HY/T 147.3-2013 海洋监测技术规程 第3部分：生物体

ICS07.060

A45

中华人民共和国海洋行业标准

/—

HYT147.32013

海洋监测技术规程

:

第部分生物体

3

ㅤㅤㅤㅤ

Codeofracticeformarinemonitorintechnolo———

pggy

:

Part3Oranism

g

2013-04-25发布2013-05-01实施

国家海洋局发布

/—

HYT147.32013

目次

前言…………………………Ⅲ

1范围………………………1

2规范性引用文件…………………………1

3术语和定义………………1

4一般规定…………………1

5总汞的测定———热分解冷原子吸收光度法……………2

、、、、、、、、、———

6铜铅锌镉铬锰镍砷铝铁的同步测定电感耦合等离子体质谱法………5

7多环芳烃…………………8

8酞酸酯类化合物…………………………20

9有机磷农药的测定———气相色谱法……………………28

10有机锡的测定———气相色谱法………………………32

———/

11多溴联苯醚的测定气相色谱质谱联用法………36

()

附录A规范性附录记录表……………41

()

附录B资料性附录方法检出限………………………54

ㅤㅤㅤㅤ

()———

附录C资料性附录EROD的测定动力学荧光法………………56

()

附录D资料性附录海洋生物体内总乙酰胆碱酯酶的测定…………61

图种标准溶液谱图…………

118PAHsGC-MS-SIM11

图种标准溶液气相色谱图…………………

216PAHs16

图3PAHs标准溶液液相色谱图………………………19

/

图46种酞酸酯标准溶液气相色谱质谱图……………24

图56种酞酸酯标准溶液气相色谱图……………………27

图614种有机磷农药标准溶液气相色谱图……………31

图有机锡化合物标准溶液气相色谱图………………

735

/

图多溴联苯醚标准溶液气相色谱质谱图……………

840

表1自动测汞仪分析条件…………………3

表微波消解仪工作条件…………………

26

、

表3ICP-MS测定各元素的重复性再现性及回收率……………………7

表4GC-MS测定PAHs的保留时间与定量离子………11

、

表5GC-MS测定PAHs的重复性再现性及回收率…………………12

、

表6GC-FID测定PAHs的重复性再现性及回收率…………………16

表7HPLC梯度洗脱程序………………20

Ⅰ

/—

HYT147.32013

表8HPLC测定PAHs的重复性相对标准偏差………20

表9GC-MS测定酞酸酯的定量离子参数………………24

、

表10GC-MS测定酞酸酯的重复性再现性及回收率…………………24

、

表11GC-ECD测定酞酸酯的重复性再现性及回收率………………28

、

表12GC-FPD测定有机磷农药的重复性再现性及回收率…………31

、

表13GC-FPD测定有机锡化合物的重复性再现性及回收率………35

表14GC-MS测定多溴联苯醚的保留时间及特征离子………………39

、

表15GC-MS测定多溴联苯醚的重复性再现性及回收率……………39

表A.1生物体样品汞分析记录表………………………41

表A.2生物体样品中分析记录表…………………42

表A.3生物样品中多环芳烃的内标工作曲线记录表…………………43

表A.4生物样品中多环芳烃分析记录表………………44

表A.5生物样品中多环芳烃工作曲线记录表…………45

表A.6生物样品中多环芳烃分析记录表………………46

表A.7生物样品中酞酸酯分析记录表…………………47

表A.8生物样品中酞酸酯标准曲线记录表……………48

表A.9生物样品中酞酸酯分析记录表…………………49

表A.10生物样品中有机磷农药标准曲线记录表……………………50

ㅤㅤㅤㅤ

表A.11生物样品中有机磷农药分析记录表…………51

表A.12生物样品中有机锡化合物分析记录表………52

表A.13生物样品中多溴联苯醚分析记录表…………53

表B.1测定方法检出限…………………54

表C.1EROD现场采样记录表…………59

表C.2EROD分析记录表………………60

表D.1AchE现场采样记录表…………63

表D.2AchE分析记录表………………64

Ⅱ

/—

HYT147.32013

海洋监测技术规程

:

第部分生物体

3

1范围

/、、。

HYT147的本部分规定了鱼虾贝类等海洋生物体监测项目的分析方法

、。

本部分适用于远海近海及河口海洋生物的监测

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/—():

GBT6379.22004测量方法与结果的准确度正确度与精密度第部分确定标准测量方

2

法重复性与再现性的基本方法

:

海洋监测规范第部分总则

GB17378.11

:

海洋监测规范第部分数据处理与分析质量控制

GB17378.22

:、

海洋监测规范第部分样品采集贮存与运输

GB17378.33

:

海洋监测规范第部分生物体分析

GB17378.66ㅤㅤㅤㅤ

3术语和定义

和界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

GB17378.1GB17378.2

3.1

海洋生物样品rinebioloicalsamle

magp

远海、,、、。

近海及河口的海洋生物体包括鱼虾贝类等海洋生物体

3.2

冷冻干燥freeze-drin

yg

,。

将待干燥物快速冻结后再在高真空条件下将其中的冰升华为水蒸气而去除的干燥方法由于冰

,()。

的升华带走热量使冻干整个过程保持低温冻结状态有利于保留一些生物样品如蛋白质的活性

4一般规定

4.1样品采集

、、、。

样品的采集制备贮存运输及预处理按和的相关规定执行

GB17378.3GB17378.6

4.2试剂和材料

本部分实验用品应按下述要求处理:

)、、、,;

a实验用带刻度试管浓缩瓶移液管容量瓶等在使用前应进行校准

)、,,,;

b玻璃容器用具应用水冲洗用洗涤剂洗涤再用超纯水洗净烘干或自然晾干

1

/—

HYT147.32013

)、;

c试剂有机溶剂按测项具体分析方法的要求进行纯化

)所用试剂和溶剂宜是同一厂家生产的同类产品;

d

),,。

e为保证实验的重现性和再现性重蒸馏有机试剂应混匀实验条件应一致

4.3实验室常规设备

实验室常用仪器与设备如下:

)冰箱;

a

)冰柜;

b

)();

c电加热板或电炉

)分析天平;

d

)();

e高精度电子天平感量为0.1mg

)高精度微量移液器(,);

f10L~100L100L~1000L

μμμμ

)微波炉;

g

)马弗炉;

h

)超纯水系统;

i

)亚沸蒸馏器;

j

)离心机;

k

)真空抽滤泵;

l

)过滤装置;

m

)生物组织研磨机;

n

)冷冻干燥机。ㅤㅤㅤㅤ

o

4.4质量保证与质量控制

质量保证与质量控制措施包括:

)样品测定过程中应加测现场空白样;

a

):,;

b现场平行样现场平行样应占样品总量的5%~10%每次采样至少采两组平行样

):、,的空白试验;

c设备材料空白当使用新采样设备新容器和新材料时应进行设备材料

),,;

分析空白应占样品总数的样品少于个时每批至少带一个分析空白

d5%20

)(,);

每批样品应按样品总数的样品不足个时应至少做个做加标回收率的测定

e2%102

),;

当样品量超过个时应进行平行三份样品的分析

f20

),,

质控样的测定值和加标回收率超出控制线时应查找原因在未找出原因之前不得继续分析

g

样品。

4.5精密度与正确度

精密度与正确度的测定和计算按照/—的规定执行。

GBT6379.22004

5总汞的测定———热分解冷原子吸收光度法

———,、,。

警告汞化合物大多具有高毒性易吞食吸入或通过皮肤吸收应注意汞试剂的处理

5.1适用范围

、。。

本方法适用于远海近海及河口海洋生物样品中总汞的测定方法检出限参见表B.1

2

/—

HYT147.32013

5.2方法原理

,,,

在热分解管中样品被充分干燥后经热分解释放其中的汞产生的气体被载气导入催化炉完成氧

、,。

化作用并脱去卤素硫氧化物和氮氧化物后进入混汞器发生汞齐化反应被固定混汞器加热释放出汞

,,。

蒸汽并由载气载入吸收池在波长253.7nm处测定

5.3试剂及其配制

,,。

5.3.1除非另有说明所用试剂均为优级纯水为二次蒸馏水或超纯水或纯度相当的水

():。

5.3.2氯化汞HCl预先在硫酸干燥器中干燥

g2

():(,/)。

5.3.3硝酸溶液1+19移取50mL硝酸HNO=1.42mL加入到950mL水中

3ρg

():(,/)。

5.3.4硝酸溶液1+199移取5mL硝酸HNO=1.42mL加入到995mL水中

3ρg

(/,):(),

汞标准贮备溶液以汞计称取氯化汞于烧杯中用

5.3.51.00mmL0.13545.3.2100mL

gg

(),,(),。

少许硝酸溶液5.3.3溶解全量转入100mL容量瓶中加硝酸溶液5.3.3定容至标线混匀盛于

棕色硼硅玻璃试剂瓶中。

(/,):()

5.3.6汞标准中间溶液10.00mL以汞计移取1.00mL汞标准贮备溶液5.3.5于100mL的

g

,(),。

容量瓶中加硝酸溶液5.3.3定容至标线混匀

(/,):()

5.3.7汞标准使用溶液1.00mL以汞计量取10.00mL汞标准中间溶液5.3.6于100mL的

g

,(),。。

容量瓶中加硝酸溶液5.3.3定容至标线混匀此溶液使用前配制

5.4仪器及设备

ㅤㅤㅤㅤ

5.4.1自动测汞仪。

:()。

5.4.2载气氧气纯度99.99%

5.4.3移液器:,,。

10L~100L100L~1000L1mL~5mL

μμμμ

:。

5.4.4电子天平感量为0.1mg

5.4.5容量瓶:,。

100mL1000mL

5.4.6棕色硼硅玻璃试剂瓶。

5.4.7实验室常用仪器及设备。

5.5分析步骤

5.5.1自动测汞仪工作条件

仪器分析条件宜按照表进行设定。

1

表1自动测汞仪分析条件

最大进样量干燥时间干燥温度消解时间消解温度

样品类型

mgs℃s℃

湿样a

1000重量含水率

××0.6200180650

干样100010200180650

,,。

如果分析结果的相对标准偏差超过5%则消解时间需要增加30s重新分析再计算标准偏差

a

重量以计。

mg

3

/—

HYT147.32013

5.5.2标准系列溶液配制

,、、、、、、

取个容量瓶分别加入

7100mL0mL0.20mL0.50mL1.00mL5.00mL10.00mL

(),(),。

20.00mL汞标准使用溶液5.3.7加硝酸溶液5.3.4定容至标线混匀配制的标准系列溶液浓度

为/、/、/、/、/、/、/。

0mL0.0020mL0.0050mL0.010mL0.050mL0.10mL0.20mL

ggggggg

5.5.3样品分析

5.5.3.1仪器预热去汞

,,,

按照仪器工作条件不加任何样品对样品舟进行空烧直到吸光值低于0.003以去除测汞仪内的

残留汞。

5.5.3.2标准曲线的绘制

,,,和标准溶

分别取汞标准系列溶液各100L依次进样测定吸光值得到汞标准空白的吸光值A0

μ

,(—),()

液的吸光值A以吸光值AA为纵坐标汞的量为横坐标绘制标准曲线给出线性回归方程并计

ii0

算线性回归系数。

5.5.3.3样品测定

,,

称取一定量生物样品于样品舟中按照选定的仪器工作条件进行测定根据测得的吸光值查标准曲

线计算生物样品中总汞的含量。

5.5.4样品含水率测定

ㅤㅤㅤㅤ

,。

湿样分析应同步测定样品含水率样品含水率的测定方法按照GB17378.6中相关规定执行

5.6记录与计算

,,

将样品吸光值和空白吸光值的测定结果记入表中以标准系列溶液的含量为纵坐标

AwAbA.1

,。

其对应的吸光值为横坐标反演出样品中目标化合物的含量mHg

()。

按式计算生物样品中汞含量

1

m

Hg…………()

w=1

Hgm1000

×

式中:

-9

———,();

wHg生物样品中总汞含量质量分数10

———,();

mHg测得汞量单位为纳克ng

———,()。

m样品称取量单位为毫克mg

5.7精密度与正确度

,、,

四家实验室测定同一生物样品重复性相对标准偏差为1.78%再现性相对标准偏差为2.42%回

收率为95%~102%。

5.8注意事项

本方法操作过程中应注意以下事项:

———(),、;

所有的盛装样品的容器都需要用硝酸1+3浸泡24h使用前用水冲洗干净晾干

———容器材质应为硬质玻璃或者聚四氟乙烯;

———,,。

生物样品中有机质含量较高时在保证测定结果的条件下宜尽量减少进样量

4

/—

HYT147.32013

、、、、、、、、、———

6铜铅锌镉铬锰镍砷铝铁的同步测定电感耦合等离子体质谱法

6.1适用范围

、、、、、、、、、、。

本方法适用于远海近海及河口海洋生物样品中铜铅锌镉铬锰镍砷铝铁的同步测定方

法检出限参见表B.1。

6.2方法原理

,

样品经消解后所得到的酸性消化液经由蠕动泵提升进入ICP-MS样品雾化后以气溶胶的形式进

,、、、,

入等离子体区域经过蒸发解离原子化电离等过程转化为带正电荷的离子后被导入高真空的质谱

,(/),

部分待测离子经质量分析器按质荷比mz的大小过滤分离后进入离子检测器根据离子强度的大小

计算得到样品中待测元素的浓度。

6.3试剂及其配制

,,。

6.3.1除非另有说明所用试剂均为优级纯水为去离子水或超纯水或纯度相当的水

硝酸():/。

6.3.2HNO=1.42mL

3ρg

过氧化氢():。

6.3.3HO30%

22

硝酸溶液():硝酸()与水混合。

6.3.41+991mL6.3.299mL

():()。

6.3.5硝酸溶液1+1硝酸6.3.2与等体积水混合

75989137140205

6.3.6多元素混合调谐溶液(/):、、、、、等元素的浓度均为/

1.00LLiCoYBaCeTl1.00L

μgμg

ㅤㅤㅤㅤ

的多元素混合调谐溶液。

(/):、、、、、、、、、/

6.3.7标准贮备溶液100.0mL铜铅锌镉铬镍砷铁铝锰的浓度分别为100.0mL的

gg

,。

单元素或多元素标准贮备溶液溶剂为硝酸溶液

(/):(),

6.3.8标准中间溶液1.000mL移取10.00mL标准贮备溶液6.3.7于100mL容量瓶中用硝

g

(),,。

酸溶液定容冷藏保存有效期个月

6.3.54℃1

(/):(),

6.3.9标准使用溶液0.1000mL移取10.00mL标准中间溶液6.3.8于100mL容量瓶中用

g

(),,。

硝酸溶液6.3.5定容4℃冷藏保存临用前配置

6457289103115159209

(/):、、、、、、、中一种或多种元素且

6.3.10内标溶液10.0mL含有LiScGeYRhInTbBi

g

每种元素浓度均为/的内标溶液。

10.0mL

g

6.4仪器设备

(),:

6.4.1电感耦合等离子体质谱仪ICP-MS主要由下述各部分组成

———,();

样品引入系统等离子气体为氩气纯度为99.999%

———ICP离子源;

———接口及离子聚焦系统;

———质量分析器;

———检测器。

———,。

警告使用ICP离子源时注意防护高频辐射

6.4.2微波消解仪。

6.4.3具盖聚四氟乙烯坩埚。

6.4.4微波消解罐。

6.4.5实验室常用仪器与设备。

5

/—

HYT147.32013

6.5分析步骤

6.5.1样品消解

,。:

生物样品消解方法有电热板消解和微波消解可按实验室条件任选一种具体方法如下

):(),

a电热板消解称取1.000g生物组织湿样或0.2000g生物组织干样于聚四氟乙烯坩埚中

,(),。

用少量水润湿加入5mL硝酸6.3.2盖上盖子后于室温下静置24h将坩埚移至电热板

,,,()

上逐渐升温至消化取下待冷却后加入硝酸和过氧化

180℃2h~3h2mL6.3.22mL

(),,,,,

氢6.3.3盖上盖子置于电热板上180℃消化3h~5h冷却后打开盖子140℃加热蒸至

,(),,,

近干加1mL硝酸溶液6.3.5微热浸提用水将浸提液及残渣全量转入25mL比色管中

,。

用水定容至标线静置后取上清液待测

):(),

b微波消解称取1.000g生物组织湿样或0.2000g生物组织干样于微波消解罐中加少许

,(),(),,,

水润湿加入8mL硝酸6.3.22mL过氧化氢6.3.3待反应平稳后旋紧瓶盖放入微波

,,。,

消解仪中参照表进行消解消解完毕待冷却至室温后取出小心拧下盖子后将消解罐置

2

,;,,

于赶酸装置上加热赶酸若没有相应的赶酸装置将消解液全量转移至聚四氟乙烯坩埚中置

,,(),,

于电热板上加热至溶液近干时加1mL硝酸溶液6.3.5微热浸提用水将溶液及残渣全

,,,。

量转入25mL比色管中用水定容至标线混匀后静置取上清液待测

表2微波消解仪工作条件

功率升温时间温度保持时间

步骤