GB/T 19438.4-2004 H9亚型禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测方法

ICS11.220

B41

中华人民共和国国家标准

GB/T19438.4—2004

H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetection

ofavianinfluenzavirussubtypeH9

2004-02-14发布2004-02-15实施

发布

GB/T19438.4—2004

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刖5

GB/T19438—2004《禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》分为以下四个部分：

——GB/T1943&1-

-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》；

——GB/T1943&2--2004《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》；

——GB/T1943&3--2004《H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》；

——GB/T1943&4--2004《H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》。

本部分的附录A是资料性附录。

本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。

本部分起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、深圳市匹基生物工程股份有限公司。

本部分主要起草人:张利峰、张鹤晓、刘继红、郭晋优、刘艳华、杨伟。

T

GB/T19438.4—2004

H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法

1范围

本部分规定了荧光RT-PCR检测H9亚型禽流感病毒的操作方法。

本部分适用于活禽及其产品中H9亚型禽流感病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。

GB/T1943&1—2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法

3缩略语

下列缩略语适用于本部分。

3.1

荧光RT-PCR

荧光反转录-聚合酶链反应。

3.2

Ct值

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

3.3

RNA

核糖核酸。

3.4

DEPC

焦碳酸乙二酯。

3.5

PBS

磷酸盐缓冲盐水。

3.6

Taq酶

TagDNA聚合酶。

4原理

H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法是采用TaqMan技术。设计一对仅在H9亚型禽流感

病毒血凝素基因间保守的特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。探针的5'端和3’端分别标记

不同的荧光素，如5'端标记FAM荧光素，它发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团（用R

表示），3'端一般标记TAMRA荧光素，它在近距离内能吸收5’端报告荧光基团发出的荧光信号，称为

淬灭荧光基团（用Q表示）。

当PCR反应在退火阶段时,一对引物和一条探针同吋与目的基因片段结合，此吋探针上R基团发

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GB/T19438.4—2004

出的荧光信号被Q基团所吸收,仪器检测不到R所发出的荧光信号；当PCR反应进行到延伸阶段时，

Tag酶在引物的引导下，以四种核昔酸为底物，根据碱基配对的原则，沿着模