DB44/T 2207-2019 辣椒品种抗辣椒脉斑驳病毒鉴定技术规程

ICS65.020.20

B31

DB44

广东省地方标准

DB44/T2207—2019

辣椒品种抗辣椒脉斑驳病毒鉴定技术规程

Theregulationforresistanceevaluationofpeppertochilliveinalmottlevirus

2019-10-31发布2020-01-31实施

广东省市场监督管理局发布

DB44/T2207—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准附录A为规范性附录，附录B、C、D为资料性附录。

本标准由广东省农业农村厅提出并归口。

本标准主要起草单位：广东省农业科学院植物保护研究所、湖南省植物保护研究所。

本标准主要起草人：何自福、汤亚飞、佘小漫、刘勇、蓝国兵、邓铭光、于琳、李正刚。

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辣椒品种抗辣椒脉斑驳病毒鉴定技术规程

1范围

本标准规定了辣椒品种抗辣椒脉斑驳病毒（Chilliveinalmottlevirus，ChiVMV）鉴定技术的术语与

定义、毒原准备、室内抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定报告撰写。

本标准适用于辣椒（CapsicumannuumL.）品种及材料对辣椒脉斑驳病毒的抗性室内鉴定及评价。

2术语与定义

下列术语和定义适合于本标准。

2.1

辣椒脉斑驳病毒Chilliveinalmottlevirus，ChiVMV

辣椒脉斑驳病毒为马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus）成员，具有马铃薯

Y病毒属成员基因组结构的典型特征，主要依靠蚜虫以非持久方式传播，也可以通过病株汁液和机械接

触等方式传播，但不能通过种子传播，其自然寄主主要是辣椒、番茄等茄科作物。辣椒受到ChiVMV侵染

后，主要表现为叶脉呈现暗绿条纹，叶缘皱缩，叶片畸形、变小，幼嫩叶片症状更为明显；早期感染会

抑制植株生长，主茎和分枝上呈现暗绿条纹；最终导致落花、落果，果实畸形等。

2.2

毒原virussource

毒原ChiVMV-GD：采自广东辣椒主产区的典型病样，经检测、纯化、鉴定、扩繁后，保存的用于后

续实验的样品。

2.3

人工机械摩擦接种artificialmechanicalinoculation

通过人工操作，在供试植物叶面上造成微小伤口，使病毒从伤口进入细胞内而引起发病的过程。

2.4

抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance

采用合适的技术方法，鉴定作物对特定病害的抗性水平。

3毒原ChiVMV-GD准备

从广东辣椒主产区采集表现皱缩、花叶、斑驳、褪绿等症状的病叶，经分子检测确定病样中存在

ChiVMV，然后通过人工机械摩擦接种到能产生枯斑的健康三生烟（Nicotianantabacum.cv.Samsum）

叶片上；对病样进行分离与纯化，经RT-PCR检测，测序确定无误后，将纯化的ChiVMV接种到健康辣椒植

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株上繁殖，待已接种辣椒新叶显症后，再进行RT-PCR检测，确定无误后，采集辣椒病叶，放置-80℃保

存备用。具体见附录A。

4仪器设备

电子天平，恒温培养箱，研钵，超低温冰箱，量筒，普通冰箱，PCR仪，电泳仪，凝胶成像系统，

移液器，离心机，恒温水浴锅。

5室内抗性鉴定

5.1接种室

室内抗性鉴定应具备良好的发病环境的60目防虫日光温室中进行。

5.2育苗

待测辣椒种子经10%磷酸三钠溶液（见附录D）中浸泡20min，清水冲洗后放置在28℃恒温培养箱催

芽至露白，然后直播于8cm×12cm黑色塑料育苗杯中，每杯2粒。播种用基质土为经121℃湿热灭菌消

毒30min的新鲜育苗基质土。育苗在60目防虫日光温室进行，室内温度应控制在25℃～30℃，确保幼苗

生长健壮、长势一致。

5.3鉴定品种设置

鉴定品种随机排列设置，4次重复，每个处理30株。

5.4接种

5.4.1接种时间

在辣椒3片～4片真叶期进行接种。

5.4.2接种病原制备

1g新鲜病叶或-80℃保存的病原病毒感病的发病叶组织加10mL磷酸缓冲液（0.01mol/L，pH7.2，

见附录D），在灭菌的研钵中匀浆，再经灭菌纱布过滤，其滤液为接种悬浮液。

5.4.3接种方法

在叶面上撒少量400目～600目金刚砂，然后用棉签蘸取接种悬浮液在叶片上顺叶脉方向轻轻摩擦，

再用清水将叶面多余的悬浮液和金刚砂轻轻洗去，每株接种上部2片真叶。

5.4.4接种后的管理

供试幼苗置于接种室内继续培养，保持接种室温度为25℃～30℃，自然光照，常规水肥管理。

6病情调查

6.1调查时间

接种后15d～30d进行，每隔15d调查一次。

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6.2病情分级标准

辣椒病情级别及其相对应的症状描述见表1。

表1辣椒脉斑驳病毒引起的辣椒病毒病病情分级标准

病情级别症状描述

0级全株无症状

1级心叶明脉或轻微花叶

3级少于1/3叶片花叶

5级1/3～1/2叶片花叶，叶片皱缩

7级