T/SATA 035-2022 蜂蜜中 21 种生物碱的测定 液相色谱—串联质谱法

ICS67.05

CCSX04

团体标准

T/SATA035—2022

蜂蜜中21种生物碱的测定

液相色谱—串联质谱法

Determinationof21alkaloidsinhoney—Liquid

chromatography-tandemmassspectrometry

2022-03-24发布2022-04-24实施

深圳市分析测试协会发布

T/SATA035-2022

目次

前言...................................................................................................................................................................Ⅱ

1范围.....................................................................................................................................................................1

2规范性引用文件.................................................................................................................................................1

3术语与定义.........................................................................................................................................................2

4原理.....................................................................................................................................................................2

5试剂和材料.........................................................................................................................................................2

6仪器和设备.........................................................................................................................................................2

7试样的制备与保存.............................................................................................................................................3

8测定方法.............................................................................................................................................................3

9结果与计算.........................................................................................................................................................5

10灵敏度、准确度和精密度...............................................................................................................................5

附录A（资料性）基质加标标准溶液（10μg/kg上机浓度）色谱图.............................................................6

附录B（资料性）21种生物碱的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量.......................10

I

T/SATA035-2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由深圳市分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：深圳市质量安全检验检测研究院、深圳市英思太检验检测有限公司。

本文件主要起草人：丁燕玲、陈彤、钟名琴、吴荣顺、黄婷、闫清华、陈丹华、叶夏声、黄永生、

罗兰、何玉榆。

本文件为首次发布。

II

T/SATA035-2022

蜂蜜中21种生物碱的测定-液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了用液相色谱串联质谱仪器检测蜂蜜中多种生物碱的方法。

本标准适用于蜂蜜中毒芹碱、毛果芸香碱、毒扁豆碱、东莨菪碱、山莨菪碱、钩吻碱、千里光非灵、

倒千里光碱、原阿片碱、马钱子碱、秋水仙碱、塔拉乌头胺、次乌头碱、中乌头碱、草乌甲素、乌头碱、

藜芦次碱、α-卡茄碱、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和α-茄碱的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可以使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测

GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经乙腈超声提取，离心后取部分提取液氮吹浓缩、复溶，经微孔滤膜过滤，用液相色谱串联质

谱仪测定，保留时间、离子相对丰度定性判断被测物，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。

5.1乙腈，色谱纯。

5.2甲酸，色谱纯。

5.3甲醇，色谱纯。

5.4无水硫酸钠，分析纯。

5.5乙酸铵，色谱纯。

1

T/SATA035-2022

5.6甲醇+水+甲酸（10+90+0.09）溶液配制：准确量取10.00mL甲醇（5.3）、90.00mL水、0.09mL

甲酸（5.2）溶液，混匀存放。

5.7生物碱标准品：21种生物碱中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量详见附录B，

均为有证标准物质。

5.8标准储备溶液：1.00mg/mL。准确称量每种标准物质，用甲醇配成1.00mg/mL的标准储备液，-18℃

冰箱中保存，有效期一年。

5.9混合标准中间溶液：10.0μg/mL。分别准确吸取每种标准储备溶液（5.8）1.00mL于100mL容量

瓶中，用甲醇稀释至刻度，-18℃冰箱中保存，有效期3个月。移取一定量的10.0μg/mL混合标准中间

溶液，用甲醇配成不同浓度的混合标准工作溶液，2℃-4℃条件下贮存，有效期1个月。

6仪器和设备

6.1液相色谱—串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。

6.2电子天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3高速离心机：转速不小于5000r/min。

6.4超声波清洗仪。

6.5氮吹仪。

6.6涡旋振荡器。

7试样的制备与保存

对未结晶的样品将其搅拌均匀，对有结晶的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于40℃的水浴中温热融化，

混合均匀后取样品约500g，装入洁净容器，密封，并标明标记，于常温下保存。

8测定方法

8.1提取

取1.00g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入5.00mL去离子水，涡旋混匀。加入10.00

mL乙腈，涡旋震荡5min，超声辅助提取10min。加入4.00g无水硫酸钠，迅速振摇1min，不低于

5000转/min离心6min。

8.2净化

于上述离心后提取液（8.1）中移取5.00mL上清液至15mL带刻度小管内，在45℃水浴中氮吹浓

缩至少于0.5mL。残留液用甲醇+水+甲酸（10+90+0.09）溶液准确定容至1.0mL，过0.22μm滤膜，供

液相色谱—串联质谱仪测定。

8.3基质加标标准工作曲线的制备

准确移取21种生物碱的混合标准溶液适量，添加到1.00g空白试样中，浓度为0.500μg/kg，

1.00μg/kg，5.00μg/kg，10.0μg/kg，20.0μg/kg，50.0μg/kg的各系列空白添加试样，按8.1-8.2步骤操作，

供液相色谱—串联质谱仪测定。

2

T/SATA035-2022

8.4仪器参考条件

8.4.1液相色谱条件

a)色谱柱：BEHC18（100×3.0mm，1.7μm）；

b)流动相：A相：5mmol/L乙酸铵（加0.1%甲酸）溶液；B相：甲醇溶液；

c)梯度：0.00-0.50min，维持90％A；0.50-4.00min，90％A线性变化到70％A；4.00min-6.50min,70％

A线性变化到10％A；6.50min-9.00min,维持10％A；9.00min-10.00min,10％A立即变化到90％A。

d)流速：0.40mL/min

e)柱温：40℃

f)进样量：5.00μL

8.4.2质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源

b)扫描方式：正离子扫描

c)检测方式：多反应监测

d)电离电压：2.00kV

e)源温：150℃

f)雾化温度：500℃

g)锥孔气流速：150L/h

h)雾化气流速：1000L/h

i)各种生物碱定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量见表1：

表121种生物碱定性定量离子对及去簇电压、碰撞电压

序保留时间ParentDaughterCompoundConeCollision

名称

号/min(m/z)(m/z)Name(v)(ev)

128.141.1coniine3021

1毒芹碱4.70

128.1*69.0coniine3015

208.8*96.2Pilocarpine2026

2毛果芸香碱2.90

208.8162.8Pilocarpine2020

276.2*162.0eserine3020

3毒扁豆碱5.42

276.2219.1eserine3011

304.2*138.1hyoscine3021

4东莨菪碱5.00

304.2156.2hyoscine3016

306.2122.1anisodamine3028

5山莨菪碱4.96

306.2*140.1anisodamine3024

323.1*195.1gelsemine3036

6钩吻碱5.26

323.1218.2gelsemine3032

334.2*120.0seneciphylline3026

7千里光非灵5.80