样时间

(,,

每年月到翌年的月月这一期间林间松木中松材线虫一般为耐久型三龄幼虫并聚集在

113~6

)。。

松褐天牛蛹室周围不同地区耐久型三龄幼虫的取样时间参见附录B

7.1.2样树选择

样树应选择松林中无流脂或流脂很少的枯死的优势木。

7.1.3取样方法

,(),

选取在松褐天牛扁椭圆形的蛀入孔处用电钻选取1cm直径的钻头垂直向树髄芯钻入并使之

(),

与天然蛹室相通天然蛹室在蛀入孔垂直髓芯方向约2cm处及其向上5cm~7cm范围形成深

,。

2cm直径1cm的取样孔钻孔时在钻头附近喷洒水以降钻头操作时引起的高温并增加取样孔内的

。,。。

湿度将取样管插入取样孔放置2h~4h后拔出取样量随着取样时间延长而加大取样孔的钻取

和取样管放置示意图参见图A.2。

2

/—

LYT21072013

7.2松材线虫繁殖型幼虫和成虫取样方法

7.2.1取样时间

(,),

每年月月这一期间林间松木中存在松材线虫繁殖型幼虫和成虫不同地区繁殖型幼虫

5~10

和成虫取样时间参见附录B。

7.2.2取样方法

7.2.2.1取样孔的钻取和取样管的放置

,(),,

取样孔选择在松树南面用电钻选取1cm直径的钻头垂直打孔形成深2cm~3cm直径1cm

。、。

的取样孔钻孔方法取样管放置和取样管放置时间参照7.1.3

7.2.2.2取样高度选择

,:

可根据实际情况任意选择以下一种或几种症状表现的松树分别选取不同的部位进行取样

,,,、,

———植株叶失绿60%无刻槽枝条有天牛取食痕迹无小蠹白蚁危害取样部位选择树干第一侧

。;

枝靠近树干处该发病阶段获得的松材线虫量较多

———,,,、,;

植株叶失绿99%针叶红褐色无刻槽无小蠹白蚁危害取样部位为树干约2m高处

———,,,、,

植株针叶红褐色天牛刻槽多有天牛蛀屑有小蠹白蚁等次生害虫危害时取样部位为树干

(),。

1m~1.3m胸高处该发病阶段获得的松材线虫量较少

8松木及其制品取样方法

ㅤㅤㅤㅤ

()

8.1松木含木段取样方法

,;

若木材有松褐天牛蛀孔则选取个个点按照所描述的方法进行取样若木材无松褐天

3~57.1.3

,。

牛蛀孔则在木材年轮间隔较宽的一面随机选取个个点进行打孔取样取样孔的钻取和取样管

3~5

的放置参照7.2.2.1。

、

8.2电缆盘光缆盘和松木包装箱等松木制品取样方法

,;

若松木制品上有蓝变部位或者天牛蛀道痕迹则在附近随机取个个点用电钻钻孔取样若无

2~3

,。

蓝变现象或无松褐天牛蛀道痕迹则随机取个个点进行打孔取样取样孔的钻取和取样管的放

2~3

置参照7.2.2.1。

9保存

,,,,

将取得样品的取样管装入或离心管中加入少许水盖封好并标记相关取样信息以

5mL10mL

。,,,

备室内镜检如需保存可将装有取样管的离心管放入4℃冰箱保存保存时间为3d若送到有关部门

镜检时可附冰袋进行保存。

10镜检

,,。

用水将取样管中琼脂冲出倒入培养皿中放置片刻后加以镜检和鉴定松材线虫的镜检和鉴定按

/—。

照中第章执行松材线虫耐久型三龄幼虫与繁殖型幼虫和成虫的鉴定特征参见

GBT2347620097

附录C。

3

/—

LYT21072013

附录

A

()

资料性附录

取样管制备及取样孔的钻取和取样管的放置示意图

()

A.1取样管制备示意图图A.1

说明:

ㅤㅤㅤㅤ

———移液枪;———诱引剂;

14

———离心管;———诱引剂载体。

22mL5

———的凝固琼脂;

30.8%

图A.1取样管制备示意图

()

A.2取样孔的钻取和取样管的放置示意图图A.2

)取样孔的钻取)取样管的放置

ab

图A.2取样孔的钻取和取样管的放置示意图

4

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LYT21072013

附录

B

()

资料性附录

松材线虫耐久型三龄幼虫与繁殖型幼虫和成虫取样参考时间

B.1松材线虫耐久型三龄幼虫取样参考时间

,。

每年秋冬季松褐天牛幼虫进入越冬虫态开始到来年越冬代松褐天牛成虫羽化盛期之前同一地

区随每年的气候条件变化略有变化。

B.2松材线虫繁殖型幼虫和成虫取样参考时间

,。

每年春季越冬代松褐天牛羽化盛期开始到本年秋冬季松褐天牛越冬代幼虫停止发育同一地区

。。

随每年的气候条件变化略有变化各地取样时可参考表B.1进行

表B.1松材线虫耐久型三龄幼虫与繁殖型幼虫和成虫取样参考时间

松褐天牛耐久型三龄幼虫繁殖型幼虫和成虫

可参考的区域

生活史取样参考时间取样参考时间

、、、、、

山西河北辽宁山东河南陕西和甘

每年月翌年月每年月月

11~67~10

ㅤㅤㅤㅤ肃的北部地区

年代的地区

11

、、、、、、

江苏浙江安徽江西上海湖北湖

、、、、

每年月翌年月每年月月南贵州四川西藏福建的中北部地

11~56~10

、、

区河南陕西和甘肃的中南部地区

、、、、

广东广西海南云南福建的南部

年代以上的地区每年月翌年月每年月月

1111~45~10

地区

:,,。

注松褐天牛生活史因受局部气候影响在同一区域发生代数不同的可参考年均温相似的区域进行取样

5

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LYT21072013

附录

C

()

资料性附录

松材线虫耐久型三龄幼虫与繁殖型幼虫和成虫的形态特征

C.1松材线虫耐久型三龄幼虫的形态特征

,,,,、。

角质膜增厚体腔内含物浓稠肠内积聚类脂小滴使整个虫体呈深色尾端钝圆较宽

C.2松材线虫繁殖型成虫和幼虫的形态特征

C.2.1成虫形态特征

,,。,。,

虫体纤细表面光滑有环纹唇区高头部和身体界限明显头部为放射状片唇两个侧唇上各

6

。,,,/,,

有一个侧器口针细其基部有小的膨大中食道球椭圆形占体宽的23以上瓣门清楚背食道腺的

,。

长度约相当于体宽的倍倍背食道腺开口于中食道球排泄孔的位置约在食道和肠交界的水平

3~4

,。,/。。

处有时靠近神经环半月体明显在中食道球后23体宽处神经环恰位于中食道球下方

,。,/。,

雌虫卵巢前伸卵母细胞通常单行排列后阴子宫囊长延伸到阴肛距34处上阴唇长向下覆

,()。,,,。

盖形成阴门垂体或阴门盖尾近圆柱形尾端钝圆或有短的尾尖突不超过2m

μ

雄虫死后尾向腹面。,。。,,,

弯曲尾尖侧面观似爪状精巢前伸交合刺大呈很独特的弓形成对不联

,,。。

合基部有一大而尖的喙交合刺末端有一几丁质凸出物尾端有一卵圆形的交合伞尾部有个生殖

7

ㅤㅤㅤㅤ

,,,。

乳突肛前对肛前中央个肛后在交合伞起点前有对

112

C.2.2繁殖型幼虫形态特征

,,,,

虫体色淡而透明肠内中空而透明其中2龄幼虫体长约187.2m~358.8m3龄幼虫体长约

μμ

,龄幼虫体长约。

343.2m~475.8m4413.4m~634.4m

μμμμ

C.3松材线虫耐久型三龄幼虫形态图

松材线虫耐久型三龄幼虫形态见图C.1。

图C.1松材线虫耐久型三龄幼虫形态图(100×)

6

/—

LYT21072013

C.4松材线虫成虫形态图

松材线虫成虫形态见图C.2。

说明:

———雌虫();

a10×

———雌虫头部();

b40×

———雌虫尾部();

c40×

———雄虫尾部()。

d40×

ㅤㅤㅤㅤ

图C.2松材线虫成虫形态图