GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测方法

GB/T19438.3-2004

月U舀

GB/T19438-2004《禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》分为以下四个部分:

—GB/T19438.1-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法)));

—GB/T19438.2-2004((H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》;

—GB/T19438.3-2004((H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法));

-GB/T19438.4-2004((H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》。

本部分的附录A为资料性附录

本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。

本部分起草单位:中华人民共和国北京出人境检验检疫局、深圳市匹基生物工程股份有限公司。

本部分主要起草人:高志强、张鹤晓、郭晋优、刘继红、吴丹。

GB/T19438.3-2004

H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR

检测方法

1范围

本部分规定了荧光RT-PCR检测H7亚型禽流感病毒的操作方法

本部分适用于活禽及其产品中H7亚型禽流感病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法

3缩略语

下列缩略语适用于本部分。

荧光RT-PCR

荧光反转录一聚合酶链式反应。

23

Ct值

每个反应管内的荧光信号达到设定的阐值时所经历的循环数

33

RNA

核糖核酸。

3.4

Taq酶

TaqDNA聚合酶。

3.5

PBS

磷酸盐缓冲盐水。

3.6

DEPC

焦碳酸乙二醋。

4原理

采用TagMan方法，通过比对禽流感病毒血凝素基因，设计一对仅在H7亚型禽流感病毒血凝素基

因间保守的特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针探针的结合部位位于目的扩增片段内部。其

中5端‘标记FAM荧光素为报告荧光基团(R>,3’端标记的TAMRA荧光素(Q)在近距离内能吸收5’端

荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光基团。反应在退火时，引物和探针同时与目的基因片段结合

t

GB/T19438.3-2004

探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收，仪器检测不到荧光信号;而反应进行到延伸阶段时，

丁“，酶发挥5'-3’的外切核酸酶功能，将探针降解。这样探针上的R基团游离出来，所发出的荧光不再

为Q所吸收而被检测仪所接收随着PCR反应的循环进行，PCR产物与荧光信号的增长呈现对应

关系。

5试剂和材料

5.1试荆

除特别说明外，本标准所用试剂均为分析纯，所用液体试剂均须使用无RNA酶的容器(用DEPC

水处理后高压灭菌)进行分装。

5.1.1H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测试剂盒，，:试