YY/T 0688.1-2023 感染病原体敏感性试验与抗微生物药物敏感性试验设备的性能评价 第1部分：抗微生物药物对感染性疾病相关的快速生长需氧菌的体外活性检测的肉汤微量稀释参考方法

ICS11100/10

CCSC.30

中华人民共和国医药行业标准

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

代替YY/T06881—2008

.

感染病原体敏感性试验与抗微生物

药物敏感性试验设备的性能评价

第1部分抗微生物药物对感染性

:

疾病相关的快速生长需氧菌的体外

活性检测的肉汤微量稀释参考方法

Susceptibilitytestingofinfectiousagentsandevaluationofperformance

ofantimicrobialsuscetibilittestdevices—Part1Brothmicro-dilution

py:

referencemethodfortestingtheinvitroactivityofantimicrobialagents

againstrapidlygrowingaerobicbacteriainvolvedininfectiousdiseases

ISO20776-12019IDT

(:,)

2023-03-14发布2023-11-01实施

国家药品监督管理局发布

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

目次

前言

…………………………Ⅰ

引言

…………………………Ⅱ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

试验程序

4…………………3

概述

4.1…………………3

培养基

4.2………………3

抗微生物药物

4.3………………………3

概述

4.3.1……………3

原液的配制

4.3.2……………………3

工作液的配制

4.3.3…………………3

微量稀释盘的制备

4.3.4……………4

微量稀释盘的储存

4.3.5……………4

接种菌液的制备

4.4……………………4

概述

4.4.1……………4

肉汤培养法

4.4.2……………………4

直接菌悬液法

4.4.3…………………4

微量稀释盘的接种

4.5…………………5

微量稀释盘的孵育

4.6…………………5

结果的判读

4.7…………………………5

结果可能给出不可靠结果的特殊试验情况

4.8MIC…………………5

质量控制

5…………………6

附录资料性肉汤培养基

A()Mueller-Hinton…………7

附录资料性特定抗微生物药物原液制备的溶剂和稀释液

B()………10

附录资料性肉汤稀释法敏感性试验中抗微生物药物工作液稀释系列的制备

C()…16

附录资料性特殊试验情况

D()…………17

参考文献

……………………18

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件代替临床实验室检测和体外诊断系统感染病原体敏感性试验与抗

YY/T0688.1—2008《

菌剂敏感性试验设备的性能评价第部分抗菌剂对感染性疾病相关的快速生长需氧菌的体外活性

1:

检测的参考方法与相比除结构调整和编辑性改动外主要技术变化如下

》,YY/T0688.1—2008,,:

更改了成为仅含肉汤微量稀释法的性能文件

a);

删除了折点定义和信息见年版的和

b)S、I、R(20082.5.1、2.5.22.5.3);

更改了嵌入表格的位置见附录附录附录年版的表表和表

c)(B、C、D,20081、23);

删除了质量控制范围表见年版的表

d)(20084);

更改了文件中所用抗微生物药物的溶剂和稀释剂的表格见附录年版的表

e)(B,20081);

更新了目前使用的特定抗微生物药物的特殊培养基和方法性能的资料见附录年版

f)(D,2008

的表

3)。

本文件等同采用感染病原体敏感性试验与抗微生物药物敏感性试验设备的性

ISO20776-1:2019《

能评价第部分抗微生物药物对感染性疾病相关的快速生长需氧菌的体外活性检测的肉汤微量稀

1:

释参考方法

》。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由国家药品监督管理局提出

。

本文件由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会归口

(SAC/TC136)。

本文件起草单位北京市医疗器械检验研究院中国医学科学院北京协和医院上海市临床检验中

:、、

心碧迪医疗器械上海有限公司

、()。

本文件主要起草人毕春雷童明庆徐英春王敬华田静

:、、、、。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为

:

年首次发布为

———2008YY/T0688.1—2008;

本次为第一次修订

———。

Ⅰ

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

引言

抗微生物药物体外敏感性试验通常是针对于可能导致疾病的微生物尤其是那些被认为对频繁使

,

用的抗微生物药物呈现耐药性的微生物种属除此之外该试验在细菌耐药性监测及其流行病学研究

。,

以及新抗微生物药物与现有抗微生物药物之间的比较等方面也很重要

。

抗微生物药物敏感性试验用稀释法来测定抗微生物药物的最小抑菌浓度是抗微生物药物

(MIC),

敏感性试验的参考方法法用于细菌耐药性监测定义鉴别野生型表型新抗微生物药物比较性

。MIC、、

测试对于常规方法所得结果不可靠或临床需要定量结果的微生物试验确定在常规检测中得出模棱两

、,

可结果的微生物的敏感性对于稀释法测试某抗微生物药物对于特定微生物的值是通过观察微

。,MIC

生物分别在含有系列稀释浓度的该抗微生物药物的一系列肉汤肉汤稀释法中或琼脂平板琼脂稀释

()(

法上的可见的生长能力来确定的

)。

抗微生物药物的最小抑菌浓度是指在规定的体外条件下规定的孵育时间内能抑制某特定

(MIC),,

微生物出现肉眼可见生长的抗微生物药物的最低浓度以为单位值有助于临床医师了

(mg/L)。MIC

解微生物对抗微生物药物的敏感性从而帮助他们制定合理的用药方案为保证室内和室间肉汤

。MIC

试验的重现性需要严格的质量控制和标准化通常在两到三个倍比稀释度范围并有一主要的

,。MIC,

中心值

。

肉汤稀释法一种向一系列相同体积的含某抗微生物药物溶液的浓度通常是几何级数递增的肉

:()

汤培养基中接种已知固定量某微生物的方法

。

肉汤微量稀释法在微量稀释盘中进行肉汤稀释试验

:。

本文件所描述的方法旨在测试需氧菌的纯培养物这些细菌在琼脂平板和含标准

,Mueller-Hinton

化肉汤体积的标准化的微量稀释盘微孔中经过夜孵育均易于生长根据

Mueller-Hinton(≤200μL)。

所测试抗微生物药物不同可能需要调整

。

本文件所描述的肉汤稀释法本质上与许多国家目前所用的方法是一致的以及美国临床和实验室

,

标准化协会和欧洲抗微生物药物敏感性试验委员会所发布方法所有这些方法都是

(CLSI)(EUCAST),

在和所描述方法的基础上发展而来的

EricssonSherris。

Ⅱ

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

感染病原体敏感性试验与抗微生物

药物敏感性试验设备的性能评价

第1部分抗微生物药物对感染性

:

疾病相关的快速生长需氧菌的体外

活性检测的肉汤微量稀释参考方法

警告———使用本文件可能涉及危险性材料操作和设备本文件无意陈述使用本文件所涉及的所

、。

有安全问题使用本文件前使用者有责任建立适当的安全和健康措施并确定任何其他限制的适用性

。,。

1范围

本文件描述了测定抗微生物药物值的一种参考方法肉汤微量稀释法值能给医生

MIC———。MIC

作为一个指导其反映抗微生物药物在规定的体外试验条件下的抗菌活性还应考虑诸如药物药理学

,,、

药代动力学或细菌耐药机制等其他因素这可使细菌归类为敏感中介或耐药另

。“(S)”“(I)”“(R)”。

外值的分布能用于确定野生型或非野生型细菌群落尽管值的临床解释超出了本文件的

,MIC。MIC

范围但为了便于临床解释对某些抗微生物药物细菌组合基本方法进行调整是必要的这些调整包

,,-。

含在本文件单独的附录中为了确保试验结果的可比性与可靠性其他药敏试验方法如纸片扩散法或

。,(

诊断试验器械有必要和本参考方法比较进行确认

)。

本文件适用于采用肉汤微量稀释法测定值

MIC。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件

。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

抗微生物药物antimicrobialagent

一类可以抑制或杀死微生物可能用于抗感染治疗的生物来源的半合成的或合成的物质

,、。

注消毒剂灭菌剂和防腐剂不在此定义范围内

:、。

32

.

效价potency

药物活性的一种量度用产生给定强度药效所需的量来表示

,。

注效价可表达为受试物中组分以毫克每克的质量分数或以国际单位每克的活性含量或以体积

:(mg/g),(IU/g),

分数或质量分数的百分含量或摩尔数每升的物质的量浓度摩尔分数

()。

33

.

浓度concentration

在规定体积溶液中抗微生物药物的量

。

1

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

注1浓度以毫克每升来表示

:(mg/L)。

注2是指定的单位

:mg/LISO。

34

.

原液stocksolutions

用于进一步稀释的初始浓度溶液

。

35

.

最小抑菌浓度minimuminhibitoryconcentrationMIC

;

在规定的体外试验条件下在规定的孵育时间内能抑制细菌出现肉眼可见生长的最低浓度

,,。

注以毫克每升表示

:MIC(mg/L)。

36

.

折点breakpointsBP

;

用于界定受试细菌对药物敏感性的临床类别是敏感中介和耐药的特定参数值如值

“”“”“”,MIC。

注关于折点的最新解释可参考应用本参考方法的机构的最新出版物例如和

:,(CLSIEUCAST)。

37

.

野生型wildtype

对某抗微生物药物没有已知耐药机制的菌株

。

38

.

参考菌株referencestrains

有特定分类编号的且抗微生物药物敏感性表型和或基因型确定及稳定的菌株

,()。

注参考菌株是从菌种保藏机构获得并作为质量控制其通常以储存培养物的形式进行保存试验所用工作培养物

:,,

均来源于此

。

39

.

肉汤稀释法brothdilution

一种在容器中加入适当体积抗微生物药物溶液该抗微生物药物浓度采用递增通常两倍增加再

,(),

加入适当体积的含一定接种量菌液肉汤的技术

。

注该方法的目的是确定值

:MIC。

310

.

微量稀释法micro-dilution

在微量稀释盘中进行的肉汤稀释试验每孔最终工作液体积不超过

,200μL。

311

.

液体培养基/肉汤

broth

用于细菌体外培养的液体培养基

。

注对于肉汤参考方法培养基是标准化的肉汤见附录

:,Mueller-Hinton(A)。

312

.

接种量inoculum

依据接种后终体积计算出的细菌在最终菌药混合物中的数量

。

注接种量以每毫升的菌落形成单位来表示

:(CFU/mL)。

313

.

接种量效应inoculumeffect

由接种量的改变所导致的值的变化

CFU/mLMIC。

2

YY/T06881—2023/ISO20776-12019

.:

4试验程序

41概述

.

本试验是在聚苯乙烯微量稀释盘中进行的该方法首先是抗微生物药物工作液的配制然后每孔

。,

加抗微生物药物工作液接种物添加量体积也是或者每孔工作液为接种物的接

50μL(50μL),100μL(

种量最多不超过

10μL)。

42培养基

.

应使用肉汤见附录

Mueller-Hinton,A。

43抗微生物药物

.

431概述

..

受试抗微生物药物可直接从制造商或通过可靠的商业来源获得但不能以临床使用的药物制剂作

,

为受试物抗微生物药物应以粉剂供应具有批号效价失效日期及推荐的保存条件细节抗微生物

。,、、。

药物应在供应商推荐温度下使用干燥剂避光保存于密闭容器中吸湿剂宜分装成小份在每次试验情

。,

况下使用其中之一

。

为避免凝结水分在打开装有受试物的容器之前应将其恢复至室温

,,。

432原液的配制

..

抗微生物药物需要使用校准过的分析天平称量配制抗微生物药物标准溶液时应根据受试物的

。,

效价通过公式和公式计算出所需的受试物的质量或稀释溶剂的体积

,(1)(2)。

V×ρ

m=

P…………(1)

m×P

V=

ρ…………(2)

式中

:

m抗微生物药物干粉的质量单位为克

———(),(g);

V稀释剂的体积单位为升

———,(L);

ρ原液的质量浓度单位为毫克每升

———,(mg/L);

P抗微生物药物干粉的效价单位为毫克每克

———(),(mg/g)。

虽然某些抗微生物药物的溶解度是个限制因素但抗微生物药物原液的质量浓度宜为

,1000mg/L

或更高原液的实际配制浓度取决于工作液系列稀释浓度梯度的配制方法除非生产商有特殊的配

。()。

制稀释要求抗微生物药物宜用无菌蒸馏水溶解并稀释某些抗微生物药物需要用特殊的溶剂来溶解

,。

见附录

(B)。

注对于当前文件附录中还未列的新抗微生物药物咨询制造商对特定抗微生物药物最适合的溶剂和稀释液信

:B,

息通常配好的抗微生物药物工作液没必要进行消毒如果必要抗