DB32/T 3686-2019 山羊副流感病毒3型检测技术规程

ICS65.020.30

B40DB32

江苏省地方标准

DB32/T3686—2019

山羊副流感病毒3型检测技术规程

TechnicalregulationsfordetectionofCaprineparainfluenzavirus3

2019-12-04发布2019-12-25实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3686—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由江苏省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准主要起草人：李文良、毛立、李基棕、郝飞、刘茂军、杨蕾蕾、孙敏。

I

DB32/T3686—2019

山羊副流感病毒3型检测技术规程

1范围

本标准规定了山羊副流感病毒3型（Caprineparaifluenzavirus3,CPIV3）的病原学检测（病毒核酸

的RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测）、血清学检测（血凝抑制（HI）试验）的技术要求。

本标准适用于山羊副流感病毒3型及其感染情况的实验室检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3病原学检测

3.1材料

微量移液器及吸头、DEPC水处理的离心管、吸头、PCR扩增管、TRIzol试剂、三氯甲烷、异丙醇、

DEPC处理水（用水符合GB/T6682规定）、反转录酶/TaqDNA聚合酶混合液、2×一步法RT-PCR反应缓

冲液、一步法荧光定量RT-PCR试剂盒、TAE缓冲液、琼脂糖、核酸染料、引物MF/MR、引物qMF/qMR

与探针（附录A）。

3.2仪器设备

PCR仪、荧光定量PCR仪、台式冷冻离心机、电泳仪和水平电泳槽、凝胶成相仪（或紫外透射仪）。

3.3反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）

3.3.1样品处理与RNA的提取

采集羊的鼻拭子、气管拭子或肺脏（样品的采集、保存和运输应符合NY/T541相关规定）。取200

μL待检样品液至无菌无RNA酶的EP管中，使用TRIzol试剂、RNA提取试剂盒或