JJF 2204-2025 蛋白质纯化分析仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范

JJF2204—2025

蛋白质纯化分析仪校准规范

CalibrationSpecificationforProteinPurificationAnalyzers

2025-02-08发布2025-08-08实施

国家市场监督管理总局发布

JJF2204—2025

目录

引言

………………………(Ⅱ)

范围

1……………………(1)

引用文件

2………………(1)

术语

3……………………(1)

概述

4……………………(1)

计量特性

5………………(2)

校准条件

6………………(2)

环境条件

6.1……………(2)

测量标准及其他设备

6.2………………(2)

校准项目和校准方法

7…………………(3)

输液系统

7.1……………(3)

检测系统

7.2……………(5)

收集系统

7.3……………(6)

整机性能测试

7.4………………………(8)

校准结果表达

8…………(8)

复校时间间隔

9…………(8)

附录校准记录和校准证书推荐格式

A………………(9)

附录分析仪校准结果的测量不确定度评定示例

B…………………(13)

附录国际温标纯水密度表

C…………(19)

Ⅰ

JJF2204—2025

引言

国家计量校准规范编写规则通用计量术语及定义和

JJF1071《》、JJF1001《》

测量不确定度评定与表示共同构成支撑本规范制定工作的基础性系列规

JJF1059.1《》

范本规范的校准方法及计量特性等主要参考了实验室酸度计检定

。JJG119《pH()

规程液相色谱仪检定规程分析实验室用水规格和实验方

》、JJG705《》、GB/T6682《

法

》。

本规范为首次发布

。

Ⅱ

JJF2204—2025

蛋白质纯化分析仪校准规范

1范围

本规范适用于基于层析分离法的蛋白质纯化分析仪的校准

。

2引用文件

本规范引用了下列文件

:

实验室酸度计检定规程

JJG119-2018pH()

液相色谱仪检定规程

JJG705-2014

通用计量术语及定义

JJF1001—2011

生物计量术语及定义

JJF1265—2022

分析实验室用水规格和实验方法

GB/T6682—2008

凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本规范凡是不注日期的引用文

,;

件其最新版本包括所有的修改单适用于本规范

,()。

3术语

中界定的及以下术语和定义适用于本规范

JJF1001—2011、JJF1265—2022。

蛋白质纯化

3.1proteinpurification

利用各种蛋白质间的相似性来除去非蛋白物质的污染并利用各种蛋白质的差异

,

如大小形状电荷疏水性溶解度等将目的蛋白质从与其他蛋白质的混合物中

(、、、、)

提取出来的过程

。

4概述

蛋白质纯化分析仪以下简称分析仪是基于层析分离法用于分离和收集各种蛋白

()

质的仪器

。

分析仪主要的纯化和分离原理包括凝胶过滤层析离子交换层析疏水层析反相

、、、

层析和亲和层析分析仪的工作流程主要包括待测样品通过进样系统由输液系统进入

。,

分析仪的分离系统根据样品中各组分在层析柱内固定相和流动相间分配或吸附等特性

,

的差异达到分离效果由检测器检测各组分的保留时间和响应值峰面积或峰高后

,,()

由样品收集系统收集目标蛋白质分析仪除了配有紫外检测器外通常还配有检测

。,pH

器电导检测器等多种检测器实时控制流路中各项理化参数以确保蛋白质分离的

、,

效果

。

分析仪主要由进样系统输液系统检测系统分离系统收集系统和数据处理系

、、、、

统组成

。

1

JJF2204—2025

5计量特性

分析仪的计量特性及指标见表

1。

表1分析仪的计量特性

计量性能计量性能指标

泵流量示值误差

±5%

泵流量稳定性

≤3%

泵梯度误差

±3%

检测示值误差

pH±0.03pH

检测重复性

pH≤2%

电导检测温度示值误差

*±1.0℃

电导检测示值误差

*±2%

电导检测重复性

*≤2%

紫外检测器波长示值误差

±2nm

紫外检测器波长重复性

≤2nm

收集器温度示值误差

*±1.0℃

收集器加样示值误差

*±5%

收集器加样重复性

*≤5%

整机定量重复性

*≤3%

整机定性重复性

*≤1%

注:

以上技术指标不用于合格性判别,仅供参考,计量特性也可参照分析仪制造厂商给出的技术要求。

1

带项目如仪器适用,可进行该项目的校准。

2*

6校准条件

环境条件

6.1

环境温度为相对湿度不大于

6.1.1(10~30)℃,80%。

室内应防潮避光防热无腐蚀性物品通风良好

6.1.2、、、,。

测量标准及其他设备

6.2

数字温度计测量范围为最大允许误差

6.2.1:(-10.0~100.0)℃,±0.3℃。

分析天平最大称量不小于最小分度值不大于级

6.2.2:200g,1mg,。

电子秒表最小分度值不大于最大允许误差

6.2.3:0.1s,±0.5s/d。

标准物质测量范围为扩展不确定度应小于或等于k

6.2.4pH:pH3~10,0.01(=3)。

电导率标准物质相对扩展不确定度应小于或等于k

6.2.5:0.25%(=2)。

紫外分光光度计溶液标准物质参考波长为和透射

6.2.6:235nm、257nm313nm,

2

JJF2204—2025

比扩展不确定度应小于或等于k

0.3%(=2)。

蛋白质标准物质使用纯品蛋白质标准物质相对扩展不确定度小于或等于

6.2.7:,

k

8%(=2)。

纯水符合要求的二级水

6.2.8:GB/T6682—2008。

7校准项目和校准方法

输液系统

7.1

泵流量示值误差和泵流量稳定性

7.1.1

用专用管路连接分析仪的入口出口以脱过气的纯水作为流动相通过管路冲洗

、,,

系统使系统中充满纯水将温度计插入流动相内测量试验温度设定适当的流量

,。,。,

当输液泵运行稳定后在泵流量设定范围中均匀取个测量点用合适体积的容量瓶

,3,

事先清洗干燥后称重分别接收规定时间流出的流动相并称量总重量重复测量

(、),,

次测量时间如表所示按公式公式计算流量的实测值按公式

3,2。(1)、(2),(3)

计算流量示值相对误差S按公式计算流量稳定性S

s,(4)R。

表2泵流量测定参数

泵流速设定值大于

/(mL/min)0.2~5.05.0~5050

流动相收集时间

/(min)521

FWρt

m=Δ/(t×)(1)

WWW

Δ=2-1(2)

式中

:

F流量实测值

m———,mL/min;

W收集的流动相的质量

Δ———,g;

ρ试验温度下流动相的密度3不同温度下流动相的密度参见

t———,g/cm(

附录

C);

t收集流动相的时间

———,min;

W容量瓶加流动相的质量

2———,g;

W容量瓶的质量

1———,g。

FF

Ss-m

s=F×100%(3)

m

式中

:

S流量示值相对误差

s———,%;

F流量设定值

s———,mL/min;

F同一设定流量次测量值的算术平均值

m———3,mL/min。

FF

Smax-min

R=F×100%(4)

m

3

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式中

:

S流量稳定性

R———;

F同一设定流量次测量值的最大值

max———3,mL/min;

F同一设定流量次测量值的最小值

min———3,mL/min;

F同一设定流量次测量值的算术平均值

m———3,mL/min。

泵梯度误差

7.1.2

将仪器连接好不接色谱柱设定检测波长为流量设置为按

,,254nm,2mL/min。

表设置梯度参数如果系统不支持自动变化梯度则每隔手动设置梯度参数

3,,60s。A

溶剂为纯水溶剂为含丙酮的水溶液开始测试前先用纯水平衡系统至少

,B0.1%。,

等待基线平稳后开始执行梯度程序采集梯度曲线测量各溶液配比时的输出

10min,,,

信号值重复测量次用公式计算每一阶梯对应的响应信号值的变化值Li按

,2。(5),

公式计算段阶梯响应信号值的总平均值Li按公式计算每一段的梯度误

(6)5,(7)

差Gi取Gi最大者作为仪器的梯度误差

,。

LiLiLiLi

11(-1)22(-1)

Li[-]+[-]

=(5)

2

式中

:

Li第i段阶梯响应信号值的平均值

———;

Li第i段阶梯第组响应信号值

1———1;

Li第i段阶梯第组响应信号值

1(-1)———(-1)1;

Li第i段阶梯第组响应信号值

2———2;

Li第i段阶梯第组响应信号值

2(-1)———(-1)2。

n

Li

i=

1

Li=∑

n(6)

式中

:

Li段阶梯响应信号值的总平均值

———5;

n梯度的阶梯数n

———,=5。

LiLi

Gi-

()

=Li×100%7

式中

:

Gi第i阶段的梯度误差

———。

表3梯度参数

序号通道通道

A/%B/%

11000

28020

36040

4

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表3梯度参数续

()

序号通道通道

A/%B/%

44060

52080

60100

71000

检测系统

7.2

检测器示值误差和重复性

7.2.1pH

选择种标准溶液范围在使用数字温度计测量标准溶液温度根据

3,pH3~10,,

标准物质证书确认在相应温度下的溶液标准值的修正值首先在校准功能下选用

pH。,

两种标准溶液进行标定推荐使用为和附近的标准溶液然