GB/T 21315-2007 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法

犐犆犛６７．１２０

犡０４

中华人民共和国国家标准

／—

犌犅犜２１３１５２００７

动物源性食品中青霉素族抗生素残留量

检测方法液相色谱质谱／质谱法

犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狀犻犮犻犾犾犻狀狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犻狀—

狆犵

／

犔犆犕犛犕犛犿犲狋犺狅犱

２００７１０２９发布２００８０４０１实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

／—

犌犅犜２１３１５２００７

前言

本标准的附录、附录、附录为资料性附录。

ＡＢＣ

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：林维宣、唐英章、李一尘、赵彤彤、彭涛、田苗、于灵、李军、孙兴权。

本标准为首次发布。

Ⅰ

／—

犌犅犜２１３１５２００７

动物源性食品中青霉素族抗生素残留量

检测方法液相色谱质谱／质谱法

１范围

本标准规定了动物源性食品中青霉素族抗生素残留量液相色谱质谱／质谱测定和确证方法。

本标准适用于猪肌肉、猪肝脏、猪肾脏、牛奶和鸡蛋中羟氨苄青霉素（ａｍｏｘｉｃｌｌｉｎ）、氨苄青霉素

ｙ

（）、邻氯青霉素（）、双氯青霉素（）、乙氧萘胺青霉素（）、苯唑青霉

ａｍｉｃｉｌｌｉｎｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎｄｉｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎｎａｆｃｉｌｌｉｎ

ｐ

素（）、苄青霉素（）、苯氧甲基青霉素（）、苯咪青霉素（）、甲氧苯青霉

ｏｘａｃｉｌｌｉｎｇｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎａｚｌｏｃｉｌｌｉｎ

素（）、苯氧乙基青霉素（）等种青霉素族抗生素残留量的检测。

ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎｐｈｅｎｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ１１

２规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

／—分析实验室用水规格和试验方法（：）

ＧＢＴ６６８２１９９２ｎｅＩＳＯ３６９６１９８７

ｑ

３原理

样品中青霉素族抗生素残留物用乙腈水溶液提取，提取液经浓缩后，用缓冲溶液溶解，固相萃取小

柱净化，洗脱液经氮气吹干后，用液相色谱质谱／质谱测定，外标法定量。

４试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为／—规定的一级水。

ＧＢＴ６６８２１９９２

４．１乙腈：高效液相色谱级。

４．２甲醇：高效液相色谱级。

４．３甲酸：高效液相色谱级。

４．４氯化钠。

４．５氢氧化钠。

４．６磷酸二氢钾。

４．７磷酸氢二钾。

／氢氧化钠：称取氢氧化钠，并用水稀释至。

４．８０．１ｍｏＬ４１０００ｍＬ

ｇ

乙腈水（，体积比）。

４．９＋１５＋２

乙腈水（，体积比）。

４．１０＋３０＋７０

／磷酸盐缓冲溶液（）：称取磷酸氢二钾，超纯水溶解，稀释至，

４．１１０．０５ｍｏｌＬＨ＝８．５８．７１０００ｍＬ

ｐｇ

用磷酸二氢钾调节至。

ｐＨ８．５±０．１

／磷酸盐缓冲溶液（）：称取磷酸二氢钾，超纯水溶解，稀释至，

４．１２０．０２５ｍｏｌＬＨ＝７．０３．４１０００ｍＬ

ｐｇ

用氢氧化钠调节至。

ｐＨ７．０±０．１

／乙酸铵溶液（）：称取乙酸铵，超纯水溶解，稀释至，用甲酸

４．１３０．０１ｍｏｌＬＨ＝４．５０．７７１０００ｍＬ

ｐｇ

调节ｐＨ至４．５±０．１。

４．１４１１种青霉素族抗生素标准品：羟氨苄青霉素、氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、乙氧萘胺青

１

／—

犌犅犜２１３１５２００７

霉素、苯唑青霉素、苄青霉素、苯氧甲基青霉素、苯咪青霉素、甲氧苯青霉素、苯氧乙基青霉素，纯度均大

于等于９５％。

种青霉素族抗生素标准储备溶液：分别称取适量标准品（），分别用乙腈水溶液（）溶

４．１５１１４．１４４．１０

解并定容至，各种青霉素族抗生素浓度为／，置于冰箱避光保存，保存期。

１００ｍＬ１００ｍＬ－１８℃５ｄ

μｇ

种青霉素族抗生素混合标准中间溶液：分别吸取适量的标准储备液（）于容量瓶

４．１６１１４．１５１００ｍＬ

中，用磷酸盐缓冲溶液（）定容至刻度，配成混合标准中间溶液：各种青霉素族抗生素浓度为：羟氨苄

４．１２

青霉素／，氨苄青霉素／，苯咪青霉素／，甲氧苯青霉素／，苄青霉

５００ｎｍＬ２００ｎｍＬ１００ｎｍＬ１０ｎｍＬ

ｇｇｇｇ

素／，苯氧甲基青霉素／，苯唑青霉素／，苯氧乙基青霉素／，邻

１００ｎｍＬ５０ｎｍＬ２００ｎｍＬ１０００ｎｍＬ

ｇｇｇｇ

氯青霉素／，乙氧萘青霉素／，双氯青霉素／。置于冰箱避光保存，

１００ｎｍＬ２００ｎｍＬ１０００ｎｍＬ－４℃

ｇｇｇ

保存期。

５ｄ

混合标准工作溶液：准确移取标准中间溶液（）适量，用空白样品基质配制成不同浓度系列的

４．１７４．１６

混合标准工作溶液（用时现配）。

固相萃取小柱，或相当者：，。使用前用甲醇和水预处理，即先用甲

４．１８ＯａｓｉｓＨＬＢ５００ｍ６ｍＬ２ｍＬ

ｇ

醇淋洗小柱，然后用１ｍＬ水淋洗小柱。

５仪器

液相色谱质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源。

５．１

５．２旋转蒸发器。

５．３固相萃取装置。

５．４离心机。

５．５均质器。

５．６旋涡混合器。

５．７Ｈ计。

ｐ

５．８氮吹仪。

６试样制备与保存

取代表性样品，用组织捣碎机充分捣碎，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于－１８℃以下冷冻

存放。

７检测步骤

７．１提取

７．１．１肝脏、肾脏、肌肉组织、鸡蛋样品

称取约试样（精确到）于离心管中，加入乙腈水溶液（），均质，

５ｇ０．０１ｇ５０ｍＬ１５ｍＬ４．９３０ｓ

／离心，上清液转移至离心管中；另取一离心管，加入乙腈水溶液（），

４０００ｒｍｉｎ５ｍｉｎ５０ｍＬ１０ｍＬ４．９

洗涤均质器刀头，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡

，／离心，上清液合并至离心管中，重复用乙腈水溶液（）洗涤刀

１ｍｉｎ４０００ｒｍｉｎ５ｍｉｎ５０ｍＬ１０ｍＬ４．９

头并提取一次，上清液合并至离心管中，用乙腈水溶液（）定容至。准确移取入

５０ｍＬ４．９４０ｍＬ２０ｍＬ

１００ｍＬ鸡心瓶。

７．１．２牛奶样品

称取样品（精确到）于离心管中，加入乙腈（），均质提取，

１０ｇ０．０１ｇ５０ｍＬ２０ｍＬ４．９３０ｓ

／离心，上清液转移至离心管中；另取一离心管，加入乙腈水溶液（），

４０００ｒｍｉｎ５ｍｉｎ５０ｍＬ１０ｍＬ４．９

洗涤均质器刀头，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡

，／离心，上清液合并至离心管中，重复用乙腈水溶液（）洗涤刀

１ｍｉｎ４０００ｒｍｉｎ５ｍｉｎ５０ｍＬ１０ｍＬ４．９

２

／—

犌犅犜２１３１５２００７

头并提取一次，上清液合并至离心管中，用乙腈水溶液（）定容至。准确移取入

５０ｍＬ４．９５０ｍＬ２５ｍＬ

１００ｍＬ鸡心瓶。

将鸡心瓶于旋转蒸发器上（水浴）蒸发除去乙腈（易起沫样品可加入饱和氯化钠溶液）。

３７℃４ｍＬ

７．２净化

立即向已除去乙腈的鸡心瓶中加入磷酸盐缓冲溶液（），涡旋混匀，用／

２５ｍＬ４．１１１ｍｉｎ０．１ｍｏｌＬ

氢氧化钠调节为，以／的速度通过经过预处理的固相萃取柱，先用磷酸盐缓冲溶

ｐＨ８．５１ｍＬｍｉｎ２ｍＬ

液（）淋洗次，再用超纯水淋洗，然后用乙腈洗脱（速度控制在／）。将洗脱液

４．１１２１ｍＬ３ｍＬ１ｍＬｍｉｎ

于下氮气吹干，用／磷酸盐缓冲溶液（）定容至，过滤膜后，立即用

４５℃０．０２５ｍｏｌＬ４．１２１ｍＬ０．４５ｍ

μ

液相色谱质谱／质谱仪测定。

７．３测定

７．３．１液相色谱条件

色谱柱：柱，（内径），粒度，或相当者。

７．３．１．１Ｃ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ５ｍ

１８μ

流动相：组分是