YY/T 1500-2016 医疗器械热原试验 单核细胞激活试验 人全血ELISA法

ICS11.120.20

C30

中华人民共和国医药行业标准

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YYT15002016

医疗器械热原试验单核细胞激活试验

人全血ELISA法

ㅤㅤㅤㅤ

——

ProentestformedicaldevicesMonocte-activationtest

ygy

HumanwholebloodELISAmethod

2016-07-29发布2017-06-01实施

国家食品药品监督管理总局发布

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YYT15002016

引言

。

热原检测是医疗器械生物学安全评价中的重要项目医疗器械热原反应主要分为内毒素介导的热

原反应和非内毒素介导的热原反应。

。,

致热原分为外致热原和内致热原常见的致热原多为外致热原外致热原进入人体后可激活体内

、,()、()、()

单核细胞巨噬细胞等使其产生白细胞介素1IL-1白细胞介素6IL-6肿瘤坏死因子αTNFα

ββ

。,,

等内致热原内致热原可通过血脑屏障直接作用于体温调节中枢使体温调定点上移机体产热增多

-

,。

散热减少从而引起发热

单核细胞激活试验()用于对能激活人单核细胞或单个核细胞使其释放出诸如促炎性细胞因

MAT

子、、。

和之类的内源性介质的物质进行检测或定量而这些细胞因子会导致发热性病

IL-1IL-6TNF-α

β

。,。。

症因此可检测出试验样本中存在的热原本标准在附录中给出了单核细胞激活试验指南

MATA

,,

年欧洲药典收录了体外热原检查法美国也接受了种基于人免疫细胞的注射用药热

2009FDA5

。、,

原体外试验法这些方法采用人全血成分血或细胞系等为细胞源检测其与受试物接触孵育后产生的

,。(/)

和等内致热原国际标准化组织技术委员会的工作组一份文件

IL-1IL-6TNF-αISOTC19416

β

表述到,、,。

的检测具有较高的信噪比是较好的细胞因子热原标志物本标准在附录中给出

IL-6IL-1βB

了用于医疗器械热原检测的人全血IL-1β法示例。

ㅤㅤㅤㅤ

Ⅱ

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YYT15002016

医疗器械热原试验单核细胞激活试验

人全血ELISA法

1范围

/。

本标准给出了用人全血ELISA法测定医疗器械材料中致热原的试验方法

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/:

医疗器械生物学评价第部分样品制备与参照样品

GBT16886.1212

3概述

/,/,

医疗器械材料与人全血接触后医疗器械材料中所含的致热原激活血液中的单核细胞被激活的

,、。

单核细胞可产生内致热原如和等通过法测定接触后全血中内致热原的

IL-1IL-6TNFαELISA

β

,,/

量并将单核细胞对供试品的反应和对内毒素标准品的反应进行比较间接反映出医疗器械材料中所

ㅤㅤㅤㅤ

含的热原物质的量。

4全血来源和质量要求

4.1全血

全血应符合和要求的混合全血。

4.24.3

4.2献血者的质量要求

、、。

献血者要在符合有关知情健康安全以及伦理相关强制性要求的前提下满足下列合格准则供献

,。

血者要自述健康状况良好并在献血前至少周无细菌或病毒感症状献血者在献血前内没有服

148h

,。

用过非甾体类抗炎药物并在献血前7d内没有服用甾体类抗炎药物服用过免疫抑制剂或其他已知

。。

能影响读取对象的药物的人不宜作为献血者献血应根据国家输血要求检验血液感染标志物

4.3混合全血的质量要求

,,,

混合全血应来自于至少名献血者如可行最好是名或更多献血者从每一供血者取大约等体

48

。:,

积的血液质量要求如下采血后内用其对标准内毒素几何稀释的至少个浓度的内毒素溶液

4h4

(//)。

如在的浓度范围内绘制剂量反应曲线该剂量反应曲线应满足中所

0.01IUmL~4IUmL--7.2

述的标准曲线的个准则。

2

5器具

。

用一个确认过的过程在干热烤箱中将所有玻璃器具和其他耐热器具除热原通常使用的时间和温

1

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YYT15002016

。,,

度为250℃至少持续30min若使用塑料器具如微孔板和微量加样器配套的吸头等应使用标明无

可检测热原并且对该试验无干扰的器具。

6样品制备

、、。

6.1液体凝胶角膜接触镜和冠脉支架等小型器械推荐采用直接接触法

/,,/

6.2其他器械材料置无热原玻璃器皿内加入无菌无热原生理盐水按GBT16886.12的原则制备供

试液。

:,。

注如采用浸提液法使用者宜对所选用的浸提方法的适宜性进行确认

7预试验

7.1总则

,,:();

为确保该试验的精密度和有效性应进行预试验以确保标准曲线接受准则得到满足见7.2供

();()。

试品不会对试验有干扰见7.3试验能检测内毒素污染物和非内毒素污染物见7.4

7.2标准曲线接受准则的保证

。

用内毒素标准溶液制备至少种内毒素浓度来得出标准曲线内毒素标准溶液的每种浓度至少进

4

。。

行个平行试验用作本底读数的未加入内毒素标准溶液的本底液内毒素含量宜尽量低该标准曲线

3

有两个可接受准则:

———,ㅤㅤㅤㅤ();

剂量取log值后反应的回归应有统计学意义p<0.01

———,()。

剂量取log值后反应的回归不应与线性发生显著性偏离p>0.05如果是对某一的四参数

,。

loistic曲线进行分析所观察的曲线不应显著偏离用常规统计方法计算得到的理论曲线

g

7.3干扰因素