GB/T 18936-2025 禽流感诊断技术

ICS11.220

CCSB41

中华人民共和国国家标准

GB/T18936—2025

代替GB/T18936—2020，GB/T19438.1~19438.4—2004，GB/T19439—2004，GB/T19440—2004

禽流感诊断技术

Diagnostictechniquesforavianinfluenza

2025⁃01⁃24发布2025⁃08⁃01实施

国家市场监督管理总局

国家标准化管理委员会发布

GB/T18936—2025

目次

前言··························································································································Ⅲ

引言··························································································································Ⅳ

1范围·······················································································································1

2规范性引用文件········································································································1

3术语和定义··············································································································1

4缩略语···················································································································1

5生物安全措施···········································································································2

6临床诊断·················································································································2

7样品采集、保存与运输································································································3

8实验室诊断··············································································································4

9综合判定·················································································································7

附录A（规范性）样品稀释液的配制·················································································9

附录B（规范性）IVPI测定试验·····················································································10

附录C（资料性）RT⁃PCR引物序列及反应体系配制···························································12

附录D（资料性）实时荧光RT⁃PCR引物探针序列及反应体系配制········································14

附录E（资料性）HA和HI试验所用溶液和1%红细胞的配制··············································16

附录F（资料性）HI试验中4HAU抗原配制示例······························································17

附录G（资料性）血清非特异性凝集和非特异性抑制因子的处理方法······································18

参考文献····················································································································19

Ⅰ

GB/T18936—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件代替GB/T18936—2020《高致病性禽流感诊断技术》，整合了GB/T19438.1—2004《禽流

感病毒通用荧光RT⁃PCR检测方法》、GB/T19438.2—2004《H5亚型禽流感病毒荧光RT⁃PCR检测

方法》、GB/T19438.3—2004《H7亚型禽流感病毒荧光RT⁃PCR检测方法》、GB/T19438.4—2004《H9

亚型禽流感病毒荧光RT⁃PCR检测方法》、GB/T19439—2004《H5亚型禽流感病毒NASBA检测方

法》、GB/T19440—2004《禽流感病毒NASBA检测方法》的内容。与GB/T18936—2020相比，除结

构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

a）更改了标准适用范围，将高致病禽流感诊断技术扩展为禽流感技术（见第1章，2020年版的

第1章）；

b）删除了术语和定义的具体内容（见2020年版的第3章）；

c）增加了缩略语（见第4章）；

d）增加了生物安全措施（见第5章）；

e）更改了临床诊断的部分内容（见第6章，2020年版的第4章）；

f）增加了样品保存和运输的技术要求，增加了羽绒、羽毛、牛皮样品采集的技术要求（见

第7章）；

g）增加了羽绒、羽毛、牛皮样品处理的技术要求（见8.1.3）；

h）更改了“综合判定”的内容（见第9章，2020年版的第10章）；

i）更改了样品稀释液的配制（见附录A，2020年版的附录A）；

j）将IVPI测定试验由资料性附录调整为规范性附录（见附录B，2020年版的附录B）。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中华人民共和国农业农村部提出。

本文件由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。

本文件起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国海关科学技术研究中心、中国动物卫生

与流行病学中心、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心。

本文件主要起草人：王秀荣、田国彬、刘环、刘华雷、李健、高志强、蒋文明、史喜菊、邓国华、施建忠、

曾显营、李雁冰、武嘉男、谷强、孙晓东、陈化兰。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：

——2003年首次发布为GB/T18936—2003，2020年第一次修订；

——本次为第二次修订，并入GB/T19438.1~19438.4—2004、GB/T19439—2004、GB/T19440—

2004的相关技术内容。

Ⅲ

GB/T18936—2025

引言

禽流感（Avianinfluenza，AI）是由禽流感病毒（Avianinfluenzavirus，AIV）引起的一种以禽类为主

的感染和/或疫病综合征。

AIV属于正黏病毒科A型流感病毒属，国际病毒分类委员会（ICTV）2019年修订为α流感病毒

属。A型流感病毒是唯一已知感染禽类的正黏病毒，从禽类分离到16个HA亚型（H1~H16）和9个

NA亚型（N1~N9）；另有从蝙蝠中新确认的亚型（H17和H18）。AIV根据病毒致病性不同，分为高致

病性禽流感病毒（Highlypathogenicavianinfluenzavirus，HPAIV）和低致病性禽流感病毒（Lowpatho⁃

genicavianinfluenzavirus，LPAIV）。至今，导致鸡、火鸡和其他经济禽类发生急性临床症状的HPAIV

都是H5或H7亚型，并不是所有的H5或H7亚型都是高致病性的，有的H5和H7亚型流感病毒致病

性不高，但这类病毒具有通过变异成为高致病性病毒的风险。世界动物卫生组织（WOAH）将HPAI

以及LPAIV在家禽中毒力突然增加或可自然传播给人类并造成严重后果的低致病性禽流感（Low

pathogenicavianinfluenza，LPAI），列为须通报的动物疫病。

AIV宿主广泛，鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多种禽类易感，多种野鸟也可能感

染发病甚至死亡；猪、奶牛、犬、猫、水貂、赤狐、狼、海狮、海豹等哺乳动物偶有感染。家禽和野禽是AIV

的主要宿主，受疫情影响大、与民生和贸易关系密切的是家禽，因此本文件中描述的临床症状和剖检变

化以家禽为主。AIV是单股、负链、分节段的RNA病毒，基因容易发生变异，突变成新的流感病毒变

异株，因此，针对RT⁃PCR试验方法和实时荧光RT⁃PCR试验方法，在附录中仅给出了部分常见的

HA和NA亚型引物，若进行新变异株或者其他亚型（如H3）鉴定，需设计出相应引物进行检测。

本文件的修订参考了WOAH《陆生动物诊断试验和疫苗手册》，并结合了我国相关技术研究新

成果。

Ⅳ

GB/T18936—2025

禽流感诊断技术

1范围

本文件描述了禽流感病毒（AIV）感染的临床诊断、样品采集、保存与运输，以及病毒分离与鉴定、

血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验、RT⁃PCR方法和实时荧光RT⁃PCR方法等实验室诊断方法，规定了

生物安全措施的相关要求。

本文件适用于AIV的诊断和产品中AIV检测，包括但不限于禽肉、羽绒、羽毛、牛肉、牛乳、牛皮。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于

本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AI：禽流感（AvianInfluenza）

AIV：禽流感病毒（AvianInfluenzaVirus）

Ct：循环阈值（CycleThreshold）

DEPC：焦碳酸二乙酯（DiethylPyrocarbonate）

HA：血凝（Haemagglutination）

HI：血凝抑制（HaemagglutinationInhibition）

HPAI：高致病性禽流感（HighlyPathogenicAvianInfluenza）

HPAIV：高致病性禽流感病毒（HighlyPathogenicAvianInfluenzaVirus）

IVPI：静脉内接种致病指数（IntravenousPathogenicityIndex）

LPAI：低致病性禽流感（LowPathogenicAvianInfluenza）

LPAIV：低致病性禽流感病毒（LowPathogenicAvianInfluenzaVirus）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSaline）

PCR：聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）

RNA：核糖核酸（RiboNucleicAcid）

RT⁃PCR：反转录⁃聚合酶链反应（ReverseTranscription⁃PolymeraseChainReaction）

SPF：无特定病原体（SpecificPathogenFree）

1

GB/T18936—2025

5生物安全措施

进行AI诊断和检测时，如动物剖检、样品采集与处理、核酸提取、病毒分离和致病性试验等，按照

GB19489的规定执行。

6临床诊断

6.1流行病学

6.1.1易感动物主要包括鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、鹧鸪、鸵鸟、孔雀、野鸟等，猪、奶牛、猫、海狮、海

豹、鲸、貂、虎、狐狸、羊等哺乳动物也可偶发感染。

6.1.2传染源主要为病/死禽和携带禽流感病毒的健康禽类，也可为携带禽流感病毒的奶牛等哺乳

动物。

6.1.3传播途径主要通过直接接触感染禽类、其他动物或其分泌物、排泄物，也可通过接触被病毒污染

受污染的环境、饲料、水、生牛奶和设备等物品传播。

6.2临床症状

6.2.1发病禽临床症状

病禽精神沉郁，嗜睡，头翅下垂，呆立，采食和饮水量下降；有呼吸道症状，鼻内有分泌物，有时

咳嗽，严重者呼吸困难；产蛋禽出现产蛋下降，软壳蛋、破蛋、沙壳蛋、畸形蛋等增多；排黄、白、绿色稀

便，含未完全消化的饲料。

病禽颜面和肉髯水肿；鸡冠和肉垂发绀，一般尖部更明显；眼结膜发红；脚鳞或有出血；口、鼻或

有出血。

有共济失调等神经症状，特别是水禽发病后期神经症状较明显。

发病率高，死淘率突然增加；有的病禽急性经过无明显症状而急性死亡。

6.2.2奶牛及其他动物的临床症状

患病奶牛采食量减少，反刍时间缩短；鼻分泌物增加，产奶量下降，牛奶发黄变稠，有时有凝固。

感染猫死前临床表现为精神状态抑郁、肢体动作僵硬、共济失调、失明、打转和大量眼鼻分

泌物。

其他动物有体温升高、呼吸困难、食欲下降等传染病常见临床症状。

6.3病理变化

6.3.1眼观变化

病禽喉头和气管黏膜重度充血、出血，个别有黏液，气管内有浆液性或干酪样渗出物，有时可见

栓塞；肺充血、出血、水肿；腹腔有浑浊的炎性分泌物；气囊膜上有时可见浆液性和粟米粒大小的黄色干

酪样炎性分泌物；产蛋禽卵巢及输卵管水肿、充血、出血及萎缩，卵泡充血、出血、萎缩、破裂，有的可见

“卵黄性腹膜炎”。

病禽心冠脂肪及心内膜、心外膜出血，有时可见心肌白色条纹状坏死。

病禽消化道黏膜广泛出血，一般十二指肠黏膜和盲肠扁桃体出血严重；腺胃乳头及腺胃和肌胃

交界处出血，有的肌胃也有出血，腺胃黏膜上常有大量脓性分泌物。

2

GB/T18936—2025

病禽胰腺常有灰白色坏死点或坏死灶；肾脏肿大，有时有尿酸盐沉积。

感染奶牛鼻腔有黏液、患病乳腺萎缩、结构不清，有炎性分泌物。

患病猫皮下组织轻度出血，多灶性脑膜出血。

6.3.2病理组织学变化

感染禽组织学检查显示广泛性肺炎，包括间质性肺炎、支气管上皮细胞变性和坏死、肺泡内出

血和炎性细胞浸润；心肌可能出现变性、坏死和炎性细胞浸润；肝脏变性、坏死和炎性细胞浸润；胰腺出

现坏死性变化；肾脏可能出现肾炎变化，包括肾小管变性和坏死；脾脏可能出现急性脾炎；脑血管充血、

胶质细胞增生和神经元变性。

感染奶牛组织学检查显示中性粒细胞和淋巴浆细胞性乳腺炎，管状腺结构明显消失，乳腺多个

小叶中充满中性粒细胞和细胞碎片；或可见淋巴细胞性肝炎、淋巴浆细胞间质性肾炎和淋巴细胞性皱

胃炎。

感染猫有轻度至中度多发性淋巴组织细胞性脑膜脑炎，伴有多处实质细胞和神经元坏死。

6.4鉴别诊断

家禽感染禽流感病毒后临床症状和病理变化与新城疫、传染性支气管炎、支原体等其他病原感染

有类似之处，需经实验室开展病原学或血清学鉴别诊断。

6.5临床判定

出现6.2和6.3中的一条或多条情况，初步判为AI临床可疑病例；可疑病例需采集拭子、脏器组

织、血清，或其他可能受污染物，如羽绒、羽毛、牛皮、生牛奶、污水、环境擦拭样品等，进行实验室确诊。

7样品采集、保存与运输

7.1总则

样品采集宜选择在发病初期、具有典型临床症状的发病动物，采集样品过程中避免交叉污染。死

亡动物采集气管、肺和脑等组织样品，分别进行包装处理；温顺活动物可采集咽喉和/或泄殖腔拭子，猛

禽猛兽和小珍禽可采集新鲜粪便，奶牛可采集牛奶、深部鼻拭子等。

7.2拭子样品采集

采样拭子宜选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙材质的拭子。采集咽喉拭子时将拭子深入喉头及

上颚裂来回刮2次~3次并旋转，取分泌液。采集泄殖腔拭子时将拭子深入泄殖腔旋转2圈~3圈并

蘸取少量粪便。将采样后的拭子分别放入盛有1.2mL样品稀释液（配制方法按附录