GBZ/T(卫生) 248-2014 放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价

ICS13.100

C60

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT2482014

放射工作人员职业健康检查外周血

淋巴细胞染色体畸变检测与评价

ㅤㅤㅤㅤ

Testandassessmentofchromosomalaberrationsonoccuationalhealth

p

examinationsforradiationworkers

2014-05-14发布2014-10-01实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

/—

GBZT2482014

目次

前言…………………………Ⅲ

1范围………………………1

2规范性引用文件…………………………1

3术语和定义………………1

4微量全血培养……………2

5染色体标本制备…………………………3

6染色体畸变分析…………………………3

7检测结果评价……………4

8检测报告和归档…………………………4

质量控制…………………4

9

()

附录A资料性附录常见的染色体畸变类型及鉴别分析……………5

()

附录B资料性附录外周血淋巴细胞染色体畸变分析记录表和报告单……………8

()

附录C资料性附录染色体畸变检测的实验室条件和试剂配制……10

ㅤㅤㅤㅤ

Ⅰ

/—

GBZT2482014

放射工作人员职业健康检查外周血

淋巴细胞染色体畸变检测与评价

1范围

,、

本标准规定了放射工作人员职业健康检查中外周血淋巴细胞染色体畸变检测的微量全血培养标

、、、。

本制备染色体畸变分析结果评价记录报告方法和质量控制

本标准适用于放射工作人员职业健康检查。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

—放射工作人员职业健康监护技术规范

GBZ2352011

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

ㅤㅤㅤㅤ

3.1

放射工作人员radiationworker

在放射工作单位从事放射职业活动中受到电离辐射照射的人员。

[—,]

GBZ23520113.1

3.2

职业健康监护occuationalhealthsurveillance

p

为保证放射工作人员参加工作时及参加工作后都能适任其拟承担或所承担的工作任务而进行的医

学检查和评价。

[—,]

GBZ23520113.2

3.3

染色体chromosome

,。

遗传物质的主要载体主要由DNA和蛋白质组成在细胞分裂的中期用碱性染料染色呈丝状或

。。

棒状的小体每个中期细胞中的染色体均有两条染色单体

3.4

染色体核型karote

yyp

,,

用显微描绘的方法把中期分裂细胞的染色体按照从大到小和着丝粒的位置等形态特征进行排序

称为染色体核型。

3.5

染色体畸变chromosomalaberration

()、。

正常染色体在受到物理如电离辐射化学或生物因素作用下发生的数目和结构上的异常染色

体畸变是电离辐射作用的敏感指标之一。

1

/—

GBZT2482014

3.6

染色单体型畸变chromatidteaberration

yp

,,

当细胞处于期或期受到诱变剂作用时由于大部分已通过复制成为两条染色单体因此断裂

SG2

,,。

可以发生在一条单体上也可以在两条单体上从而诱发的畸变

(,),(,)、(

常见的有单体裂隙chromatidact单体断裂chromatidbreakctb单体缺失chromatid

gpg

,)(,),(,)(,

deletionctd和单体互换chromatidexchanecte如三射体triradialtri和四射体uadriradiatus

gq

)。

qr

3.7

染色体型畸变chromosometeaberration

yp

,,,

当细胞处于或期受到诱变剂作用时染色体尚未复制是单条染色体被击中而断裂经期

G0G1S

,()。,

复制后在分裂中期见到的是条染色单体在同一部位显示有结构变化按畸变在体内的转归可

M2

分为非稳定性染色体畸变(,)和稳定性染色体畸变(

unstabl

echromosomalaberrationCustablechromo-

,)。(,)、(,)、

somalaberrationCs前者主要包括双着丝粒体dicentricdic着丝粒环centricrinr无着丝粒

g

(,)、(,)(,),、

环无着丝粒断片和微小体其中和统称为无着

acentricrinarframentfminuteminarfmin

gg

(,);(,)、(,)

丝粒体acentricsace等后者主要包括相互易位recirocaltranslocationt倒位inversioninv和

p

(,)。

缺失deletiondel等

3.8

染色体畸变率freuencofchromosomalaberration

qy

,,():

在所观察分析的中期细胞中染色体畸变所占的比率以每百细胞中的染色体畸变数表示见式1

ㅤㅤㅤㅤ

染色体畸变数

染色体畸变率…………()

=×100%1

分析细胞数

3.9

染色体畸变细胞率freuencofcellwithchromosomalaberration

qy

,,

在所观察分析的中期细胞中含有染色体畸变的细胞比率以每百细胞中含染色体畸变细胞数表示

见式():

2

染色体畸变细胞数

染色体畸变细胞率……()

=×100%2

分析细胞数

4微量全血培养

4.1外周静脉血采集

(、)。

4.1.1体检时静脉血的采集应在所有放射性检查如拍胸片乳腺钼靶检查等前进行

,。

4.1.2采集受检者静脉血约2mL需肝素抗凝

4.2微量全血培养步骤

(),

将采集的静脉血号针头约滴加入到配制好的培养液中轻轻摇

0.3mL7205mLRPMI-1640

,。。

匀在培养瓶上编号并注明培养开始时间和日期每人次平行培养瓶恒温培养箱内培

237℃±0.5℃

,/(//),

养24h后每瓶培养液中加入10gmL的秋水仙碱20L~25L终浓度0.04mL~0.05mL

μμμμgμg

。//

继续培养24h~28h后收获细胞或培养开始时加入终浓度为0.015gmL~0.03mL的秋水仙

μμg

,。

碱培养至48h~52h后收获细胞

2

/—

GBZT2482014

5染色体标本制备

5.1低渗

,/,

终止培养后用吸管轻轻抽去培养瓶中的上清液每瓶加入经预温的

8mL37℃0.075molLKCl

,()

将细胞团块充分吹打均匀后移至10mL的尖底玻璃离心管中放入37℃恒温水浴锅箱中低渗

20min~30min。

5.2预固定

,(),

取出低渗完毕的离心管每管加入滴滴新配制的固定液甲醇冰醋酸体积比用

5~10∶=3∶1

,//()。

吸管吹打混匀水平离心机中约离心

1000rmin~1500rmin200~2508min~10min

gg

5.3第一次固定

,,,

取出离心管用吸管吸去上清液沿管壁每离心管中加入8mL固定液用吸管快速吹打细胞团块

,,//(

并充分吹打混匀常温下固定在水平离心机中约

20min~30min1000rmin~1500rmin200g~

250g)离心8min~10min。

5.4第二次固定

,。

取出离心管重复第一次固定的操作

5.5制片

ㅤㅤㅤㅤ

,,

取出离心管吸去上清液根据细胞团块的大小每离心管中加入滴滴固定液以调节细胞浓

3~5

。()

度然后以一定高度10cm~30cm将细胞悬液滴在经37℃水浴预热或在4℃冰箱预冷的洁净载玻

,。。

片上室温空气自然干燥每张玻片滴滴滴

2~3

5.6编号

,。

对每一张染色体标本片进行编号并按照编号做好记录

5.7染色

(),

将用pH6.8的磷酸缓冲液配制的10%吉姆萨Giemsa染液均匀涂于染色体标本片上室温下染

,(),。

色8min~10min以一定倾角约45°用自来水轻轻冲洗洗掉染液后置于玻片架上室温下自然晾干

6染色体畸变分析

6.1染色体畸变阅片方法

6.1.1盲法阅片。

,()

按显微镜载物台刻度坐标在低倍镜下物镜倍从右至左逐列或逐行对每张染色体标本片

6.1.210

,()。

扫描式寻找可供分析的中期分裂细胞找到目标后在油镜物镜100倍下计数和分析每位受检者至

,。

少分析100个中期分裂细胞但作为慢性放射病诊断参考指标时至少分析200个中期分裂细胞

:;,,。

6.1.3中期细胞的选择染色体数目为46±1染色体分散良好长短适中各条染色体可清楚辨认

6.1.4出现以下情况的中期细胞不宜作计数分析:

)染色体数目少于条;

a45

3

/—

GBZT2482014

),;

b在同一细胞内染色体过于分散不能在一个油镜视野内观察到

)染色体形态过度细长或过度短粗;

c

d)染色体呈扭曲状或紧缩成团;

),;

e染色体分散不良重叠太多

)染色太深不能鉴别染色单体交叉重叠;

f

g)同一条染色体的两条染色单体间距离过大。

6.2染色体核型分析

,。。

6.2.1在油镜下依据染色体的形态进行分组通过分组确定是否有染色体结构异常见附录A

主要分析计数、和等非稳定性染色体畸变(),以及明显的非对称性的和等稳

6.2.2acedicrCutdel

()。,、,

定性染色体畸变Cs观察到的染色单体型畸变如ctbcte等也应记录但不作为主要观察指标计

。。。

数观察到的畸变需由两名以上分析者复核确认见附录A

,,()(),

伴随或的不再单独计数记录为或如多于或的数则另计为

6.2.3dicracedic1r1dicrace

;()或(),以区别细胞在受照,

如无伴随的或记录为r0后已进入第二次以后的分裂

+aceacedicrdic0

造成ace丢失。

6.2.4染色体断裂(,)指二条染色单体同时断开的距离大于染色单体的横径,

chromosomalbreakcsb

应计数为ace。

。。

6.2.5将选择分析的每一个中期细胞记录在染色体畸变分析记录表内见表B.1

,。

6.2.6记录畸变的文字和标记应按国际染色体命名法书写并记下每一畸变在显微镜的坐标位置

7检测结果评价

ㅤㅤㅤㅤ

无着丝粒体畸变率()正常参考值范围。大于为异常。

7.1ace0%~3%3%

()、()()。

双着丝粒体着丝粒环和稳定性染色体畸变率大于或等于为异常

7.2dicrt1%

,。

7.3对检测结果异常的受检者可在3~6个月内复查

8检测报告和归档

。。

8.1对每位受检者应出具外周血淋巴细胞染色体畸变检测报告单见第B.2章

,、

8.2检测的染色体标本片应保存至下次体检后受检者登记表染色体畸变记录表等原始资料应建档

,。

长期保存并建立电子档案

9质量控制

,。

9.1实验室应通过计量认证或国家实验室认可并定期参加国家组织的实验室间比对

,,,

实验室应有名以上专业技术人员经严格训练能掌握电离辐射生物效应的基础知识熟练识别

9.22

各种类型的染色体畸变。

、、,

9.3对影响染色体畸变检测质量的实验室条件仪器设备条件试剂配制和实验前准备等要求见附

录C。

4

/—

GBZT2482014

附录

A

()

资料性附录

常见的染色体畸变类型及鉴别分析

A.1染色体核型分组

,(),(

正常人体细胞染色体数目为条其中条为常染色体另条为性染色体

4644autosome2sex

)。,;,。,

chromosome正常男性为46XY正常女性为46XX根据丹佛体系的分组原则即在常规染色条

,,()

件下依据染色体从大到小和着丝粒的位置等形态学特征将条分为对常染色体分为组和

46227

。:,;,

对性染色体具体分组如下组号对中或亚中着丝粒染色体组号对亚中着丝

1A1~33B4~52

粒染色体;组号对亚中着丝粒染色体;组,号对端着丝粒染色体;组,号

C6~127D13~153E16~18

对亚中着丝粒染色体;组,号对中着丝粒染色体;组,。

3F19~202G号对端着丝粒染色体由

21~222

,

于和染色体在常规染色条件下分别与组和组染色体在形态上没有明显区别通常将染色

XYCGX

体列入组计数,染色体列入组计数。

CYG

A.2染色体结构畸变的主要类型

A.2.1非稳定性染色体畸变

(,,)、。;

包括和在细胞分裂时由于未附着于纺锤丝往往丢失而如果两个着

acefminardicracedic

ㅤㅤㅤㅤ

,,,,

丝粒之间的节段相互平行两个单体可正常地分开但当两个着丝粒之间有一定距离时则易发生扭曲

,,,

或如果两个着丝粒分别被纺锤丝拉向相反两极其结果发生不分离或者导致染色体桥的形成桥在分

,,,

裂后期被拉断从而使其遗传物质在细胞分裂过程中分配不均匀造成子细胞遗传物质的不平衡使其

不能继续存活而导致细胞死亡;,。

r由于几何学上的原因在细胞分裂时被丢失

A.2.2稳定性染色体畸变

包括、、等。,,

tinvdel和虽然引起染色体片段发生位置改变但遗传物质没有变化仍保留基因

tinv

。,,。

的总数在细胞分裂过程中没有力学上的障碍在子细胞中能保持相对恒定而继续保留下来

A.3常见的染色体型畸变的主要类型

(,):。

A.3.1无着丝粒断片framentf染色体末端缺失部分形成的一对平行的无着丝粒染色单体留下

g

带有着丝粒的片段形成末端缺失的染色体(,)。

deletiondel

等点染色单体断裂或染色体断裂(,):条染色单

A.3.2isochromatidbreakorchromosomalbreakcsb2

,,,

体在相同的位置发生断裂断裂的远端部分发生了位置移动且断裂的宽度超过染色单体的横径形成

染色体末端缺失和染色体断片。

(,):,。

A.3.3微小体minutemin典型的微小体为一对圆形的染色质球比无着丝粒断片小是染色体臂

,,,

内发生两次断裂形成三个片段两个断裂之间的片段离开原位形成微小体余留的两个断端在断面直

接连接形成中间缺失染色体。

(,):。

A.3.4无着丝粒环acentricrinar一对环形无着丝粒的染色单体它和微小体其实是一种畸变类

g

,。,

型两者的区别仅在断裂点之间的距离不同无着丝粒环断裂点间的距离较大所以形成一对空心圆或

中央略凹陷。

(,):。、

A.3.5着丝粒环centricrinr一对带有着丝粒的环形染色单体在染色体长短臂各发生一次断

g

5

/—

GBZT2482014

,,。

裂后带有着丝粒的片段两端断面重新连接形成环状染色体两个无着丝粒片段连接成一个断片所以

,。,

计数染色体畸变时着丝粒环加断片计为一个染色体畸变着丝粒环和无着丝粒环的区别是前者带有

,。

着丝粒并伴有一个断片

(,):

A.3.6双着丝粒体和多着丝粒体dicentricsandolcentricdicandic具有两个或两个以上着丝

pyp

,。

粒的染色体称为双着丝粒或多着丝粒染色体为不对称互换两条或两条以上染色体各发生一次断裂

,,。

后具有着丝粒的部分连接形成双着丝粒体或多着丝粒体而无着丝粒断片连接形成断片计数染色体

,,;(),

畸变时双着丝粒体也伴随一个断片计为一个畸变如果为多着丝粒体如有个着丝粒则应换算成

n

,。

n-1个双着丝粒体并伴有n-1个断片

(,):,

A.3.7相互易位recirocaltranslocationt两条染色体各发生一次断裂并相互交换其无着丝粒片

p

,。,。

段形成两个结构重排的染色体如果交换长度是对称性的也称为对称互换如果互换的片段大小相

,,,,

差悬殊则结构重排的两个染色体的形态会发生明显变化其中一个明显变长另一个变短称为非对称

,。

互换可在常规染色条件下识别到

(,):,、、,

A.3.8倒位inversioninv一条染色体发生两次断裂形成上中下三个片段中段上下颠倒后与上

,。,();

下两段连接形成倒位染色体如果断裂处发生在着丝粒两侧则为臂间倒位pericentricinversion

(),()。

两个断裂如发生在着丝粒一侧长臂或短臂形成的倒位为臂内倒位paracentricinversion前者如

,,。

果两个断裂点与着丝粒之间的距离不等因着丝粒的位置发生改变可在非显带标本上识别到

,

A.3.9由于电离辐射可以诱发上述几种染色体型畸变所以这些畸变是评价电离辐射所致染色体结

构异常的主要观察指标。

A.4常见的染色单体型畸变的主要类型

(,):ㅤㅤㅤㅤ,,

A.4.1染色单体断裂tidbreakctb一条染色单体发生断裂且远端部分离开了原来的位置

chroma

形成染色单体缺失和染色单体断片。

(,):,

A.4.2染色单体互换chromatidexchanecte两条或两条以上的染色单体断裂后染色单体的断裂

g

,()()。

端互换重接后形成的染色体如三射体tr和四射体qr等互换可以发生在不同染色体的染色单体

,;,。

间称为间互换也可以发生在一条染色体的染色单体间或染色体内为内互换

(,):(),

A.4.3裂隙a一条染色单体上的非染色区非染色质裂隙的染色单体出现轻微的错排光镜

gpg

,。(,)

下显示为很小的裂缝其宽度不超过染色单体横径裂隙又分为染色单体裂隙chromatidact和

gpg

等点染色单体裂隙或染色体裂隙(,)。

chromosomeacs

gpg

、,

A.4.4由于物理化学和生物因素均能诱发染色单体型畸变而且人体受到电离辐射照射后从外周血