DB15/T 968-2016 玉米秸秆低温高效降解复合菌系筛选方法

ICS65.020.20

B05

备案号：49427-2016DB15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T968—2016

玉米秸秆低温高效降解复合菌系筛选方法

2016-03-15发布2016-06-15实施

内蒙古自治区质量技术监督局发布

DB15/T968—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由内蒙古农业大学提出。

本标准归口单位：内蒙古农业大学。

本标准起草单位：内蒙古农业大学。

本标准主要起草人：高聚林、于晓芳、王振、王志刚、闹干朝鲁、胡树平、孙继颖、谢岷、苏治军、

青格尔。

I

DB15/T968—2016

玉米秸秆低温高效降解复合菌系筛选方法

1范围

本标准规定了玉米秸秆低温高效降解复合菌系的筛选过程。

本标准适用于在4℃~15℃条件下玉米秸秆降解微生物的筛选。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

纤维素酶cellulases

在各种酶组分的协同作用下，能降解纤维素，使之变成纤维寡糖、纤维二糖和葡萄糖的酶。

3.2

纤维素酶活性cellulaseactivity

1min释放1μmol葡萄糖所需酶量为一个单位（U/mL或U/g）。

3.3

滤纸酶活性filterpaperactivity

1g固体酶或1mL液体酶，在温度50℃±0.1℃，在指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤

维素酶pH6.0），水解滤纸底物1h，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个酶活单位，以U/g或

U/mL表示。

3.4

内切-β-1,4-葡聚糖酶活性endoglucanases

1g固体酶或mL液体酶，在温度50℃±0.1℃，在指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤维

素酶pH6.0），水解羧甲基纤维素钠底物1h，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个酶活单位，

以U/g或U/mL表示。

3.5

外切-β-1,4-葡聚糖酶活性cellobiohydrolases

1

DB15/T968—2016

1g固体酶或1mL液体酶，在温度50℃±0.1℃，在指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤

维素酶pH6.0），水解脱脂棉底物1h，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个酶活单位，以U/g

或U/mL表示。

3.6

β-葡萄糖苷酶活性β-glucosidase

1g固体酶或mL液体酶，在温度50℃±0.1℃，在指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤维

素酶pH6.0），水解水杨苷底物1h，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个酶活单位，以U/g或

U/mL表示。

4缩略语

下列缩略语适合本文件。

FPA：滤纸酶活性(Filterpaperactivity)。

Cx：内切-β-1,4-葡聚糖酶活性(Endoglucanases)。

C1：外切-β-1,4-葡聚糖酶活性(Cellobiohydrolases)。

CB：β-葡萄糖苷酶活性(β-glucosidase)。

5筛选程序

5.1菌源样品的采集

选择寒冷地区，采集富含纤维素的土壤或牛羊粪样品，每个样品采集量约1kg。

5.2富集培养

将10%菌源样品接种到富集培养基之一中（见附录A）进行富集培养；培养15d～20d至富集培

养基颜色变深、滤纸条或玉米秸秆溃烂，取培养液，按5%～10%接种量接种到新鲜的富集培养基中继

续富集培养，如此转接富集培养4次～5次。

5.3继代培养

取富集培养后的培养液，按5%～10%接种量接种到放置有滤纸条的继代培养基中（见附录A），在

25℃条件下，继代培养至滤纸条黄化断裂时，记录断裂时间，并吸取断裂处培养液，转接至新的继代

培养基中，如此连续重复继代培养5次。

5.4低温驯化培养

在25℃条件下，继代培养至滤纸条黄化断裂时间恒定时，按每传一代降低1℃的温度梯度进行低

温驯化，驯化培养温度至4℃时停止。在驯化过程中选择滤纸分解情况好的培养物。

5.5产酶培养

按5%～10%接种量吸取低温驯化后的培养液，接种到产酶培养基中，在