DB37/T 1020-2008 肉类制品中鸡肉、牛肉、猪肉和马肉成分PCR快速检测方法

ICS67.050

X04

DB37

山东省地方标准

DB37/T1020－2008

肉类制品中鸡肉、牛肉、猪肉和马肉成

分PCR快速检测方法

DetectionforChicken,Beef,Pork,HorseIngredient

ofMeatProductsbyPCRMethod

2008-XX-XX发布2008-09-01实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T1020－2008

前言

本标准由山东省质量技术监督局提出。

本标准由山东食品标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业管理干部学院、山东省标准化研究院。

本标准主要起草人：孙建霞、白卫滨、刘冠军、和法涛、许武强、郝征红。

I

DB37/T1020－2008

肉类制品中鸡肉、牛肉、猪肉和马肉成分PCR快速检测方法

1范围

本标准规定了肉类制品中鸡肉、牛肉、猪肉和马肉成分PCR检测方法。

本标准适用于鸡肉、牛肉、猪肉和马肉及其加工制品的PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.4-2004转基因产品检测核酸定性PCR检测方法

3原理

按照鸡肉、牛肉、猪肉和马肉特异性序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。根据是否扩增获

得预期的221bp,274bp,394bp和433bpDNA片段，判断试样中是否含有鸡肉、牛肉、猪肉和马肉成

分。

4试剂、材料及溶液配制

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水应符合GB/T6682一级水要求。

4.1琼脂糖

4.210mg/mL溴化乙锭（EB）溶液。

注：EB有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。

4.310mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液：称取NaOH80g，先用160mL水溶解后，再加水定容到200mL。

4.4500mmol/L乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（pH8.0）：称取EDTA-Na218.6g，加入70mL

水中，再加入适量10mol/LNaOH溶液，加热至完全溶解后，冷却至室温，用10mol/LNaOH溶液调

pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。

4.51mol/LTris-HCl溶液（pH8.0）：称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶解于800mL水中，

用浓盐酸调pH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。

4.61％十二烷基黄酸钠(SDS)：称取100g电泳级SDS溶解于900mL水中,加热至68℃助溶，加入几

滴浓盐酸调节溶液pH值到7.2,加水定容至1000mL,分装备用。

4.75mol/LNaCl：称取292.2gNaCl溶解于800mL水中，加水定容至1000mL，分装后灭菌备用。

4.8DNA提取缓冲液（TESR）：包括50mmol/LTris-HCl（pH8.0），5mmol/LEDTA-Na2pH8.0，0.1％SDS，

50mmol/LNaCl高温灭菌后置室温下，临用时加入RNA酶（20mg/L）。

4.9TE缓冲液（pH8.0）：分别加入1mol/LTris-HCl（pH8.0）10mL和500mmol/LEDTA-Na2（pH8.0）

溶液2mL，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。

4.1050×TAE