DB41/T 1590-2018 饲料中阪崎肠杆菌的检测 EMA-PCR法

ICS65.120

B46

DB41

河南省地方标准

DB41/T1590—2018

饲料中阪崎肠杆菌的检测EMA-PCR法

2018-04-17发布2018-07-17实施

河南省质量技术监督局发布

DB41/T1590—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由河南省畜牧局提出并归口。

本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所、河南中标检测服务有限公司。

本标准主要起草人：张发旺、董鹏、郑洪、狄元冉、方忠意、刘传辉、杜红鸽。

本标准参加起草人：高延玲、李金磊、李华岑、柴磊、巩丹、郑彬、朱雷、贾松涛、韩楠、臧合英、

徐坤、杨希祥。

I

DB41/T1590—2018

饲料中阪崎肠杆菌的检测EMA-PCR法

1范围

本标准规定了饲料中阪崎肠杆菌的EMA-PCR检测方法。

本标准适用于饲料中阪崎肠杆菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.40食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

3原理

叠氮溴化乙锭（EMA）能够透过死细菌的细胞膜，在强光照射下可与其DNA发生不可逆转的结合，使

死细菌DNA不能作为模板进行PCR扩增，而活菌能进行PCR扩增。

4试剂和材料

4.1除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，试验用水符合GB/T6682一级水的要求。

4.2缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录A的A.1。

4.3改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）：见附录A的A.2。

4.42×PremixTaq缓冲液：内含TaqDNA聚合酶1.25U/25μL，4mmolMg2+，dNTP各0.4mmol。

4.5特异性引物(对)序列为：

a）上游引物：5＇-CTGCTCTGCTGACGAGTGG-3＇；

b）下游引物：5＇-CATCTCTGCAGGATTCTCTGGA-3＇。

4.6琼脂糖：电泳级。

4.7Marker2000。

4.8阪崎肠杆菌ATCC25944。

4.950×TAE缓冲液：见附录A的A.3。

4.106×上样缓冲液：见附录A的A.4。

4.11叠氮溴化乙锭（EMA，0.2mg/mL）：见附录A的A.5。

4.12溴化乙锭（10mg/mL）。

4.13灭菌离心管：1.5mL，