DB15/T 2785-2022 食用向日葵品种纯度鉴定 SNP标记法

ICS67.050

CCSX04

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2785—2022

食用向日葵品种纯度鉴定SNP标记法

Varietalverificationoftheconfectionsunflower(Helianthusannuus

L.)SNPmarkertechnology

2022-08-30发布2022-09-30实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2785—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。

本文件起草单位：三瑞农业科技股份有限公司、华智生物技术有限公司、巴彦淖尔市产品质量计量

检测中心（巴彦淖尔市天赋河套质量标准检验研究中心）、内蒙古自治区质量和标准化研究院。

本文件主要起草人：JIUHUANFENG（冯九焕）、唐顺学、陈海军、李昊佼、李新、刘劼、邬冬梅、

秀芳、侯敏、魏志恒、白君君、王祉诺、贾向春、靳存旺。

I

DB15/T2785—2022

食用向日葵品种纯度鉴定SNP标记法

1范围

本文件规定了利用单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphism,SNP）分子标记进行食用向

日葵（HelianthusannuusL.）品种纯度鉴定的术语定义、原理、仪器设备及耗材、试剂及溶液配制、

检测程序、数据采集和结果分析、鉴定结果报告等要求。

本文件适用于食用向日葵品种的纯度鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T3543.5农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

品种纯度varietalpurity

品种在特征特性或DNA分子标记基因型方面一致性的程度。通常用供检样品中本品种的个体数占检

测样品个体总数的百分率表示。

异型个体off-typeindividual

供检样品中，与本品种在DNA标记位点或一个或多个遗传性状上存在差异的个体。

单核苷酸多态性singlenucleotidepolymorphism（SNP）

基因组中基于单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性。

推荐标记recommendedmarkers

品种纯度鉴定中优先选用的具有良好基因型分型质量的标记组合。

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竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应kompetitiveallelespecificPCR（KASP）

通过引物末端特异性碱基竞争性匹配DNA模板，实现SNP基因型分型的聚合酶链式反应。

基因型分型genotyping

通过检测方法确定某品种(或遗传材料)的基因、DNA区段或遗传标记的基因型。

4原理

不同向日葵品种的基因组间存在核苷酸序列差异，其中单核苷酸（A、C、G、T）多态性(SNP)在基

因组内分布广泛、密度高，这种差异可以通过荧光标记的KASP基因型分型等技术进行检测。

利用一套多态性高、具良好基因型分型质量的推荐标记，检测供检样品中不同个体间的基因型差

异，统计供检样品中异型个体数，从而对供检样品整体的遗传一致性程度进行测算，判定品种的纯度。

5仪器设备及耗材

主要仪器设备及耗材为：

——实时荧光定量PCR仪、全自动样品快速研磨仪、高速离心机、核酸浓度测定仪、微孔板离心

机、微量移液器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、酸度计、磁力搅拌器、电子天平、冰箱等；

——96孔深孔板、384孔PCR板（白色）、微量离心管、普通枪头、封板膜、钢珠等。

6试剂及溶液配制

试剂要求

6.1.1所用试剂至少为分析纯或分子生物学纯。试剂配制用水应符合GB/T6682规定的一级水要求。

6.1.2所需试剂为十二烷基硫酸钠（SDS）、乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA•2H2O）、三羟甲基氨基甲烷

（Tris-base）、醋酸铵、三氯甲烷、异丙醇、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、乙

醇、PCRMasterMix等。

溶液配制

6.2.12mol/LTris-HCl溶液（pH8.0）：称取Tris碱242.8g，溶于850mL水中，加入浓盐酸调

pH至8.0，定容至1000mL，高压灭菌。

6.2.20.25mol/LEDTA溶液（pH8.0）：称取84.06gNa2EDTA•2H2O，溶于900mL水中，加固体NaOH

（约20g）调pH至8.0，加水定容至1000mL，高压灭菌。

6.2.310%SDS溶液：称取100gSDS，加水定容至1000mL。

6.2.4溶液I：取2mol/LTris-HCl（pH8.0）、0.25mol/LEDTA溶液（pH8.0）、10%SDS各100

mL，加水900mL，调pH至8.0，定容至1000mL。用时按2%（M/V）加入聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP-

K30）。

6.2.5溶液Ⅱ：取500g醋酸铵固体，加水定容至860mL，抽滤后放4℃冰箱备用。

6.2.62×KASPMasterMix：包括TaqDNA聚合酶、通用荧光引物、dNTP、镁离子、RO