DB34/T 3244-2018 霍山石斛分子鉴定技术规程

ICS65.020

B39

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3244—2018

霍山石斛分子鉴定技术规程

ThetechnicalspecificationsformolecularindentificationofDendrobium

huoshanenseC.Z.TangetS.J.Cheng

文稿版次选择

2018-12-29发布2019-01-29实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3244—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由皖西学院提出。

本标准由安徽省林业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：皖西学院、霍山县石斛（灵芝）产业发展办公室。

本标准主要起草人：赵群、陈乃富、陈存武、韩邦兴、孙传伯、戴军、宋向文、陈乃东、姚厚军、

李世海。

I

DB34/T3244—2018

霍山石斛分子鉴定技术规程

1范围

本标准规定了霍山石斛（DendrobiumhuoshanenseC.Z.TangetS.J.Cheng）分子鉴定的术语

与定义、分子鉴定技术、资料记录和档案管理。

本标准适用于霍山石斛与河南石斛、细茎石斛、铁皮石斛、金钗石斛之间的定性分子鉴定。

鉴定材料包括以上各种石斛的根、茎、叶、花、果实以及干条、枫斗、切片和含有霍山石斛成分的

粉末。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB34/T486霍山石斛

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

特异性引物specificprimer

能特异性扩增霍山石斛ITS或trnL-trnFDNA片段的位点特异性鉴别引物。

3.2

标准物种的特异性扩增片段thespecificsequenceofstandardspecies

用特异引物CP2s和CP2a扩增出的霍山石斛DNA片段。

3.3

标准物种扩增片段的特异性位点thespecificsiteofthesequenceofstandardspecies

用特异性引物HuoS和HuoA扩增的片段中在5’→3’方向第56位的碱基G。

4分子鉴定技术

4.1仪器设备及试剂

仪器设备及试剂见附录A。

4.2溶液配制

1

DB34/T3244—2018

溶液配制方法见附录B。

4.3引物

通用引物TY2s：5’-CGCCATATTGATTGACACG-3’

通用引物TY2a：5’-GGCAGCCAACGAGAAGA-3’

特异性引物CP2s：5’-TTCGTGGGATGGGGTTC-3’

特异性引物CP2a：5’-TGCACATCCGAGCCTGA-3’

特异性引物HuoS：5’-AAAAGGGATAGGTGC-3’

特异性引物HuoA：5’-GATTTGGGTTGTGATT-3’

4.4操作程序

4.4.1DNA提取

4.4.1.1取干燥样品50mg或新鲜样品100mg。用CTAB法提取总DNA。具体过程详