GB/T 36433-2018 纺织品 山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析 荧光PCR法

ICS59.080.01

矶704

国

中华人民共和国国家标准

GB/T36433-2018

纺织品山羊绒和绵羊毛的

混合物DNA定量分析荧光PCR法

Textiles-DNAquantitativeanalysisofcashmereandwoolmixture一

FluorescencePCRmethod

2018-06-07发布2019-01-01实施

国家市场监督管理总局啦告

中国国家标准化管理委员会保叩

GB/T36433-2018

目lj昌

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由中国纺织工业联合会提出。

本标准由全国纺织品标准化技术委员会（SAC/TC209）归口。

本标准起草单位：上海出入境检验检疫局、中纺标检验认证股份有限公司。

本标准主要起草人：费静、谢璐草、隋阳华、斯颖、唐敏峰、陆维民。

I

GB/T36433-2018

纺织品山羊绒和绵羊毛的

混合物DNA定量分析荧光PCR法

1范围

本标准规定了采用荧光PCR法测定纺织品中山羊绒、绵羊毛的DNA定量检测方法。

本标准适用于纺织品棍合物中两组分山羊绒、绵羊毛含量的检测。

本标准不适用于回用、剥色的山羊绒和绵羊毛纤维，以及安哥拉山羊毛。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T16988特种动物纤维与绵羊毛混合物含量的测定

GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

聚合酶链式反应polymerasechainreaction;PCR

在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以4种单核昔酸（dNTP）为

底物，通过变性、退火、延伸的循环反应，使极少量的DNA的特定片段，在数小时内扩增出百万倍的

DNA的体外扩增链式反应。

3.2

实时荧光定量PCRreal-timefluorescencePCR

在PCR反应体系中力iJ入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，再通过曲线对未知

模板进行定量或定性分析的DNA扩增方法。

3.3

引物primer

在核酸合成反应时，作为每个多核昔酸链进行延伸的出发点并起作用的一小段单链DNA

或RNAO

3.4

TagMan探针TaqManprobe

一种荧光基团连接在探针的5’末端，而搏灭基因则在3’末端的寡核昔酸链。

注：PCR扩增时在；JU入一对可｜物的同时如｜人一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被猝灭

基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’3’外切酶活性将探针酶切｜每解，使报告荧光基团和将灭荧光基团分离，从

而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DN八链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与

GB/T36433-2018

PCR产物形成完全同步。

3.5

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到段定的阔值时所经历的循环数。

4原理

针对山羊、绵羊的线粒体DNA序列设计物种特异的引物和探针，利用实时荧光PCR技术，建立起

山羊绒、绵羊毛混合物与它们的DNA之间的对应关系。通过对混合纤维抽提出的DNA中的山羊成

分、绵羊成分进行特异性扩增，根据得到的Ct值，计算该样品中山羊绒、绵羊毛的相对含量。

5试剂

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯鼠剂，水应符合GB/T6682一级水要求。

5.1蛋白酶K、溶液：称取180mg的蛋白酶（＞30U/mg），榕于10mL水中，分装后置于一20℃冻存。

5.2二硫苏糖醇（DTT）溶液：称取1.5gDTT溶于10mL水中，分装后置于20℃冻存。

5.3－｜＝六皖基三甲基澳化镀（CTAB）：纯度＞98%。

5.4乙二胶四乙酸（EDTA）：纯度＞98%。

5.5氯化铺。

5.6氢氧化饷。

5.7三是甲基氨基